着色剂的保护和选择性释放的制作方法

着色剂在多种应用(包括例如某些防腐溶液的着色)中具有广泛的用途。在这些应用中，通常需要在着色产品中提供精确且均匀的着色剂含量(例如，通过减少着色剂的沉淀和/或其释放可变性)。通常还需要保护着色剂免受降解(例如，当对产品进行灭菌程序时)。此外，有时还需要检测伪造产品，确认api质量和/或效力，确认无菌，检测热应力和/或检测此类产品中的杂质。因此，本领域需要高效且有效的手段/方法来获得这些效果。

发明概述

本发明总的来说涉及可选择性释放着色剂的组合物，其允许响应于一种或多种环境刺激而从树脂中可控地释放着色剂分子。本发明的可选择性释放着色剂的组合物被设计成在特定环境中从树脂中释放着色剂。本发明的组合物还提供对环境中游离着色剂含量的控制和/或保护固定(即未释放)的着色剂免受环境化学物质的损害。本发明总的来说还涉及本文所述的组合物的制备方法和使用方法。

附图简要说明

图1示出了与无负载的树脂基质和游离的着色剂化合物相比，根据实施例1制备的着色剂-树脂酸盐复合物(colorant-resinatecomplex)的照片。

图2示出了与无负载的树脂基质和游离的着色剂化合物相比，根据实施例1制备的着色剂-树脂酸盐复合物的ftir光谱。

图3示出了实施例2中描述的选择性释放实验的结果。

图4示出了未处理的chloraprep^tm和根据实施例2的负载有黄色6号的duolite^tm着色剂-树脂酸盐复合物处理的chloraprep^tm之间的照片比较。

图5示出了根据实施例3的固定在塑料离心管内并且被聚酯novenette材料覆盖的着色剂-树脂酸盐复合物的照片。

图6示出了根据实施例3的通过hplc鉴定的染料相关提取物组分的相对总面积贡献。

发明详述

本发明总的来说涉及可选择性释放着色剂的组合物，其允许响应于一种或多种特定环境刺激而从树脂中可控地释放着色剂分子。本发明的可选择性释放着色剂的组合物在某些环境中从树脂中释放着色剂。本发明的组合物还可以提供对环境中的游离着色剂含量的精确且均匀的控制和/或保护固定(即未释放)的着色剂免受环境化学物质的损害。本发明总的来说还涉及本文所述的组合物的制备方法和使用方法。

可选择性释放着色剂的组合物可包含树脂颗粒，该树脂颗粒具有与其可逆结合的着色剂分子，在本文中可互换地称为“着色剂-树脂酸盐复合物”。

如本文所用，术语“着色剂”是指用于使材料着色的任何合适的物质，包括染料、调色剂和颜料。根据一些方面，着色剂适合与含有一种或多种防腐剂的防腐溶液一起使用，该防腐剂包括(但不限于)双胍(例如氯己定盐)。例如，根据一些方面，防腐剂可选自葡萄糖酸氯己定、乙酸氯己定、氯己定、盐酸氯己定，以及其任意组合。除氯己定/氯己定盐之外的双胍/双胍衍生物的实例包括但不限于阿来西定(alexidine)、阿来西定盐、聚己酰胺、聚己酰胺盐、聚氨丙基双胍、聚氨丙基双胍盐和其他烷基双胍。如本文所用，术语“衍生物”是指a)在结构上与第一化学物质相关并可由其衍生的化学物质；b)如果第一化合物的一个原子被另一个原子或另一组原子取代，则由类似的第一化合物形成的化合物或可以想象由另一种第一化合物产生的化合物；c)衍生自或得自母体化合物并含有母体化合物的必要元素的化合物；或d)可以在一个或多个步骤中由类似结构的初始化合物产生的化合物。例如，着色剂可适合与含有2％w/v葡萄糖酸氯己定(chg)在70％v/v异丙醇(ipa)中的溶液(如在chloraprep^tm施用器和/或其他类似的防腐剂施用器中使用的那些)一起使用。这种施用器的示例性描述可参见例如申请人的共同待决的美国申请号14/046,582、14/529,753、14/566,608、14/595,084和15/163,500；以及美国专利号5,690,958、6,536,975、8,708,983、8,899,859、9,119,946和9,572,967，其公开内容在此通过引用的方式以其整体并入本文。

根据本发明可用的着色剂的实例包括但不限于适用于医学用途的阴离子染料，如食品和药物管理局(foodanddrugadministration)批准用于食品和/或药物以及化妆品的染料(即，“d&c”或“fd&c”染料)。例如，着色剂可以选自但不限于fd&c蓝色1号(亮蓝fcf)、fd&c蓝色2号(靛蓝胭脂红)、fd&c绿色3号(固绿fcf)、fd&c红色3号(赤藓红)、fd&c红色40号(诱惑红)、fd&c黄色5号(酒石黄)、fd&c黄色6号(日落黄fcf)、d&c黄色8号(荧光素二钠盐)、d&c橙色4号以及其任意组合。可以进行组合以实现特定颜色。例如，橙色着色剂可包含fd&c红色40号和d&c黄色8号二者。

如本文所用，术语“树脂”是指能够结合(即固定)着色剂分子的任何材料。根据本发明的树脂也可适合与本文所公开的防腐溶液一起使用。根据一些方面，树脂可包含一种或多种不溶性基础聚合物单元，其具有能够形成可逆的非共价相互作用的单体。根据一些方面，树脂由一种或多种不溶性颗粒组成。

例如，树脂可包含离子交换树脂，例如阴离子交换树脂。根据一些方面，离子交换树脂可包含一种或多种离子交换聚合物。合适的离子交换树脂的实例包括但不限于具有季胺官能团的大孔聚合物基质(例如，duolite^tmap143-1083或苯乙基二乙胺)，或具有叔胺官能团的大孔共聚物基质(例如66、amberlite^tmira96或a21)。

根据一些方面，树脂可包括已经经过预处理的离子交换树脂，以产生与预期着色剂物质互补的离子配偶体，或促进与预期着色剂物质的离子配对。可用于制备根据本发明的树脂的预处理剂的实例包括但不限于含有一种或多种酸(例如盐酸)、碱(例如氢氧化钠)或盐(例如氯化钠、葡萄糖酸钠)的溶液。

如本文所用，术语“树脂酸盐(resinate)”是指已经负载有预期的最终应用所需的末端物质(例如着色剂)的树脂材料。

着色剂-树脂酸盐复合物可包含树脂颗粒，该树脂颗粒具有与其可逆结合的着色剂分子。如本文所用，术语“可逆结合”是指着色剂分子与树脂之间的缔合(association)，使得一定量的着色剂保持与树脂结合，直到缔合被某些环境刺激中断。例如，根据一些方面，至少10％、任选地至少15％、任选地至少20％、任选地至少25％、任选地至少30％、任选地至少35％、任选地至少40％、任选地至少50％、任选地至少60％、任选地至少70％、任选地至少80％、任选地至少90％、任选地至少95％、任选地100％的着色剂分子可以保持与树脂结合，直到缔合被某些环境刺激中断。根据一些方面，在环境中与树脂结合的着色剂分子和未与树脂结合的着色剂分子可保持一定的平衡，使得一定量的着色剂分子始终保持与树脂结合，直到缔合被中断。根据一些方面，着色剂分子与树脂之间的缔合可包括一种或多种非共价相互作用，包括离子相互作用、氢键、卤键、范德华力、偶极-偶极相互作用、偶极诱导的偶极相互作用、伦敦色散力、π-π相互作用、阳离子-π相互作用、疏水相互作用，以及其组合。

着色剂分子和树脂之间的缔合(例如，非共价相互作用)可以被一种或多种环境刺激中断或“打断”，在本文中可互换地称为“解离(disassociation)”。应当理解，着色剂分子和树脂之间的解离可包括从树脂中释放基本上所有的着色剂分子，或者，可选地，从树脂中仅释放一部分着色剂分子。此外，着色剂分子和树脂之间的解离可以包括使与树脂结合的着色剂分子和未与树脂结合的着色剂分子之间的平衡移动。例如，根据一些方面，当缔合被某些环境刺激中断(和/或可以观察到相应的平衡移动)时，至少10％、任选地至少15％、任选地至少20％、任选地至少25％、任选地至少30％、任选地至少35％、任选地至少40％、任选地至少50％、任选地至少60％、任选地至少70％、任选地至少80％、任选地至少90％、任选地至少95％、以及任选地100％的结合的着色剂分子可以从树脂中释放。

根据一些方面，可以基于缔合对某些环境刺激的响应性来选择着色剂-树脂酸盐复合物中的着色剂分子和树脂之间的缔合。如本文所用，术语“环境”是指着色剂-树脂酸盐复合物(例如，防腐溶液)的直接(即物理接触)周围事物。可中断着色剂-树脂酸盐复合物缔合的环境刺激的实例包括但不限于：环境的一种或多种组分的分子量、环境的温度、环境的ph、环境中一种或多种可电离基团的pka、环境的一种或多种组分的疏水性、环境的一种或多种组分的离子强度，以及其组合。

着色剂-树脂酸盐复合物缔合对各种环境刺激的响应性可以是一种或多种因素的结果，包括缔合物的类型(例如，一种或多种非共价相互作用的类型)、着色剂分子的性质(例如，组成、分子量、疏水性等)、树脂的性质(例如，组成、分子量、疏水性等)、用于制备树脂的预处理剂，以及其组合。例如，可以调整着色剂分子和树脂之间的缔合以响应于特定环境刺激或环境刺激的组合(即，被其中断或保持不被其中断)。根据一些方面，还可以调整着色剂分子和树脂之间的缔合以便控制响应于某种环境刺激或环境刺激的组合的解离的程度(例如，从树脂释放的着色剂的量和/或与树脂结合的着色剂分子和未与树脂结合的着色剂分子之间的平衡的移动)。

例如，可以选择着色剂分子和树脂之间的缔合以包括多于一种类型的非共价相互作用。以这种方式，可以调整着色剂分子从树脂中的释放，例如使得仅当存在环境刺激的某种组合时才释放分子。在另一个实例中，包括多于一种类型的非共价相互作用的缔合可以提供基于环境中存在的某些刺激的累积组合与树脂结合的着色剂分子和未与树脂结合的着色剂分子之间的平衡的可变移动。根据一些方面，着色剂分子和树脂之间的缔合可包括一种、两种、三种、四种、五种或更多种类型的非共价相互作用。

根据一些方面，存在于着色剂-树脂酸盐复合物中的所有着色剂分子可以通过相同类型的缔合与树脂结合。或者，存在于着色剂-树脂酸盐复合物中的着色剂分子的一个或多个部分可以通过与另一部分不同的缔合与树脂结合。以这种方式，着色剂分子的每个部分可以响应于独特的环境条件而解离。可选地或另外地，响应于某些环境刺激，某些着色剂分子可以以比其他着色剂分子更大的程度进行释放。

根据一些方面，着色剂-树脂酸盐复合物的一种或多种缔合可能受到着色剂-树脂酸盐复合物中存在的其他缔合的影响。例如，可以通过一种或多种其他缔合的存在和/或一种或多种其他缔合的中断来加强或减弱一种或多种缔合。在一个实例中，着色剂分子可以通过具有等效强度的至少第一缔合和第二缔合与树脂结合。在该实例中，第一缔合可以通过中断第二缔合而增强或减弱，从而改变通过第一和第二缔合结合的着色剂分子从树脂解离的程度。应当理解，在该实例中，至少第一缔合和第二缔合可以相同或不同。还应当理解，第一缔合可以可选地或另外地受到第二缔合之外的缔合(例如，该着色剂分子和树脂之间的第三缔合和/或不同着色剂分子与树脂之间的缔合)的影响。

本发明还涉及制备如本文所述的着色剂-树脂酸盐复合物的方法。该方法可包括提供离子交换树脂，任选地用预处理剂预处理离子交换树脂，以及将树脂与着色剂分子混合，从而使着色剂分子通过一种或多种缔合与树脂结合(即，使着色剂分子固定于树脂上)。

根据一些方面，任选的预处理步骤可包括将合适的离子交换树脂与预处理剂混合一定的时间量，该时间量足以改变离子交换树脂的表面性质。例如，离子交换树脂可以与预处理剂混合，使得离子交换树脂的表面被官能化，具有一种或多种官能团。应当理解，可以选择预处理剂以提供一种树脂，该树脂能够制备在着色剂分子和树脂之间具有所需的环境敏感性缔合的着色剂-树脂酸盐复合物。例如，任选的预处理步骤可包括将含有离子交换树脂颗粒的溶液与预处理剂混合一定的时间周期，洗涤混合的溶液，过滤混合的溶液，并干燥所得的树脂颗粒。

该方法还可以包括通过将着色剂分子与树脂混合足以通过一种或多种特定缔合将着色剂分子固定在树脂上的时间量而使着色剂分子与树脂结合。例如，结合步骤可包括将含有树脂颗粒的溶液与含有着色剂分子的溶液混合一定的时间周期，洗涤混合的溶液，过滤混合的溶液，并干燥所得的着色剂-树脂酸盐复合物。

根据一些方面，可选择性释放着色剂的组合物可以与施用器一起提供，例如，设计用于施加一种或多种防腐溶液的施用器。例如，施用器可包括具有一个或多个安瓿和/或类似容器的主体，其可在施用之前容纳防腐溶液。合适的施用器可参见例如申请人的共同待决的美国申请号14/046,582、14/529,753、14/566,608、14/595,084和15/163,500；以及美国专利号5,690,958、6,536,975、8,708,983、8,899,859、9,119,946和9,572,967，其公开内容在此通过引用的方式以其整体并入本文。根据一些方面，可选择性释放着色剂的组合物可以与一个或多个安瓿和/或类似容器(例如，在其一个或多个内壁上)一起提供。因此，可选择性释放着色剂的组合物可以与防腐溶液接触，以用于本文所述的任何用途。另外地或可选地，可选择性释放着色剂的组合物可以与施用器的任何部分一起提供，并且在装置启动后和施用之前与防腐溶液建立接触。

例如，根据一些方面，施用器可包括一个或多个流体计量装置，例如海绵、塞子或脱脂棉，或其他多孔材料。例如，流体计量装置可以定位在施用器的施用构件和用于容纳防腐溶液的一个或多个安瓿和/或类似容器之间。流体计量装置可以例如被配置成控制防腐溶液从一个或多个安瓿和/或类似容器流动到施用构件的速率，向防腐溶液提供染料，和/或在使用施用器期间防止玻璃碎片推动通过施用构件。根据一些方面，流体计量装置可提供有可选择性释放着色剂的组合物(例如，通过浸渍)，使得当防腐溶液流动通过流体计量装置时，可选择性释放着色剂的组合物与防腐溶液接触。

本发明还涉及使用如本文所述的着色剂-树脂酸盐复合物的方法。根据一些方面，该方法可包括将一种或多种着色剂-树脂酸盐复合物与所需产品混合。例如，着色剂-树脂酸盐复合物可以与药物产品单元混合以提供对其中的游离着色剂含量的精确且均匀的控制。另外或可选地，着色剂-树脂酸盐复合物可以与药物产品单元混合以稳定着色剂分子免受环境化学物质影响。例如，着色剂-树脂酸盐复合物可以在灭菌之前与药物产品单元混合以保护着色剂免受与灭菌相关的化学物质(例如，与使用热、蒸汽、环氧乙烷、过氧化物和/或过乙酸的灭菌相关的化学物质)的影响，其中如果着色剂不是着色剂-树脂酸盐复合物的一部分，则着色剂会降解或以其他方式被灭菌过程损害。在另一个实例中，着色剂-树脂酸盐复合物可以与药物产品单元混合以保护着色剂免受可能影响保质期的化学物质(例如，热和/或光应力，如来自uv和/或可见光的)的影响，其中如果着色剂不是着色剂-树脂酸盐复合物的一部分，则着色剂会降解或以其他方式被这些化学物质损害。

例如，根据一些方面，至少50％、任选地至少55％、任选地至少60％、任选地至少65％、任选地至少70％、任选地至少75％、任选地至少80％、任选地至少85％、任选地至少90％、任选地至少95％、任选地至少100％的着色剂在灭菌之后和/或在一定的保质期周期之后可保持不受损害。术语“保质期”是指产品可以储存而不会变得不适合其预期目的和/或不能表现出法规遵从性的时间长度。根据一些方面，保质期周期可以是至少1个月，任选地至少2个月，任选地至少3个月，任选地至少4个月，任选地至少5个月，任选地至少6个月，任选地至少7个月，任选地至少8个月，任选地至少9个月，任选地至少10个月，任选地至少11个月，任选地至少12个月，任选地至少24个月，以及任选地至少36个月。如本文所用，术语“不受损害”是指组分发挥作用足以用于特定目的的能力(例如，着色剂足以使溶液着色和/或表现出法规遵从性的能力)。

着色剂-树脂酸盐复合物还可以减少或消除着色剂分子的沉淀和/或其释放可变性。

在另一个实例中，着色剂-树脂酸盐复合物可以与药物溶液混合以确定其身份和/或质量。例如，该方法可包括将一种或多种着色剂-树脂酸盐复合物与产品混合并观察产品的颜色变化，其中颜色变化表明存在或不存在一种或多种特定的环境刺激。类似地，着色剂-树脂酸盐复合物可以与药物溶液混合以在伪造产品检测的应用中提供关于一种或多种具体成分的二元存在或不存在的视觉信息。根据本发明的着色剂-树脂酸盐复合物的示例性用途还包括但不限于活性药物成分(api)质量/效力的视觉确认、无菌的视觉确认、热应力指示、特定杂质或总杂质的检测及其组合。

虽然已经结合上面概述的示例性方面描述了本文所述的方面，但是各种替代、修改、变化、改进和/或实质等同方案，无论是已知的还是现在无法预见的，对于具有本领域至少普通技术的那些人员而言都可以变为显而易见的。因此，如上所述的示例性方面旨在是说明性的而非限制性的。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变。因此，本发明旨在涵盖所有已知或以后开发的替代、修改、变化、改进和/或实质等同方案。

因此，权利要求不旨在限于本文所示出的方面，而是与权利要求的语言一致的全部范围相符，其中以单数提及的要素，除非明确这样说明，否则并不旨在表示“一个且只有一个”，而是表示“一个或多个”。本发明通篇描述的各个方面的要素的所有结构和功能等同方案，不管是本领域普通技术人员已知的还是后来知道的，通过引用的方式明确地并入本文，并且旨在被权利要求所涵盖。此外，本文公开的任何内容都不旨在捐献于公众，无论在权利要求中是否明确地记载了这样的公开内容。除非使用短语“用于……的装置”来明确记载该要素，否则不应将权利要求要素解释为装置加功能。

此外，词语“实例”或“示例性”在本文中用于表示“用作实例、例子或说明”。本文中描述为“实例”或“示例性”的任何方面不是必然被解释为相对于其他方面是优选或有利的。除非另外明确说明，否则术语“一些”是指一个或多个。诸如“a、b或c中的至少一个”、“a、b和c中的至少一个”和“a、b、c或其任意组合”的组合包括a、b和/或c的任意组合，并且可以包括多个a、多个b或多个c。具体地，诸如“a、b或c中的至少一个”、“a、b和c中的至少一个”和“a、b、c或其任意组合”的组合包括可以是仅a、仅b、仅c、a和b、a和c、b和c、或a和b和c，其中任何此类组合可以包含a、b或c中的一个或多个成员。无论在权利要求中是否明确地记载了这样的公开内容，本文公开的任何内容都不旨在捐献于公众。

提出以下实施例以向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开内容和描述，并且不旨在限制发明人认为是其发明的范围，并且亦不旨在表示下面的实验是全部或唯一进行的实验。已经努力确保所使用的数字(例如量、尺寸等)的准确性，但是应该考虑一些实验误差和偏差。

实施例

实施例1：负载有黄色6号的duolite^tmap143-1083着色剂-树脂酸盐复合物的制备

在室温下在正常室内照明条件下进行实验。使用配有金刚石atr附件的agilentcary630ftir分光光度计从固体粉末直接收集ftir光谱。收集4000-500cm^-1的光谱，分辨率为4cm^-1。

向1l锥形烧瓶中加入250ml净化水和3.00gduolite^tmap143/1083阴离子交换树脂(dowchemicalcompany)。将烧瓶在200rpm的设定下搅拌，使树脂完全分散。向300ml玻璃烧杯中加入250ml纯净水和2.987gfd&c黄色6号(y6)(sensientcolors,inc.)。搅拌混合物直至完全溶解，装入加料漏斗中，并在30分钟内逐滴加入到搅拌中的duolite^tm树脂溶液中。加入完成后，将所得混合物再搅拌30分钟。取出搅拌棒，使着色剂-树脂酸盐复合物沉降。滗析上清液，并在搅拌下用900ml净化水稀释着色剂-树脂酸盐复合物。再次使溶液沉降，重复该过程以总共洗涤三次(3×900ml)。通过真空过滤收集深红色的着色剂-树脂酸盐复合物，并将得到的滤饼用净化水(6×100ml)洗涤并在40℃下干燥过夜，得到2.94g负载有黄色6号的树脂酸盐，为深红色固体(图1)。通过ftir光谱法表征产物(图2)。

实施例2：使用着色剂-树脂酸盐复合物以选择性地使药物溶液着色

在暴露于以下每种溶液后，评价着色剂从实施例1中获得的着色剂-树脂酸盐复合物中的选择性释放。

样品1：含有净化水的溶液

样品2：含有100％异丙醇的溶液

样品3：含有70％v/v异丙醇的溶液

样品4：含有2％w/v葡萄糖酸氯己定的水溶液

样品5：含有2％w/v葡萄糖酸氯己定在70％v/v异丙醇中的溶液(即，如在chloraprep^tm产品中使用的溶液)

为了评价每种溶液，将20mg着色剂-树脂酸盐复合物装入五个单独的玻璃柱中的每一个中。向每个柱中加入1ml五种样品溶液中的一种，收集流出物并成像。如图3所示，结果显示在所有样品中，样品5被最大程度地着色(即，含有最高水平的经释放的着色剂)，而溶液4释放极少的染料，使用样品溶液1、2或3没有释放出视觉可检测的染料。

需要有机溶剂和盐化环境以使着色剂尽可能多地释放到溶液中表明染料通过疏水性相互作用(通过增加的有机相来减弱)和离子相互作用(通过增强的溶液离子强度来减弱)与树脂结合，并且必须克服这两种相互作用才能使染料从树脂中高效释放。

在暴露于50mg负载有y6的duolite^tmap143-1083着色剂-树脂酸盐之前和之后，进行chloraprep^tm溶液(250ml)的关键化学品质量属性的评价，搅拌2小时以确保最大的离子交换。图4中示出了未处理的chloraprep^tm和负载有y6的duolite^tm着色剂-树脂酸盐复合物处理的chloraprep^tm的照片比较，显示在暴露于树脂酸盐后得到橙色着色的溶液。

如下表1中所示，在用负载有y6的duolite^tm着色剂-树脂酸盐复合物处理后，chloraprep^tm溶液的关键化学品质量属性未受显著影响。用着色剂-树脂酸盐复合物处理后，chg含量和ipa含量均未显著改变。重要的是，对chloraprep^tm溶液中葡萄糖酸盐含量(推测的经历离子交换以从树脂中释放着色剂的物质)的评估显示，在用树脂处理后没有显著变化。此外，在用负载有y6的duolite^tm着色剂-树脂酸盐复合物处理2小时后，总相关物质(trs)含量和对氯苯胺(pca)含量(特定和规定的杂质)都没有受到显著影响。这些结果表明，使溶液着色所需的总葡萄糖酸盐汇集物的部分是可忽略不计的，并且着色机制与chloraprep^tm制剂在化学上相容。

表1

实施例3：使用着色剂-树脂酸盐复合物保护着色剂免受环氧乙烷的影响

首先，根据本发明的方法制备包含66离子交换树脂(dowchemicalcompany)和d&c黄色8号(y8)(sensientcolors,inc.)的着色剂-树脂酸盐复合物。如图5所示，然后将着色剂-树脂酸盐复合物固定在塑料离心管中并用聚酯novenette材料覆盖以允许环氧乙烷(eto)气体渗透。

然后通过将聚酯脱脂棉浸入y8着色溶液中并干燥，或通过将maxtint(d&c黄色8号(y8)和fd&c红色40号(r40)的一种组合)雾化喷雾加载到由50:50的聚乙烯:聚丙烯组成的脱脂棉上来制备对照脱脂棉。将每个对照脱脂棉以与着色剂-树脂酸盐复合物相同的方式固定在塑料注射器中。将每种材料的两(2)个注射器装入三(3)个塑料灭菌袋中的每一个中并密封。一(1)个灭菌袋用作对照(未灭菌)，而其他袋经历一个循环(1xeto)或两个循环(2xeto)的eto处理。

在eto处理之后，从每个样品中提取y8并使用hplc进行定量(相对于内部杂质)。如表2中所示，所有对照(即，未经eto气体处理的)样品在hplc色谱中示出可归属于荧光素部分的单峰。在每种情况下，用1xeto气体处理导致总提取物中荧光素的减少，而第二处理(2xeto)导致荧光素的进一步减少。值得注意的是，着色剂-树脂酸盐复合物在单次eto处理后显示出更大的荧光素相对保护作用(剩余79.6％荧光素，而对于y8和y8/r40样品分别为53.4％或61.8％)。在用eto进行第二处理后，保护作用更显著(剩余65.4％荧光素，而对于y8和y8/r40样品分别为21.2％或24.1％)。

表2

对于所有测试样品，通过hplc(254nm)鉴定的提取物组分的相对总面积贡献总结在图6中。从图6中可以看出，显然eto气体处理在所有情况下都导致荧光素的化学改性，并且第二处理导致进一步的改性。重要的是，经过两个全循环，着色剂-树脂酸盐复合物对固定的荧光素提供了显著的保护，使其免于经受eto气体的化学改性。