野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法及应用
【专利摘要】本发明公开了一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法及应用，该方法包括浆渣分离；微波加热提取果酸；滤膜过滤；减压浓缩；石油醚淋洗乙醇溶液溶解，滤膜超滤，超滤后用吸附树脂进行处理，得到熊果酸洗脱液；洗脱液浓缩，得浸膏，甲醇溶解过滤；超高压提取渣；得浓缩物，将浓缩物用正己烷溶解，得到滤饼；将滤饼用甲醇溶解过滤，收集过滤液；将得到的过滤液混合，利用模拟移动床色谱分离技术分离得到熊果酸和紫檀芪，本发明可以降低蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取成本，提高提取率，使用本发明提取方法，蓝莓熊果酸与紫檀芪提取率能高于60 m g/g，该方法易控制，操作简单，节约成本，通过脉冲超高压设备进行提取，提高提取率。
【专利说明】
野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法及应用
技术领域
[0001]本发明属于提取方法技术领域，尤其是涉及一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，属于天然有机化学领域。
【背景技术】
[0002]熊果酸资源广，毒性低，具有广泛的生物活性，尤其在抗癌、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、降血脂方面的作用显著，值得重视。近年来发现，熊果酸不仅对多种致癌、促癌物有抵抗作用，而且能抑制多种恶性肿瘤细胞的生长。同时，熊果酸及其衍生物还对病毒具有抑制活性。因此，熊果酸的药理学活性越来越引起药物专家们的关注。近年来随着对熊果酸研究的不断深入，使得其在临床中开始得到了广泛的应用。紫檀芪为白色或类白色粉末结晶，有着丰富的药用价值，属于血竭制品中的抗真菌活性成分，对于癌症，高血压，高血脂的治疗都有一定的效果。紫檀芪有助于阻止癌症前期对身体造成损害。
[0003]蓝莓能够延缓记忆力衰退和预防心脏病的发生，因此被人们视为超级水果，甚至列为“超级抗癌水果”。究其原因就是，在蓝莓中存在作为一种抗氧化剂和抗炎剂的熊果酸与紫檀芪，但是，目前对于蓝莓的熊果酸与紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法成本较高，提取利用率低，仍然具有很大的改进空间。
【发明内容】
[0004]本发明针对现有的技术问题，提供一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，可以降低蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取成本，提高提取率，使用本发明的提取方法，蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取率能高于60 m g/g，该方法易于控制，操作简单，节约成本，同时，通过脉冲超高压设备进行提取，提高了提取率，本发明将多种提取方法进行综合运用，提高了蓝莓的提取利用率。
[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤:
(1)野生蓝莓原料的预处理，并粉碎制浆，然后将浆渣分离；
(2)微波加热提取:将所述步骤(I)中，将浆液采用微波辅助提取的方式，利用乙醇水溶液提取，过滤、离心，制得熊果酸提取液；
(3)采用0.35微米的滤膜进行过滤，得到过滤液；
(4)将所述步骤(3)中的过滤液进行减压浓缩，回收溶剂得到浓缩物；
(5)将所述步骤(4)中的浓缩物用石油醚进行淋洗，之后用乙醇溶液溶解，滤膜超滤，超滤后用吸附树脂进行处理，得到熊果酸洗脱液；
(6)将步骤(5)中的洗脱液进行浓缩，回收溶剂，得到浸膏，
(7)将所述步骤(6)中得到的浸膏用甲醇溶解过滤；
(8)将步骤(I)中分离出的渣用超高压提取设备，以乙醇为溶剂进行提取，乙醇的质量分数浓度为70-75%;
(9)将所述步骤(8)中得到的提取液浓缩，得到浓缩物，将该浓缩物用正己烷溶解过滤，得到滤饼；
(10)将步骤(9)中的滤饼用甲醇溶解过滤，收集过滤液；
(11)将所述步骤(7)中得到的过滤液和所述步骤(10)中得到的过滤液混合，利用模拟移动床色谱分离技术分离得到熊果酸和紫檀芪。
[0006]进一步，作为优选，所述步骤(I)中，具体的预处理方法是:称取一定质量的蓝莓鲜果，用清水将其洗净，之后干燥备用，采用中草药粉碎机将其粉碎，制得蓝莓浆液，利用浆渣分离机将浆液与渣进行分离，分别得到浆液和渣;所述步骤(2)中，微波加热提取的方法是，在浆液中加入质量浓度为70%的乙醇，浆液与乙醇的体积比为1:8-12，微波的提取功率为500W，提取时间为5min，提取温度为60-70°C。
[0007]进一步，作为优选，所述步骤(8)中，以乙醇为溶剂进行提取时，所用的超高压提取设备为脉冲式超高压提取设备，其脉冲提取压力的最高值为170Mpa，脉冲提取压力的最低值为lOOMpa，脉冲频率为30-40HZ，脉冲压力下维持10-15min后，快速打开超高压提取设备的阀门，卸除压力，放出提取液。
[0008]进一步，作为优选，在所述步骤(9)中，浓缩物与正己烷的比例为1:3-8w/V ο
[0009]进一步，作为优选，所述步骤(4)与所述步骤(9)中，浓缩时的真空度均为0.Ι-Ο.12Mpa，浓缩温度为55-60 °C，浓缩物中水分控制在6%以内。
[0010]进一步，作为优选，所述步骤(7)中，浸膏与甲醇溶液的比例为1:5-8 w/V，溶解温度为65 °C，所述步骤(1 )中，滤饼与甲醇溶液的比例为1:6-7 w/V，溶解温度为70 V。
[0011]进一步，本发明还提供了一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的应用，其特征在于:其用于制备宫颈癌药物、抑制血管内皮细胞凋亡药物或者抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物。
[0012]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
本发明可以降低蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取成本，提高提取率，使用本发明的提取方法，蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取率能高于60 m g/g，该方法易于控制，操作简单，节约成本，同时，通过脉冲超高压设备进行提取，提高了提取率，本发明将多种提取方法进行综合运用，提高了蓝莓的提取利用率。
【具体实施方式】
[0013]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0014]本发明提供一种技术方案:一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤:
(I)野生蓝莓原料的预处理，并粉碎制浆，然后将浆渣分离:具体的预处理方法是:称取一定质量的蓝莓鲜果，用清水将其洗净，之后干燥备用，采用中草药粉碎机将其粉碎，制得蓝莓浆液，利用浆渣分离机将浆液与渣进行分离，分别得到浆液和渣； (2)微波加热提取:将所述步骤(I)中，将浆液采用微波辅助提取的方式，利用乙醇水溶液提取，过滤、离心，制得熊果酸提取液:其中，微波加热提取的方法是，在浆液中加入质量浓度为70%的乙醇，浆液与乙醇的体积比为1: 8-12，微波的提取功率为500W，提取时间为5min，提取温度为60-70 °C;
(3)采用0.35微米的滤膜进行过滤，得到过滤液；
(4)将所述步骤(3)中的过滤液进行减压浓缩，回收溶剂得到浓缩物，浓缩时的真空度均为0.1-0.12Mpa，浓缩温度为55-60°C，浓缩物中水分控制在6%以内；
(5)将所述步骤(4)中的浓缩物用石油醚进行淋洗，之后用乙醇溶液溶解，滤膜超滤，超滤后用吸附树脂进行处理，得到熊果酸洗脱液；
(6)将步骤(5)中的洗脱液进行浓缩，回收溶剂，得到浸膏，
(7)将所述步骤(6)中得到的浸膏用甲醇溶解过滤，浸膏与甲醇溶液的比例为1:5-8w/V，溶解温度为65 °C;
(8)将步骤(I)中分离出的渣用超高压提取设备，以乙醇为溶剂进行提取，乙醇的质量分数浓度为70-75%，其中，以乙醇为溶剂进行提取时，所用的超高压提取设备为脉冲式超高压提取设备，其脉冲提取压力的最高值为170Mpa，脉冲提取压力的最低值为lOOMpa，脉冲频率为30-40HZ，脉冲压力下维持10-15min后，快速打开超高压提取设备的阀门，卸除压力，放出提取液；
(9)将所述步骤(8)中得到的提取液浓缩，得到浓缩物，将该浓缩物用正己烷溶解过滤，得到滤饼，浓缩物与正己烷的比例为1:3-8 w/V，浓缩时的真空度均为0.1-0.12Mpa，浓缩温度为55-60°C，浓缩物中水分控制在6%以内；
(10)将步骤(9)中的滤饼用甲醇溶解过滤，收集过滤液，滤饼与甲醇溶液的比例为1:6_7 w/V，溶解温度为70 °C;
(11)将所述步骤(7)中得到的过滤液和所述步骤(10)中得到的过滤液混合，利用模拟移动床色谱分离技术分离得到熊果酸和紫檀芪。
[0015]本发明还提供了一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的应用，其特征在于:其用于制备宫颈癌药物、抑制血管内皮细胞凋亡药物或者抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物。
[0016]本发明可以降低蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取成本，提高提取率，使用本发明的提取方法，蓝莓熊果酸与紫檀芪的提取率能高于60 m g/g，该方法易于控制，操作简单，节约成本，同时，通过脉冲超高压设备进行提取，提高了提取率，本发明将多种提取方法进行综合运用，提高了蓝莓的提取利用率。
[0017]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1.一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，其包括以下步骤: (1)野生蓝莓原料的预处理，并粉碎制浆，然后将浆渣分离； (2)微波加热提取:将所述步骤(I)中，将浆液采用微波辅助提取的方式，利用乙醇水溶液提取，过滤、离心，制得熊果酸提取液； (3)采用0.35微米的滤膜进行过滤，得到过滤液； (4)将所述步骤(3)中的过滤液进行减压浓缩，回收溶剂得到浓缩物； (5)将所述步骤(4)中的浓缩物用石油醚进行淋洗，之后用乙醇溶液溶解，滤膜超滤，超滤后用吸附树脂进行处理，得到熊果酸洗脱液； (6)将步骤(5)中的洗脱液进行浓缩，回收溶剂，得到浸膏， (7)将所述步骤(6)中得到的浸膏用甲醇溶解过滤； (8)将步骤(I)中分离出的渣用超高压提取设备，以乙醇为溶剂进行提取，乙醇的质量分数浓度为70-75%; (9)将所述步骤(8)中得到的提取液浓缩，得到浓缩物，将该浓缩物用正己烷溶解过滤，得到滤饼； (10)将步骤(9)中的滤饼用甲醇溶解过滤，收集过滤液； (11)将所述步骤(7)中得到的过滤液和所述步骤(10)中得到的过滤液混合，利用模拟移动床色谱分离技术分离得到熊果酸和紫檀芪。2.根据权利要求1所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于:所述步骤(I)中，具体的预处理方法是:称取一定质量的蓝莓鲜果，用清水将其洗净，之后干燥备用，采用中草药粉碎机将其粉碎，制得蓝莓浆液，利用浆渣分离机将浆液与渣进行分离，分别得到浆液和渣;所述步骤(2)中，微波加热提取的方法是，在浆液中加入质量浓度为70%的乙醇，浆液与乙醇的体积比为1:8-12，微波的提取功率为500W，提取时间为5min，提取温度为60-70 °C。3.根据权利要求2所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于:所述步骤(8)中，以乙醇为溶剂进行提取时，所用的超高压提取设备为脉冲式超高压提取设备，其脉冲提取压力的最高值为170Mpa，脉冲提取压力的最低值为lOOMpa，脉冲频率为30-40Hz，脉冲压力下维持10-15min后，快速打开超高压提取设备的阀门，卸除压力，放出提取液。4.根据权利要求1所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于:在所述步骤(9)中，浓缩物与正己烷的比例为1:3-8 w/Vo5.根据权利要求1所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于:所述步骤(4)与所述步骤(9)中，浓缩时的真空度均为0.1-0.12Mpa，浓缩温度为55-60 °C，浓缩物中水分控制在6%以内。6.根据权利要求1所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于:所述步骤(7)中，浸膏与甲醇溶液的比例为1:5-8 w/V，溶解温度为65°C，所述步骤(1 )中，滤饼与甲醇溶液的比例为1:6-7 w/V，溶解温度为70 0C。7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种野生蓝莓中熊果酸和紫檀芪的抗肿瘤活性组分的应用，其特征在于:其用于制备宫颈癌药物、抑制血管内皮细胞凋亡药物或者抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡药物。
【文档编号】A61K36/45GK106008655SQ201610426469
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月16日
【发明人】刘巍, 关彦飞
【申请人】大兴安岭至臻尚品寒带生物技术有限公司