专利名称：环烷基取代的戊二酰胺利尿剂和其制备方法
技术领域：
本发明涉及一系列环烷基取代的戊二酰胺衍生物，它们在许多治疗领域中用作利尿剂，包括治疗各种心血管疾病例如高血压，心力衰竭和肾机能不全。
本化合物为依赖锌的中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11的抑制剂。这类酶与一些肽激素，包括前房促尿钠排泄因子(ANF)的断开有关，这类因子是由心脏分泌出来并具有血管舒张能力，利尿和促尿钠排泄活性。因此，通过抑制肽链内切酶E.C.3.4.24.11，本发明化合物能够加强ANF的生物效应，而且尤其是这些化合物是有效地治疗许多疾病的利尿剂，包括治疗高血压，心力衰竭，咽峡炎，肾机能不全，经期前综合症，周期性水肿，梅尼埃尔氏病，醛甾酮过多症，(一级和一二级)肺水肿，腹水和尿钙过多症。此外，由于本化合物具有加强ANF作用的活性，它们也能够用于青光眼的治疗。本发明化合物具有对中性肽链内切酶E.C.3，4，24，11的抑制作用，进一步导致它们在其它治疗领域具有活性，例如包括治疗气喘，炎症，疼痛，癫痫，感情性疾病，痴呆和老年性精神混乱，肥胖症和胃肠疾病(尤其腹泻和过敏性肠道综合症)，调整胃酸分泌和治疗血肾素过多和白血病。
本发明化合物和其药物上可接受的盐以及能产生该化合物或其盐的生物前体具有下式
式中A组成一个4至7元的碳环，该碳环可以是饱和或单不饱和的，并且可以随意与另一个饱和或不饱和的5或6元碳环稠合;
B为(CH2)m，其中m是1至3的一个整数;
R和R4各自独立地为H，C1-C6烷基，苄基或一个可供选择的生物不稳定的酯形成基团;
R1为H或C1-C6烷基;
R2和R3各自独立地为H，OH，C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，或R2和R3连接在一起组成(CH2)1，其中r为1至4的一个整数;
Y为任意选择地具有1至6个碳原子的直链或支链的亚烷基;
R5为R6CONR9-，R6SO2NR9-，R6CO2-，R6SO9-;R7NR9CO-，R7NR9SO2-或R7OCO-;
其中R6为下式基团 R7为下式基团
R9为H，C1-C6烷基，芳基，C3-C7环烷基，杂环基，芳基(C1-C6烷基)或杂环基(C1-C6烷基);
其中R8为R9CONR9-，R9SO2NR9-，R13R14N-(CH2)P-或R9O-，其中R9定义同上;
R10和R11各自独立地为H或C1-C6烷基;或R10为H和R11是由OH，SH，SCH3，NH2，芳基(C1-C6烷基)OCONH-，NH2CO-，CO2H，胍基，芳基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者R10和R11通过碳原子相连接而结合成5元或6元碳环，这个碳环可以是饱和的或单不饱和的，可以任意选择地由C1-C6烷基取代的或与另外的5或6元饱和或不饱和碳环稠合;或R10为H，n为0，R8和R11连接成一个2-(N-COR9-4-氨基吡咯烷基);
R12为R13R14NCO-，R9OCO-，R9OCH2-或杂环基，其中R9定义如上;
R13和R14分别独立地为H，C1-C6烷基，C3-C7环烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，C2-C6烷氧烷基，氨基(C1-C6烷基)，杂环基或杂环基(C1-C6烷基)，或者R13和R14通过氮原子相连接而结合成吡咯烷基，哌啶子基，吗啉代，哌嗪基，N-(C1-C4烷基)哌嗪基，吡咯基，咪唑基，吡唑基或三唑基;
n是0或1;
p是0或1至6的一个整数;
q是0，1或2。
除另有指出外，在上面的定义中，具有3个或更多的碳原子的烷基可以是直链的或支链的。本文中所用术语芳基是指可以被任意选择地取代的芳香烃基例如苯基，萘基或二苯基，例如被下列取代基单或多取代，这些取代基如OH，CN，CF3，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤素，氨基甲酰基，氨基磺酰基，氨基，一或二(C1-C4烷基)氨基或(C1-C4烷酰基)氨基。卤素指氟，氯，溴或碘。
术语杂环基是指含有氮，氧或硫的5元或6元杂环基，除另有指明外，该环可以是饱和或不饱和的，并且在环中可任意选择地包括一个另外的氧原子或一至三个氮原子，以及可任意选择地与苯稠合或由例如一个或多个卤素，C1-C4烷基，羟基，氨基甲酰基，苄基，氧，氨基或一或二(C1-C4烷基)氨基或(C1-C4烷酰基)氨基所取代。杂环基的具体例子包括吡啶基，哌嗪基，嘧啶基，哒嗪基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，呋喃基，四氢呋喃基，四氢吡喃基，二噁烷基，噻吩基，噁唑基，异噁唑基，吲哚基，异二氢吲哚基，喹啉基，喹喔啉基，喹唑啉基和苯并咪唑基，它们分别可以如上面所限定的任意选择地被取代。
式(Ⅰ)化合物可以含有几个不对称中心，因此存在着对映体和非对映体。本发明不仅包括异构体混合物，还包括各自的异构体。相对于酰胺连接的关系，取代基R2，R3和CO2R4可以呈顺式或反式几何异构形式。
含有酸性中心的式(Ⅰ)化合物在药物上可接受的盐是与碱形成的非毒性盐。例子包括碱金属盐例如钠，钾或钙盐，或者与胺例如二乙胺形成的盐。同样具有碱中心的化合物也能够与药物上可接受的酸形成酸加成盐。这类例子包括盐酸盐或溴酸盐，硫酸盐或硫酸氢盐，磷酸盐或磷酸氢盐，乙酸盐，柠檬酸盐，富马酸盐，葡萄糖酸盐，乳酸盐，马来酸盐，琥珀酸盐和酒石酸盐。
在上面定义中，生物前体术语是指式(Ⅰ)化合物的药物上可接受的可生物降解衍生物，当经给药于动物或人体后，其在体内将会转化成式(Ⅰ)化合物。
式(Ⅰ)化合物中较好的基团为其中A是(CH2)4，R1是H和B是(CH2)2，即为下式(Ⅱ)的化合物，其中R，R2，R3，R4，Y和R5定义如同式 式(Ⅰ)和式(Ⅱ)的较佳化合物为式中R和R4都为H(二酸)，以及它们的生物不稳定的单或二酯衍生物，其中R和R4中的一个或全部为生物不稳定的酯形成基团。
术语生物不稳定的酯形成基团的定义是本领域皆知的定义，是指提供在体内能够容易被断开，以释放出其中R和R4都为H的式(Ⅰ)的相应二酸的酯的这样一种基团。许多这类酯基团例如在青霉素领域或在ACE-抑制剂抗高血压剂中都是已知的。
在式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物中，这类生物不稳定前药物的酯在提供适合于口服给药的式(Ⅰ)化合物方面尤其有利。可通过普通动物或在玻璃试管内对酶水解的研究，来测定任何具体酯形成基团的稳定性。可见，对于所需的最佳效果来说，酯应该是仅仅在吸收后才被水解，这种酯应该是抗拒在吸收前由于消化酶的作用而出现水解，然而该酯通过例如肝的酶类的作用应该容易地被水解。这样的话，经口服吸收后，可释放出活性二酸进入血流中。
除了低级烷基酯(尤其是乙基)和苄基酯外，合适的生物不稳定酯还包括烷酰氧基烷基酯，包括烷基，环烷基和其芳基取代的衍生物，芳基氧烷基酯，芳酰氧基烷基酯，芳烷氧烷基酯、芳基酯、芳烷基酯和囟代烷基酯，其中所说的烷酰基或烷基是具有1至8个碳原子和是支链或直链的，所说的芳基为任意选择地由一个或多个C1-C4烷基或C1-C4烷氧基或卤原子取代的苯基，萘基或2，3-二氢化茚基。
当R和R4为除了乙基和苄基的生物不稳定酯形成基团时，它们的例子包括1-(2，2-二乙基丁酰氧基)乙基，2-乙基丙酰氧基甲基，1-(2-乙基丙酰氧基)乙基，1-(2，4-二甲基苯甲酰氧基)乙基，α-苯甲酰氧基苄基，1-(苯甲酰氧基)乙基，2-甲基-1-丙酰氧基丙基，2，4，6-三甲基苯甲酰氧基甲基，1-(2，4，6-三甲基苯甲酰氧基)乙基，戊酰氧基甲基，苯乙基，苯丙基，2，2，2-三氟乙基，1-或2-萘基，2，4-二甲基苯基，4-叔丁基苯基，5-(4-甲基-1，3-dioxalynyl-2-onyl)甲基和5-(2，3-二氢化茚基)。
特别优选的生物不稳定的酯形成基团为乙基，苄基，2，4-二甲基苯基，4-叔丁基苯基和5-(2，3-二氢化茚基)。
式中R和R4中的一个或二个为C1-C6烷基，尤其为乙基或苄基的式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物也是通过其在体内的水解来产生活性，而且它们是制备R和R4都为H的二酸的有价值中间体。
在另一组较佳的式(Ⅱ)化合物中，R，R2和R4为H，R3较好为H或C4-C6烷基，特别是正丁基。特别优选的化合物为其中羧基COO2R4是连接在环己烷的3或4位上，最佳的化合物为对于酰氨基来说具有顺式立体化学结构的化合物。
在本发明的一个方面，R5是R6CONR9或R7NR9CO-，其中R9是H和R6为下式基团
尤其式中R8是(C1-C6烷基)CONH-，芳基CONH-或(C1-C6烷基)SO2NH-，R10是H和R11是C1-C4烷基，苄基或氨基(C1-C6烷基)。
在本发明的更具体和优选方面，Y是亚甲基和R5是N2-取代的L-赖氨酰氨基，尤其是所说的取代基为N2-乙酰基，N2-苯甲酰基，N2-萘酰基或N2-甲磺酰基，因此优选的这类化合物有2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰氨基甲基)3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸;
2-(N2-苯甲酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔顺-4-羧基环己基〕氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸;
2-(N2-萘酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸;
2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-丁基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸，2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-反-3-丁基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸，2-(N2-甲磺酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-(3-甲基丁基)环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸和2-(N-甲磺酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-丁基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸。
可按本发明的许多不同方法制备式(Ⅰ)化合物(a)一种方法是包括酰化下式胺来制备R5为R6CONR9的式(Ⅰ)化合物 式中A，B，Y，R1，R2，R3和R4定义如前，R15和R16定义如同R和R4(只是不为H)或为常规的羧酸保护基;与下式的酸反应，
(式中R6定义如前，并且式中任何反应基团可随意选择地被保护)得到下式化合物;
式中R6′定义如同R6只是其中的任何反应基团可任意选择地被保护;如存在有保护基，则接着将其除去，并且视需要，对酯类产品进行水解得到式中R和R4为H的羧酸。
采用常规的酰胺偶联技术来进行式(Ⅲ)和式(Ⅳ)化合物的反应。因此该反应可采用下面的方法来完成，将反应剂溶于一种有机溶剂如二氯甲烷中，使用一种碳化二亚胺缩合剂如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺或N，N′-二环己基碳化二亚胺，并在有1-羟基苯并三唑和有机碱如N-甲基吗啉存在下以利于反应进行。在室温下通常经12至24小时就能完成反应，然后采用常规操作分离出产品，例如水洗或过滤移去脲素副产物和蒸去溶剂。如需要可进行结晶或色谱法来纯化产物。式(Ⅴ)化合物包括其中R和R4为C1-C6烷基或苄基的式(Ⅰ)化合物。
式(Ⅴ)的二酯可进一步反应得到R和R4中一个或二个为氢的式(Ⅰ)单酯或二酸衍生物。选用的条件取决于式(Ⅴ)化合物中R15和R16的具体性质，并且可以进行各种变化。例如当R15和R16都为苄基时，产物经氢化将获得其R和R4为H的式(Ⅰ)的双酸。此外，如果R15为苄基和R16为烷基，经氢化将得到单酯产物。如果需要，然后再水解得到二酸产物。当R15和R16中的一个为叔丁基时，用三氟乙酸处理式(Ⅴ)化合物得到相应的酸。其中R15和R16为苄基或低级烷基的二酯产物也能用三甲基甲硅烷基碘处理得到二羧酸产物。如果R15和R16使用了一些其它羧酸保护基，那就需要在最后一步采用除去保护基的明确而适当的条件，而得到式(Ⅰ)的酯或二酸产物。如果在环A或取代基R5为不饱和的情况下，需采用非还原性方法来进行脱保护基作用，例如当R和R4的任何一个为苄基时，可以用三甲基甲硅烷基碘处理来除去保护基。
R6′中所出现的最后的任何保护基可用适宜于具体的基团的方法将它们除去。例如，如果R6中存在氨基，则可以被保护成苯甲氧羰基氨基，然后用催化氢化法在最后的步骤中除去苯甲氧羰基。
其中R和R4中的一个或全部为生物不稳定的酯形成基团的式(Ⅰ)化合物能从用其中R15和/或R16为生物不稳定的酯形成基团的式(Ⅲ)化合物开始的相似的操作来制备。
在各自情况中，可以得到游离羧酸形式的产物，或可用合适的碱中和并分离得盐形式产物。
可以由欧洲专利申请号0274234描述的多种不同方法制备开始所用的式Ⅲ的环烷基取代的戊二酸单酯。
式Ⅳ的酸通常为已知化合物，其可以是市售的或按先前的文献来制得。
(b)在另一种方法中，按完全相类似的操作通过式为R6SO2-卤的磺酰卤与式(Ⅲ)的胺反应，制备其中R5为R6SO2NR9的式(Ⅰ)化合物。
(c)其中R5为R7NR9CO-的式(Ⅰ)化合物可通过下式的化合物的反应来制备
式中A，B，Y，R1，R2，R3，R15和R16定义如前，通过与式R7R9NH的胺反应，接着除去可能存在的任何保护基，并且水解酯产物得到其中R和R4为H的羧酸。
可以按前面叙述的方法(a)的酰胺偶合技术来完成式(Ⅸ)化合物同胺的反应。紧接着的步骤也是前面所描述的。按欧洲专利申请0274234，由相应的苄酯(其中R5是C6H5CH2OCO-)经催化氢化得到式(Ⅸ)的羧酸，来制备式(Ⅸ)化合物。式R7R9NH的胺通常是由天然存在的氨基酸经适当保护活性支链而衍生得到。
(d)在更进一步的方法中，其中R5是R6CONR9或R5是R6CO2-，R6CO-，R6SO9-，R7NR9SO2-或R7OCO的式(Ⅰ)化合能按欧洲专利申请号0274234所述的合成步骤来制备，即应用以下的方法
式中A，B，Y，R1，R2，R3，R15和R16定义如前，R5′定义如同R5，只是其中的任何反应基团可随意选择地被保护。
所需要的保护和偶联技术如同前述。式(Ⅵ)和(Ⅶ)化合物可按上面所提的欧洲专利申请中所揭示的通用方法进行制备。
正如前所述，本发明化合物是中性肽链内切酶(E.C.3.4.24.11)的有效抑制剂。这类酶与一些肽激素，尤其与前房促尿钠排泄因子(ANF)的断开有关。这类激素是一族由心脏分泌出的相关尿钠排泄肽所组成，在人体内主要循环形成的这种钠排泄肽已知是28氨基酸肽，也被称为α-hANP(例如见G.A.Sagnella和G.A.MacGreggor，Nature，1984，309，666和S.A.Atlsa和其它，Nature，1984，309，717-725)。因此，通过肽链内切酶E.C.3.4.24.11防止ANF的降解，本发明化合物能够加强其生物作用，因此，这类化合物是用于上述的许多疾病中的利尿剂和促尿钠排泄剂。
使用J.T.Gafford，R.A.Skidgel，E.C.Erdos和L.B.Hersh，Biochemistry，1983，32，3265-3271，所描述的测定方法，测定抗中性肽链内切酶E.C.3.4.24.11的活性。该方法包括测定用于放射性标记的马尿酸减少50%释放率所需的化合物浓度，其中马尿酸是通过由鼠肾脏制得的中性肽链内切酶制剂从马尿酰-L-苯基丙氨酰-L-精氨酸得到。
通过测定化合物对喂饱盐水的有知觉老鼠的排尿量和钠离子排泄量增加的能力，测定出化合物的利尿活性。在试验中，先将雄性鼠(charlesRiverCD1，22-28g)在金属碗中适应环境并饥饿一晚，将相当于2.5%体重的，溶于一体积盐水中的试验化合物经尾静脉从静脉内投药给老鼠，然后在预称量试管中每小时收集尿样，共收集2小时，分析电解物浓度。由试验动物得到的尿体积量和钠离子浓度与仅给盐水的对照组进行比较。
对于本化合物用于治疗或预防人体的高血压，充血性心力衰竭或肾机能不全来说，一个平均体重的成年病人(70kg)每天的口服剂量通常为4-800mg的范围。因此对于一个典型的成年病人来说，单独的片剂或胶囊含有可用于以单或多剂量给药并在适合于药用的赋形剂或载体中的活性化合物的量为2至400mg可每天用药一次或多次。按需要，典型的静脉给药剂量为每单次剂量在1至400mg的范围。在实际运用中，医生将按最适合于每个具体病人来决定实际剂量，这将随具体病人的年龄，体重和药物反应而变化。上面所提的剂量是指一般病例的情况，在个别情况下，使用较大和较低剂量也是值得考虑的，这些也属于本发明的范围。
用于人体使用时，本式(Ⅰ)化合物可单独给药，但通常是与药物上可接受的载体相组合后给药，按给药的途径和标准药物实践进行选择载体。例如，可以含有赋形剂如淀粉或乳糖的片剂形式，或以单独或与赋形剂混合的胶囊或胚珠形式，或以含有香味剂或着色剂的剂或悬液形式进行口服给药。可进行肠胃外注射给药，例如静脉，肌肉或皮下注射。对于肠胃外给药来说，最好采用无菌水溶液形式，它们还可以含有其它物质，例如足够的盐或葡萄糖使溶液同血液等渗。
化合物可以采用单独给药，但也可以与其它药剂一起给药，医生按已有的药物实践，着重对血压的最佳控制或着重治疗充血性心力衰竭，肾机能不全或具体病人的其它疾病。化合物能与各种心血管剂共同给药，例如与ACE抑制剂如巯甲基氧丙基左旋脯氨酸或苯酯丙脯氨酸一起以便于在治疗高血压时控制血压，或与洋地黄或其它心兴奋剂，或与ACE抑制剂一起用于治疗充血性心力衰竭。其它可能的共同给药包括与钙拮抗剂(例如利心平，amlodipine或硫氮 酮)，β-阻断剂(例如氨酰心安)或α-阻断剂(例如哌唑嗪或doxazosin)，这将由医生按所遇具体病人或治疗情况来决定。
除上所述之外，化合物还可以同外原ANF或其衍生物，或具有利尿/促尿钠排泄活性的有关的肽或肽断片，或同其它的ANF-基因有关的肽一起联合给药(例如DL.Vesely等人描述的，Biochem.Biophys.Res.Comm.，1987，143，186)。
本发明在更进一步方面，提供一种包含式(Ⅰ)化合物，或其药物上可接受的盐或能产生该化合物或其盐的生物前体，以及药物上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。
本发明还包括式(Ⅰ)化合物，或其药物上可接受的盐或能产生该化合物或其盐的生物前体在医学中的应用，尤其可用作治疗人类高血压，充血性心力衰竭或肾机能不全的利尿剂。
本发明进一步包括式(Ⅰ)化合物用于制备治疗下列疾病的药物，治疗高血压，心力衰竭，咽峡炎，肾机能不全，经期前综合症，周期性水肿，梅尼埃尔氏病，醛甾酮过多症，肺水肿，腹水，尿钙过多，青光眼，气喘，炎症，疼痛，癫痫，感情性疾病，痴呆和老年性精神混乱，肥胖症，胃肠疾病(包括腹泻)，血肾素过多，白血病和调节胃酸分泌。
下面的试验实施例用来更具体地描述本发明化合物的制备。化合物的纯度用常规的薄层色谱来检测，使用Merck Kieselgel 60 F254板。1H-核磁共振光谱是由Nicolet QE-300分光计记录并且在所有场合都与提出的结构相吻合。
实施例12-(N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酰-氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸叔丁酯在0℃下的N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酸(456mg，1.41mmole)的干燥二氯甲烷搅拌溶液中加入1-羟基苯并三唑(207mg，1.53mmole)和N-甲基吗啉(235mg，2.36mmole)，接着加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(361mg)。0℃下搅拌所得溶液20分钟，并且一次性加入3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-(氨基甲基)丙酸叔丁酯(500mg，1.18mmole)的二氯甲烷(10ml)溶液，将反应混合物温热至室温和搅拌16小时。真空浓缩该溶液至10ml。将其在乙酸乙酯和水中分配。有机相用水(2×50ml)，2M盐酸(50ml，2×25ml)，碳酸氢钠溶液(2×25ml)和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥并蒸发溶剂，剩余物经硅胶色谱分离，用乙酸乙酯洗脱得本标题化合物(610g，71%)。
C39H60N4O9(0.25H2O)测定值C，63.34;H，8.61;N，7.45。
理论值C，63.48;H，8.33;N，7.59%。
实施例2-27按实施例1的通用方法制备下列化合物，使用3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-(氨基甲基)丙酸叔丁酯(见制备1)或3-乙氧羰基异构体(见制备2)为起始物质与式(Ⅳ)相应的酸(替代N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酸)进行反应。
实施例28-29按实施例1的通用方法制备下列化合物，使用3-｛1-〔顺-3-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-氨基丙酸为起始物质和式Ⅳ相应的酸进行反应。
(1)半水合物实施例30-33按实施例1的通用方法制备下列化合物，使用适合的式(Ⅲ)胺与N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酸进行偶合。
(1)半水合物(2)1.5水合物(3)水合物实施例34N-〔4-｛1-(顺-3-叔丁氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｛-3-(叔丁氧羰基)丁酰〕苯基丙氨酸叔丁酯在0℃下，在3-｛1-〔(顺-3-叔丁氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-(羧甲基)丙酸叔丁酯(219.6mg，0.457mmole)的干燥二氯甲烷(20ml)搅拌溶液中加入1-羟基苯并三唑(76mg，0.576mmole)和N-甲基吗啉(0.5ml，4.5mmole)，接着加入1-乙基-3-(二甲氨基丙基)碳化二亚胺(94mg)。0℃搅拌所得溶液20分钟，然后一次性加入苯丙氨酸叔丁酯(128mg，0.5mmole)的干燥二氯甲烷(5ml)，温热反应液至室温和搅拌16小时。真空浓缩该溶液至10ml，并在乙酸乙酯和水中分配。有机相用水(2×25ml)，2M盐酸(2×10ml)，碳酸氢钠(2×10ml)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发溶剂得油状的本标题化合物(325mg，100%)。
C39H60N2O8·H2O测定值C，66.59;H，8.92;N，4.25。
理论值C，66.63;H，8.89;N，3.49%。
实施例35-38按实施例34的操作制备下面的化合物，使用合适的3-｛1-〔顺-3-烷氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-羧甲基丙酸叔丁酯为起始物质与合适的式R7R9NH胺反应。
(1)0.4 mole CH2Cl2实施例392-(N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸将实施例1所得的叔丁酯(571gm，0.783mmole)溶于三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(1ml)的混合液中，4℃下放置溶液过夜，然后浓缩至干，用二氯甲烷与剩余物一起共沸6次。将所得的粗制产物溶于乙酸乙酯，并水洗直至洗涤物呈中性。有机相用硫酸镁干燥，然后真空蒸发得白色泡沫状的标题化合物(442mg，84%)，
C35H52N4O9(0.5H2O)测定值C，61.89;H，7.76;N，7.93。
理论值C，61.65;H，7.69;N，8.22%。
实施例40-45按实施例39的操作制备下列化合物，使用实施例2至27的合适的叔丁酯为起始物
实施例66-67按实施例39的通用方法制备下列化合物，使用实施例28和29的合适的叔丁酯为起始物。
(1)0.75 H2O
实施例68-71按实施例39的通用方法制备下列化合物，使用实施例30至33的合适的叔丁酯为起始物
实施例72-76按实施例39的通用方法制备下列化合物，使用实施例34-38的合适的叔丁酯为起始物。
(1)0.5 mole CH3CO2C2H5(2)0.6 H2O
实施例772-(N2-乙酰-N6-苯甲氧羰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸将实施例39所得的乙酯(404mg，0.600mmole)溶于2M氢氧化钠溶液(10ml)中，将所得的溶液保持在室温过夜。将反应液稀释至30ml，并用乙醚萃取。用2M盐酸酸化水相至pH1，并用乙酸乙酯(3×25ml)萃取。有机相经硫酸镁干燥并经蒸发得白色泡沫状的标题化合物(375mg，97%)。
C33H48N4O9·(0.25CH2Cl2，1.25H2O)测定值C，58.30;H，7.24;N，8.20。
理论值C，58.00;H，7.17;N，8.14%。
实施例78-96按实施例77的操作制备下列化合物，使用实施例40至58的合适的乙酯为起始物。
实施例972-(N2-乙酰-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸在50p.s.i(3.46巴)的氢气下，将实施例77的产物(200mg，0.31mmol)的乙醇(27ml)和水(3ml)混合溶液于10%披钯木炭(20mg)上还原1个半小时。过滤溶液并于真空下蒸去溶剂，剩余物与二氯甲烷共沸(6次)得白色固体的标题化合物(161mg，100%)，熔点161～163℃。
C25H42N4O7·H2O测定值C，56.80;H，8.49;N，9.22。
理论值C，56.80;H，8.39;N，10.60%。
实施例98-110按实施例97的操作制备下列化合物，但使用合适的氨基保护的乙酯或酸作为起始物。
实施例111-112按实施例77的通用方法，通过水解实施例66和67化合物的酯基团，接着催化氢化或在冰乙酸中用HBr处理，除去苯甲氧羰基保护基从实施例66和67的化合物制备下列化合物。
(1)0.5 mole H2O
实施例113-119下列化合物按实施97的方法制得，催化氢化实施例73至76的化合物，如在乙基酯情况下，再按实施例77的操作进行水解。用离子交换色谱和用含水吡啶洗脱以分离二酸。
(1)3.3 moles C2H5OH，1.5 mole H2O
实施例120-125按实施例77的操作，由水解实施例61或105-110合适的酯制得下列化合物，用离子交换色谱和含水吡啶洗脱以分离产物。
(1)水合物(2)0.5 mole H2O (3)0.2 mole H2O(4)0.75 mole H2O (5)1.0 mole H2O 0.5 mole C2H5OH
实施例127-134下列化合物制备如下，按实施例97操作催化氢化实施例68-71的化合物得酯类(R4＝CH3或C2H5)，接着按实施例77的操作水解得到相应的酸(R4＝H)。
(1)1.75 H2O (2)0.75 H2O (3) 0.4mole CH2Cl2(4)1.5 H2O，0.25 C2H5OH
(1)0.5 H2O
实施例1352-(N2-甲磺酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-丁基环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸1.3-(1-羧基环戊基)-2-氨基丙酸叔丁酯在60p.s.i(4.1巴)下，将在乙醇(160ml)和三乙胺(20ml)中的3-(1-羧基环戊基)-2-(二苄基氨基甲基)丙酸叔丁酯盐酸盐(2.0g，41mmol)用钯(20%Pd(OH)/C;20g)氢化。18小时后经arbicel过滤该混合物，然后蒸发溶剂，并将干燥的剩余物与苯共沸。这样得到白色固体(16.21g)的所需的伯氨基酸三乙胺盐-含有一摩尔量的三乙胺盐酸盐。
2.2-(N2-苯甲氧羰基-N6-叔丁氧羰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-〔1-(1-羧基环戊基)〕丙酸叔丁酯(非对映异构体)将上面的产物(8.24g，20.1mmole)和N2-苯甲氧羰基-N6-叔丁氧羰基-L-赖氨酸4-硝基苯酯(9.50g，18.9mmole)溶于干燥的二氯甲烷(70ml)中。搅拌溶液后，冷却至10℃，然后加入三乙胺(2.64ml，18.9mmole)。半小时后，混合物呈均相，并室温放置过夜。然后用1M柠檬酸和水分别洗涤溶液，用硫碳镁干燥并经蒸发。剩余物经硅胶(500g)色谱纯化和经乙酸乙酯己烷梯度洗脱(2∶1至4∶1)，最后用乙酸乙酯∶己烷∶乙酸(4∶1∶0.05)洗脱，得到无色树胶状的所需非对映异构体混合物(10.5g)。异构体用硅胶(1kg)色谱和甲苯，异丙醇和二乙胺(10∶2∶1)混合物洗脱分离。得到橙色泡沫状的所需极性较大的非对映异构体的二乙胺盐(3.01g)，将其溶于乙酸乙酯和用1M柠檬酸和盐水洗涤。经用硫酸镁干燥和蒸发得黄色泡沫状的游离酸(2.81g)。
C38H51N3O9测定值C，62.89;H，8.29;N，6.69。
理论值，C，62.54;H，8.11;N，6.63%。
另外，取少量样品经硅胶色谱，乙酸乙酯∶己烷梯度洗脱(2∶3至17∶3)得奶油色粉状物〔α〕25D-2.8°，〔α〕25365-3.6°(C＝0.5，乙醇)。
3.2-(N2-苯甲氧羰基-N6-叔丁氧羰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基-顺-3-丁基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸叔丁酯将上面第2步的产物(650mg，1.03mmole)与C-4-氨基-C-2-丁基-γ-1-环己烷羧酸乙酯盐酸盐(271mg，1.03mmole)按实施例描述的进行偶合，接着经硅胶色谱，乙酸乙酯∶己烷梯度洗脱(7∶3至4∶6)得浅色泡沫状的所需化合物(630mg，73%)。
C46H74N4O10(0.75H2O)测定值C，64.37;H，8.98;N，6.81。
理论值C，64.50;H，8.88;N，6.54%。
4.2-(N2-甲磺酰-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-丁基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸ⅰ)在50p.s.i.(3.5巴)下，将上面步骤3的产物(620mg，0.735mmole)的乙醇(18ml)和水(2ml)用5%披钯炭(200mg)氢化。3小时后，通过Arbicel过滤该混合物并蒸发至干得白色泡沫体(520g，95%)。
ⅱ)上面产物(500mg，0.67mmole)和N-甲基吗啉(0.16ml，1.4mmole)的干燥二氯甲烷(15ml)溶液在冰冷却下搅拌并滴加甲磺酰氯(0.11ml，1.41mmole)。3小时后，再加入甲磺酰氯(0.03ml)和N-甲基吗啉(0.04ml)，并且0℃下维持该混合物过液。然后依次用水，饱和的碳酸氢钠水溶液和水洗涤该混合物，用硫酸镁干燥经蒸发得粗制产物，再经硅胶色谱，乙酸乙酯∶己烷(4∶6至1∶9)梯度洗脱得无色泡沫状的所需的甲磺酰衍生物(460mg，87%)。Rf.0.15(乙酸乙酯，己烷，1∶1)。
ⅲ)按实施例39方法，用三氟乙酸处理上面的产物(440mg，0.56mmole)，接着在50-55℃用1N氢氧化钠(4.5ml)水解65小时，然后在离子交换树脂50W-X8吸附，经10%含水吡啶溶液洗脱得泡沫状的所需二酸。在乙腈中研磨得白色粉状体(245mg，73%)。
C20H50N4O3S(0.5H2O)测定值C，54.92;H，8.29;N，9.12。
理论值C，54.97;H，8.40;N，9.16%。
实施例1362-(N2-甲磺酰-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基-顺-3-(3-甲基丁基)环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸应用在第3步中的C-4-氨基-C-2-(3-甲基丁基)-γ-1-环己烷羧酸按实施例135操作制备本化合物。所得产物为米奶油色粉状体。
C29H52N4O8S测定值C，56.07;H，8.22;N，8.95。
理论值C，56.47;H，8.50;N，9.08%。
制备13-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-(氨基甲基)丙酸叔丁酯(a)将2-(溴甲基)丙酸叔丁酯(20g，90.5mmole)的干燥乙腈(360ml)溶液冷却至0℃，用固体碳酸钾(15.63g，113mmole)处理，接着用二苄胺(17.83g，90.5mmole)的干燥乙腈(600ml)溶液处理放热至10℃。将反应物在0℃下搅拌半小时和室温搅拌1小时，然后分配于水和乙醚之中。用水洗涤醚相，用硫酸钠干燥经蒸发得粗制产物(31g)，粗产物经硅石垫板过滤，己烷/二氯乙烷(1∶1)洗脱得固体的2-(二苯甲氨基甲基)丙酸叔丁酯(23.8g，78%)，熔点62-63℃。
C22H27NO2测定值C，78.09;H，8.20;N，4.18。
理论值C，78.3;N，8.06;N，4.15%。
(b)在氮气下冷却至-30℃的二异丙胺(14.98g，20.75ml，148mmole)的干燥四氢呋喃(250ml)搅拌溶液中滴加正丁基锂(59.3ml，2.5M溶液，148mmole)，滴加时维持温度在-20℃以下。于-20℃搅拌反应物1小时，再冷却至-30℃，然后滴加入于少量干燥四氢呋喃中的环戊烷羧酸(8.05g，7.65ml，70.6mmole)。将反应混合物0℃搅拌2小时，此时有白色沉淀物形成。然后将溶液冷至-70℃，开始滴加入2-(二苯甲氨基甲基)丙酸叔丁酯(23.8g，70.6mmole)的干燥四氢呋喃(35ml)溶液。反应物放置过夜(在低于-40℃下)后，注入到冰盐酸(4.2当量，最终pH为2)中，用乙醚萃取产物，所得醚层用盐酸，水洗涤两次，用硫酸钠干燥以后蒸发得粗制产物(40g)。接着进行硅胶(500g)色谱纯化，用含甲醇(0至5%)的二氯甲烷洗脱，蒸发收集的纯馏分得油状的3-(1-羧基环戊基)-2-(二苯甲氨基甲基)丙酸叔丁酯(18.3g，57%)。
C28H37NO4测定值C，74.38;H，8.41;N，2.91。
理论值C，74.47;H，8.26;N，3.10%。
(c)在氮气氛下，上面(b)步骤所得的叔丁基酯(11.97g，26.54mmole)的干锒燃淄椋 00ml)用1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(10.19g，53mmole)，1-羟基苯并三唑(3.94g，29mmole)，三乙胺(16.08g，22.15ml，159mmole)和顺-4-氨基环己烷羧酸乙酯盐酸盐(6.04g，20mmole)处理。经室温搅拌过夜后，用蒸发除去溶剂，将剩余物分配于乙酸乙酯和水中。所得有机相用稀盐酸(2次)，稀碳酸氢钠水溶液，用水洗涤，再用硫酸钠干燥经蒸发得粗制产物(15.5g)。再经硅石(400g)色谱，10%于二氯甲烷中的乙醚洗脱，然后蒸发所需馏份得油状的3-｛1-〔(顺-4-乙氧羰基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝-2-(二苯甲氨基甲基)丙酸叔丁酯(11.43g，71%)。
C37H52N2O5测定值C，73.38;H，8.87;N，4.42。
理论值C，73.48;H，8.67;N，4.68%。
(d)于乙醇(75ml)中的上面(c)步骤所得产物(4.6g，7.62mmole)在氢气氛(50p.s.i.，3.46巴)和披钯木炭(200mg)下于室温氢化过夜。经Solkaflok垫板过滤反应混合物，滤液蒸发至干，得到油状粗制产物。将粗制产物溶于乙醚，用稀盐酸(pH2)萃取(2次)。合并水相并用乙醚洗涤，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液中和，并用二氯甲烷萃取3次。合并有机相，用硫酸钠干燥经蒸发得油状的本标题化合物(2.91g，90%)。
C23H40N2O5测定值C，64.80;H，9.28;N，6.76。
理论值C，65.06;H，9.50;N，6.60%。
制备2-6按制备1的操作制备下列化合物，不同的是，在(c)步骤中用合适的氨基环烷羧酸酯代替顺-4-氨基环己烷羧酸乙酯。在U.K.专利申请号8903740.2中介绍了这种胺起始物。
(1)0.25 mole H2O
权利要求
1.制备下式化合物和任意选择地形成的其药物上可接受的盐的方法 式中A组成一个可以是饱和的或单不饱和的4至7元碳环，它们可以随意选择地与另一个饱和不饱和的5或6元碳环稠合；B为(CH2)m，其中m是1至3的一个整数；R和R4各自独立地为H，C1-C6烷基，苄基或一个可供选择地生物不稳定的酯形成基团；R1为H或C1-C4烷基；R2和R3各自独立地为H，OH，C1-C6烷基或C1-C6烷氧基；或R2和R3连接在一起组成(CH2)r，其中r为1至4的一个整数；Y为任意选择地具有1至6个碳原子的直链或支链的亚烷基，R5为R6CONR9-，R6SO2NR3-，R6CO2-，R6CO-，R6SOq-，R7NR9CO-，R7NR9SO2-或R7OCO-；其中R6为下式基团 R7为下式基团 R9为H，C1-C6烷基，芳基，C3-C7环烷基，杂环基，芳基(C1-C6烷基)或杂环基(C1-C6烷基)；其中R8为R9CONR9-，R9SO2NR9-，R13R14N-(CH2)P-或R9O-，其中R9的定义如前；R10和R11各自独立地为H或C1-C6烷基，或R10为H和R11为由OH，SH，SCH3，NH2，芳基(C1-C6烷基)OCONH-，NH2CO-，CO2H，胍基，芳基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者R10和R11与它们相连接的碳原子一起组成饱和或单不饱和5元或6元碳环，并且可以任意选择地由C1-C4烷基取代和可以与另外的5或6元饱和或不饱和碳环稠合；或R10为H，n为0，R8和R11键连成一个2-(N-COR9-4-氨基吡咯烷基)；R12为R13R14NCO-，R9OCO-，R9OCH2-或杂环基，其中R9的定义如前；R13和R14分别独立地为H，C1-C6烷基，C3-C7环烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，C2-C6烷氧烷基，氨基(C1-C6烷基)，杂环基或杂环基(C1-C6烷基)；或者R13和R14与和它们相连接的氮原子一起组成吡咯烷基，哌啶子基，吗啉代，哌嗪基，N-(C1-C4烷基)哌嗪基，吡咯基，咪唑基，吡唑基或三唑基；n为0或1；p为0或1至6的一个整数；q为0，1或2；本方法包括对下式化合物进行去保护反应和/或水解和/或氢化或其它去保护反应，除去R5′上的任何保护基和除去R15和R16中的一个或二个，以生成式(I)的相应单酯或二羧酸，其中R和R4中的一个或二个都为氢， 式中R15和R16除不为H外，其定义如同R和R4，或者它们是常规的羧酸保护基，而R5′定义如同R5与在其中任意选择地被保护的任何活性基团。
2.根据权利要求1的方法，其中R15是叔丁基，并且通过用三氟乙酸处理来去除。
3.根据权利要求1的方法，其中R16是C1-C4烷基，并且通过用碱性水溶液处理来去除。
4.根据权利要求1的方法，其中R5上的所说保护基是苄氧羰基氨基保护基，并且通过催化氢化除去。
5.根据权利要求1的方法，其中所说化合物为 式中R，R2，R3，R4和R5定义如前。
6.根据前面任一项权利要求所述的方法，其中R5是R6CONR9-或R7NR9CO-，式中R6，R7和R9定义如前。
7.根据权利要求6的方法，其中R5是R6CONR9-，R9是H和R6为下式基团 式中R8是(C1-C6烷基)CONH-，芳基CONH-或(C1-C6烷基)SO2NH-，R10是H和R11是C1-C4烷基，苄基或氨基(C1-C6烷基)。
8.根据权利要求6的方法，其中R5是R7NR9CO-，式中R9是H和R7为下式基团 式中R12是HO2C，(C1-C6烷基)NHCO-，(C1-C6烷基)2NCO-，芳基NHCO-或1-吡咯烷基，R10是H和R11是苄基或氨基(C1-C6)烷基。
9.根据权利要求7的方法，其中R5是N2-乙酰-L-赖氨酰氨基，N2-苯甲酰-L-赖氨酰氨基，N2-萘酰-L-赖氨酰氨基或N2-甲基磺酰氨基-L-赖氨酰氨基。
10.根据权利要求7的方法，其中所说的化合物是2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸，2-(N2-苯甲酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸，2-(N2-萘酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔(顺-4-羧基环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸，2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰基氨基甲基)-3-｛1-(顺-4-羧基-顺-3-丁基-环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸，2-(N2-乙酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔顺-4-羧基-反-3-丁基-环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸，2-(N2-甲磺酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔顺-4-羧基-顺-3-(3-甲基丁基)环己基)氨基甲酰基〕环戊基｝丙酸，或2-(N2-甲磺酰基-L-赖氨酰氨基甲基)-3-｛1-〔顺-4-羧基-顺-3-丁基-环己基)氨基甲酰〕环戊基｝丙酸。
全文摘要
本发明涉及下式的化合物和其药物上可接受的盐以及能够转化成该化合物或其盐的生物前体，
文档编号C09C1/50GK1038293SQ8910590
公开日1989年12月27日 申请日期1989年5月2日 优先权日1989年5月2日
发明者詹姆斯·基思, 约翰·克里斯托弗·丹尼卢维兹 申请人:美国辉瑞有限公司