一种用于生物he染色的染料组合物、应用及其使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种医学生物形态学研究领域，具体涉及一种用于生物HE染色的染 料组合物、应用及其使用方法。
【背景技术】
[0002] 医学生物形态学研究领域通常需要对生物组织内的细胞器等形态结构进行染色， 以利于达到可视化观察，限定并对其进行检查。为了达到更有利的可视化观察效果，对生物 组织的染色技术在不断的发展，通常采用HE染色技术，H指苏木精（Hemaltoxylm)、E指伊 红（eosin)，其化学式分别如下：
[0003]
[0004] 苏木精是最早用于生物学的天然染料之一，是生物形态学实验室中最常用的染 料，它来源于苏木树的树心木提炼出而获得，呈淡黄褐色的粉末状，易溶于酒精，也可溶于 热水。从伊红的化学结构中，可看到它的酸性着色基团为羟基（一0H)和羧基（一C00H)，它 能与NaOH作用生成钠盐（一COONa)。而钠盐经电离后，它的有色离子为阴离子的过程，可 使细胞质和细胞外基质中的成分染成红色。
[0005] HE染色技术通常分为两种，一是传统的经典石蜡切片HE染色方法，二是现有常用 的普通整块苏木精伊红染色方法。由于传统的石蜡组织切片染色都是采取单片片染的方 法，它是一种传统而最常用的石蜡切片技术。其基本程序：（i)取材和固定；（ii)脱水和包 埋；（iii)切片、染色和封固。这种方法在医学形态学领域中广泛应用而被人们熟知。但是， 这种制作法具有一定的弊端和局限性，比如在制作做大批量连续教学切片时；同时，也可耗 费制作者大量的时间和精力。普通整块苏木精伊红染色方法的操作程序通常为：取材一固 定一脱色一媒染一苏木精染色液染色一分色一还原一流水冲洗一蒸馏水洗一伊红染色液 染色一常规脱水一透明一石蜡包埋、切片一贴片及烤片一透明一树胶封固。但这方法同样 也存在一定弊端，染色液染色步骤较多，不易掌握等缺点，若染色技术掌握不到位，就容易 导致所取材的组织结构出现差别以及出现染色结果不均匀一致的现象，而且还经过媒染一 苏木精染色液染色一分色一还原一水洗一伊红染色液染色等过程。
[0006] 不论是传统石蜡方法还是整块HE染色方法，染色过程都较为复杂，染色步骤较 多，不易掌握。
【发明内容】
[0007] 本发明人经过多年的研究发现，由于现有染料成份苏木精和伊红在染色过程中所 配置而成的染色液通常只能单独分别进行染色，即需要在某一染色成份染色后，对染色对 象进行一定处理后才可进行另一染色成份的染色步骤，否则染色出来的生物组织的细胞器 形态结构无法可视化观察，即细胞核和细胞质的染色效果区分不够明显，有待于进一步改 进。
[0008] 有鉴于此，本发明提供一种用于生物HE染色的染料组合物、应用及其使用方法， 其可以有效的缩减现有染色技术的染色步骤，简化染色过程，较易掌握。
[0009] 为解决以上技术问题，本发明的技术方案是采用一种用于生物HE染色的染料组 合物，所述染料组合物由A液和B液混合组成；
[0010] A液包括染色有效成分a、染色辅助成分以及水，其中染色有效成分a、染色辅助成 分以及水的重量份数比为（1. 5-2. 5) : (4-5. 5) : (90-100);其中染色有效成分a由重量份数 比分别为0. 3-0. 5份苏木精、1. 2-1. 8份硫酸铝钾、0. 02-0. 08份任一选自碘酸钠、高锰酸钾 的氧化剂组成，染色辅助成分由柠檬酸、丙三醇中若干组分组成；
[0011] B液由染色有效成分b和水组成，其中染色有效成分b为伊红和80-85 %酒精，并 且伊红、水、80-85%酒精的重量份数比为1: (3-5) : (95-100);
[0012] 所述A液与B液的混合比例为体积比3: (18-25)。
[0013] 优选的，所述A液中染色有效成分a、染色辅助成分以及水的重量份数比为 2. 05:5. 02:95〇
[0014] 优选的，所述A液中染色有效成分a由重量份数比分别为0.4份苏木精、1. 6份硫 酸铝钾、0. 05份任一选自碘酸钠、高锰酸钾的氧化剂组成。
[0015] 优选的，所述氧化剂为碘酸钠。
[0016] 优选的，所述A液中染色辅助成分由重量份数比为0. 02份柠檬酸和5份丙三醇组 成。
[0017] 优选的，所述B液中伊红、水、85%酒精的重量份数比为1:5:100。
[0018] 优选的，所述A液与B液的混合比例为体积比3:20。
[0019] 本申请还提供第二种技术方案，即前述任一所述的染料组合物作为生物HE染色 时染料的应用，其特征在于：所述生物主要指生物组织。
[0020] 本申请还提供第三种技术方案，即前述任一所述的染料组合物在用于生物HE染 色时的使用方法，其特征在于：首先将生物组织固定于FAA固定液中，经流水洗后，放入权 利要求1-7任一所述的染料组合物中进行染色，然后逐步经脱水、石蜡包埋、切片、烘干封 固即可。
[0021] 优选的，所述FAA固定液是由体积比为1:1: (18-20)的40%甲醛溶液、冰醋酸、 70 %酒精组成。
[0022] 本申请所述用于生物HE染色的染料组合物的基本说明如下：
[0023] 本发明人通过长时间的研制得出，本申请所述的染料组合物可以有效的对生物组 织进行染色，所得染色效果为细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，颜色分明，有利于对细胞结构 进行有效的观察。同时本申请所述染料组合物可以有效的缩减现有染色技术的染色步 骤，简化染色过程，较易掌握。
【附图说明】
[0024] 图1-3为实施例一中染液5分别对应的肝、脾、肾组织切片效果示意图。
【具体实施方式】
[0025] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。
[0026] 下面将列举一些与本申请相关的用于生物HE染色的染料组合物。
[0027]染液 1:
[0028] 该染液1的染料组合物由A液和B液混合组成；
[0029] A液由染色有效成分a、染色辅助成分以及水组成，其中染色有效成分a、染色辅助 成分以及水的重量份数比为1.5:5. 5:100;其中染色有效成分a由重量份数比分别为0.3 份苏木精、1. 8份硫酸铝钾、0. 08份高锰酸钾组成，染色辅助成分由柠檬酸组成；
[0030] B液由染色有效成分b和水组成，其中染色有效成分b为伊红和80%酒精，并且伊 红、7K、80%酒精的重量份数比为1:3:95;
[0031] 所述A液与B液的混合比例为体积比3:18。
[0032] 染液 2 :
[0033] 该染液2的染料组合物由A液和B液混合组成；
[0034] A液由染色有效成分a、染色辅助成分以及水组成，其中染色有效成分a、染色辅助 成分以及水的重量份数比为1.5:5. 5:100;其中染色有效成分a由重量份数比分别为0.3 份苏木精、1. 8份硫酸铝钾、0. 08份碘酸钠组成，染色辅助成分由丙三醇组成；
[0035] B液由染色有效成分b和水组成，其中染色有效成分b为伊红和80%酒精，并且伊 红、7K、80%酒精的重量份数比为1:3:95;
[0036] 所述A液与B液的混合比例为体积比3:18。
[0037] 染液 3 :
[0038] 该染液3的染料组合物由A液和B液混合组成；
[0039] A液由染色有效成分a、染色辅助成分以及水组成，其中染色有效成分a、染色辅助 成分以及水的重量份数比为2. 5:4:90;其中染色有效成分a由重量份数比分别为0. 5份苏 木精、1. 2份硫酸铝钾、0. 02份高锰酸钾组成，染色辅助成分由柠檬酸组成；