一株枝顶孢霉菌菌株Y0997在处理土壤和水污染中的应用的制作方法

本发明属于土壤微生物
技术领域：
，具体涉及枝顶孢霉菌的应用。
背景技术：
：滴滴涕(ddt)，化学名双对氯苯基三氯乙烷，在20世纪上半叶作为一种有机氯农药杀虫剂在抵抗疟疾、伤寒等蝇虫传播类的疾病和防止农业病虫害中发挥了重要的作用。ddt化学性质稳定，尤其是在土壤中半衰期较长，具有很强的疏水性和持久性，因此到目前为止，仍然在很多地区发现ddt在土壤中的残留，进而可能通过生物链对人类健康形成潜在的威胁。滴滴涕与重金属离子在土壤中共同存在时，会产生对吸附位点的相互竞争，造成生物对二者的处理能力比处理单一污染物时受到限制；其次，某些重金属离子可能会与滴滴涕等有机污染物结合，导致二者的存在形式发生变化，作用底物发生变化，最终影响生物修复的有效处理；最后，重金属离子与滴滴涕在土壤中同时存在会影响土壤中的微生物的活性，例如破坏微生物细胞膜的结构，导致细胞结构遭到破坏。在有机氯农药残留土壤的不同修复技术中，利用微生物进行生物修复的技术，因其成本低、环境友好以及可操作性强等特点越来越受到国内外研究者的认可。鼠李糖脂作为一种由微生物产生的环境友好型生物表面活性剂，不仅可以对有机污染物起到增溶作用，还可以通过络合作用从土壤中解吸重金属离子，从而降低重金属离子的毒性。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于为枝顶孢霉菌y0997提供一种新用途。解决上述技术问题所采用的技术方案是：一株枝顶孢霉菌(acremoniumsp.)菌株y0997的应用，所述的应用是指应用于处理土壤中滴滴涕农药残留的污染；所述的菌株于2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。一株枝顶孢霉菌菌株y0997应用于处理土壤中滴滴涕农药残留污染的使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴涕污染为5～10mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入的农药残留土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120～180mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用。(6)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80～120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1000mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％～30％，15～35℃处理90天。一株枝顶孢霉菌(acremoniumsp.)菌株y0997的应用，所述的应用是指应用于处理污水中滴滴涕农药残留的污染；所述的菌株于2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。一株枝顶孢霉菌菌株y0997应用于处理污水中滴滴涕农药残留污染的使用方法步骤如下：(1)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用。(2)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液。(3)添加枝顶孢霉菌菌液在含滴滴涕污水中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为1wt％～5wt％，搅拌，调ph为4.5～6.5，25～30℃处理10～20天。一株枝顶孢霉菌(acremoniumsp.)菌株y0997的应用，所述的应用是指应用于处理土壤中滴滴涕和镉离子残留的污染；所述的菌株于2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。一株枝顶孢霉菌菌株y0997应用于处理土壤中滴滴涕和镉离子污染残留污染的使用方法步骤如下：(1)污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)污染土壤预处理对滴滴涕和3cdso4·8h2o污染分别为5～10mg/kg和20～40mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向(2)中待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120～180mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用。(6)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80～120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800～1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％～30％，15～35℃处理90天。7、一株枝顶孢霉菌(acremoniumsp.)菌株y0997的应用，所述的应用是指应用于处理土壤中滴滴滴农药残留的污染；所述的菌株于2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。一株枝顶孢霉菌菌株y0997应用于处理土壤中滴滴滴残留污染的使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴滴污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)中待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120～180mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用。(6)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80～120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800～1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％～30％，15～35℃处理90天。一株枝顶孢霉菌(acremoniumsp.)菌株y0997的应用，所述的应用是指应用于处理土壤中滴滴伊农药残留的污染；所述的菌株于2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。一株枝顶孢霉菌菌株y0997应用于处理土壤中滴滴伊残留污染的使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴伊污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)中待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120～180mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用。(6)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l。28℃发酵培养，培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80～120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800～1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％～30％，15～35℃处理90天。本发明采用枝顶孢霉菌y0997菌株添加鼠李糖脂表面活性剂处理土壤中的农药污染，采用枝顶孢霉菌y0997菌株直接处理水中农药污染，对含有滴滴涕的土壤的去除效率达到86.89％、对含有滴滴滴的土壤的降解率达到59.41％、对含有滴滴伊的土壤的降解率达到40.80％、对含有滴滴涕的污水的去除率达75.80％，对滴滴涕与镉离子复合污染土壤去除率分别可达60.18％、62.03％。枝顶孢霉菌y0997菌株可用于处理土壤中含有滴滴涕、滴滴滴、滴滴伊的污染和污水含有滴滴涕的污染，还可用于处理滴滴涕与镉离子复合污染土壤。附图说明图1是枝顶孢霉菌降解污水中滴滴涕降解率动力学曲线。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明进一步说明，但是本发明的保护范围不仅限于这些实施例。实施例1以枝顶孢霉菌株y0997在处理土壤中滴滴涕农药残留的用途为例，其使用方法步骤如下：枝顶孢霉菌株(acremoniumsp.)命名为y0997，2016年3月14日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为cctccno:m2016117，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴涕污染为5～10mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg，加水调节土壤的含水量为25％，混匀，ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为160mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用；(6)枝顶孢霉菌发酵培养制备菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液；(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为100g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1000mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为25％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕去除率测定将(7)中处理过程中的土壤分别于10天、14天、21天、28天、35天、42天、59天、66天、90天取样测定土壤中滴滴涕的残留量。具体检测步骤为：将所取出的土壤样品置于电热鼓风干燥箱中50℃烘干，并用研钵研磨后过筛(φ＝1mm)。取过筛后的土壤样品5g，加入二氯甲烷进行超声萃取。萃取完成后，将样品用色谱级正己烷重溶后，定容于10ml；使用无水硫酸钠除去水分，再通过0.22um的有机系微孔滤膜除去杂质后，置于棕色玻璃气相进样小瓶中，使用thermofisher公司的气相色谱-质谱联用仪(gc-ms)(trace1300-isq)进行定量测定。具体的测定方法为：进样模式：不分流，自动进样，进样量为1ul。色谱条件：thermotg-5ms(30m×0.25mm×0.25um)弱极性毛细管柱。进样口温度230℃。柱升温程序为初始70℃，保持2min；25℃/min升至180℃，保持0min；8℃/min升至250℃，保持5min。载气为he，恒流模式，流速1ml/min。质谱条件：离子化模式为ei源。传输线温度280℃，离子源温度230℃。溶剂延迟6min，离子监测模式(selectedionmonitoring,sim),扫描间隔0.05s。对照组为不接入枝顶孢霉菌y0997，滴滴涕去除率计算公式为：实验结果如表1所示。表1枝顶孢霉菌y0997处理滴滴涕污染土壤的去除率处理时间(天)去除率(％)1060.111465.222166.342866.623567.254269.955976.536686.639086.89实验结果表明采用枝顶孢霉菌y0997经过90天处理滴滴涕污染土壤，去除率达到86.89％。实施例2以枝顶孢霉菌株y0997在处理土壤中滴滴涕农药残留的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定农药污染土壤理化性质测定方法与实施例1相同。(2)农药残留土壤预处理农药残留土壤预处理步骤与实施例1相同。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向经预处理后的农药残留土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg加水调节土壤的含水量为15％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)枝顶孢霉菌发酵培养制备菌液枝顶孢霉菌发酵培养制备菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕去除率测定滴滴涕去除率测定方法与实施例1相同。实施例3以枝顶孢霉菌株y0997在去除土壤中滴滴涕农药残留的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定农药污染土壤理化性质测定方法与实施例1相同。(2)农药残留土壤预处理农药残留土壤预处理步骤与实施例1相同。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向经预处理后的农药残留土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg加水调节土壤的含水量为30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为180mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)枝顶孢霉菌发酵培养制备菌液枝顶孢霉菌发酵培养制备菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为30％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕去除率测定滴滴涕去除率测定方法与实施例1相同。实施例4以枝顶孢霉菌y0997处理污水中滴滴涕污染的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)制备枝顶孢霉菌种子液用接种环刮取一环枝顶孢霉菌体，接种于马铃薯葡萄糖培养基中，置于恒温震荡培养箱中，160r/min，28℃培养3～4天，制备成枝顶孢霉菌种子液，备用；(2)制备枝顶孢霉菌菌液将枝顶孢霉菌种子液按接种量5％接入发酵罐中，发酵罐中培养基为：葡萄糖10g/l、mgso4·7h200.5g/l、nano32g/l、feso4·4h2o0.01g/l、酵母膏0.5g/l、k2hpo41g/l，28℃发酵培养3～4天，放料备用，制备成浓度为1.5×108～2.8×108cfu/ml的枝顶孢霉菌菌液；(3)添加枝顶孢霉菌菌液在含滴滴涕污水中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为2wt％，搅拌，调ph为4.5～6.5，25～30℃处理15天。分别于1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天取样测定污水中滴滴涕的含量，测定方法如下：取约50ml的样品，加入二氯甲烷，10000rpm离心10min，去除菌体，收集液体进行超声萃取；添加等量的色谱级二氯甲烷于超声机中萃取20min，用分液漏斗分液，收集二氯甲烷相于平底烧瓶中，重复该操作3次；将平底烧瓶置于旋转蒸发仪(re-5298)上，浓缩至10ml左右；再放置在通风橱中，自然挥干后，用色谱级正己烷重溶并定容至10ml；用无水硫酸钠除去水分，再通过0.22μm的有机系微孔滤膜除去杂质后，置于棕色玻璃气相进样小瓶中，使用thermofisher公司的气相色谱-质谱联用仪(gc-ms)进行定量检测。气相色谱-质谱联用仪检测方法与实施例1中相同。对照组为不接入枝顶孢霉菌y0997。以不同的取样时间为x轴，不同取样时间对应的样品中滴滴涕的含量为y轴，作出枝顶孢霉菌去除污水中滴滴涕的动力学曲线，动力学曲线如图1所示。滴滴涕去除率计算公式为：实施例5以枝顶孢霉菌y0997在处理污水中滴滴涕污染的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液步骤与实施例4相同。(2)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例4相同。(3)添加枝顶孢霉菌菌液在含滴滴涕污水中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为1wt％，搅拌，调ph为4.5～6.5，25～30℃处理20天。污水中滴滴涕去除率测定方法与实施例4相同。实施例6以枝顶孢霉菌y0997在处理污水中滴滴涕污染的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液步骤与实施例4相同。(2)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例4相同。(3)添加枝顶孢霉菌菌液在含滴滴涕污水中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为5wt％，搅拌，调ph为4.5～6.5，25～30℃处理10天。污水中滴滴涕去除率测定方法与实施例4相同。实施例7以枝顶孢霉菌y0997在处理镉离子和滴滴涕污染土壤中滴滴涕残留的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)污染土壤预处理对滴滴涕和3cdso4·8h2o污染分别为5～10mg/kg和20～40mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg，加水调节土壤的含水量为25％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为150mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为100g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1000mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为25％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕和镉离子污染土壤中滴滴涕去除率的测定土壤中滴滴涕去除率测定方法以及计算方法与实施例1中相同。实验和计算结果如表2中所示。以不添加鼠李糖脂的处理为实验组1，以添加鼠李糖脂组为实验组2。表2枝顶孢霉菌处理滴滴涕和镉离子污染土壤中滴滴涕的去除率处理时间(天)实验组1去除率(％)实验组2去除率(％)1016.6923.771419.7824.592120.0829.432823.7632.373531.4141.394239.1147.425940.6554.466641.9359.999040.3960.18实验结果表明采用枝顶孢霉菌经过90天处理滴滴涕和镉离子污染土壤中的滴滴涕残留，去除率达到60.18％。比不添加鼠李糖脂组的去除率高出19.79％。实施例8以枝顶孢霉菌y0997在处理镉离子和滴滴涕污染土壤中滴滴涕残留的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)污染土壤理化性质测定同实施例1(2)污染土壤预处理污染土壤预处理步骤与实施例1相同(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg，加水调节土壤的含水量为15％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为100g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕和镉离子污染土壤中滴滴涕去除率的测定土壤中滴滴涕去除率测定方法与实施例7相同。实施例9以枝顶孢霉菌y0997在处理镉离子和滴滴涕污染土壤中滴滴涕残留的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)污染土壤理化性质测定同实施例1(2)污染土壤预处理污染土壤预处理步骤与实施例1相同(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.53mg/kg～1.06mg/kg、k2hpo4为0.069mg/kg～0.138mg/kg、kh2po4为0.0535mg/kg～0.107mg/kg，加水调节土壤的含水量为30％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为180mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为30％，15～35℃处理90天。(8)滴滴涕和镉离子污染土壤中滴滴涕去除率的测定土壤中滴滴涕去除率测定方法与实施例7相同。实施例10以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴滴的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴滴污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，加水调节土壤的含水量为15％～30％，混匀，调ph为4.5～6.5；其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为25％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为150mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌y0997菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为100g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1000mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为25％，15～35℃处理90天。(8)测定滴滴滴降解率将(7)中处理过程中的土壤分别于14天、28天、42天、66天、90天取样测定土壤中滴滴滴的残留量。测定土壤中滴滴滴降解率的方法与实施例1中测定滴滴涕的方法相同，滴滴滴降解率计算公式为：对照组为不接入枝顶孢霉菌y0977。实验和计算结果如表3中所示。表3枝顶孢霉菌y0997处理滴滴滴污染土壤的降解率处理时间(天)降解率(％)14未检测到28未检测到4253.716657.609059.41实验结果表明采用枝顶孢霉菌y0997经过90天处理滴滴滴污染土壤，降解率达到59.41％。实施例11以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴滴的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴滴污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为15％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％％，15～35℃处理90天。(8)测定滴滴滴降解率测定土壤中滴滴滴降解率方法与实施例10中相同。实施例12以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴滴的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴滴污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为30％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为180mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为30％，15～35℃处理90天。(8)滴滴滴降解率测定测定土壤中滴滴滴降解率的方法与实施例10中相同。实施例13以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴伊的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴伊污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的步骤土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为25％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为150mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为100g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1000mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为25％，15～35℃处理90天。(8)测定滴滴伊降解率将步骤(7)中处理过程中的土壤分别于14天、28天、42天、66天、90天取样测定土壤中滴滴伊的残留量。土壤中滴滴伊降解率测定方法与实施例1中滴滴涕相同。滴滴伊降解率计算公式为：对照组为不接入枝顶孢霉菌y0997。实验和计算结果如表4中所示。表4枝顶孢霉菌y0997处理滴滴伊污染土壤的降解率处理时间(天)降解率(％)14未检测到28未检测到42未检测到66未检测到9040.80实施例14以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴伊的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴伊污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为15％，混匀，调ph为4.5～6.5；(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为120mg/kg土壤；(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为80g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为800mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为15％，15～35℃处理90天。(8)测定滴滴伊降解率测定土壤中滴滴伊降解率方法与实施例13中相同。实施例15以枝顶孢霉菌y0997在处理土壤中滴滴伊的用途为例，其使用方法步骤如下：(1)农药污染土壤理化性质测定按照常规方法对土壤中含有农药污染以及营养状况、含水量进行测定。(2)农药残留土壤预处理对滴滴伊污染为3～8mg/kg的土壤进行预处理，敲碎大块土块，去除杂物。(3)调节土壤中c、n、p元素的含量向步骤(2)待处理的土壤中依次加入尿素、k2hpo4、kh2po4，使得土壤中c：n：p元素的质量比为100：10：1，其中具体添加量尿素为0.318mg/kg～0.848mg/kg、k2hpo4为0.041mg/kg～0.111mg/kg、kh2po4为0.032mg/kg～0.086mg/kg，加水调节土壤的含水量为30％，混匀，调ph为4.5～6.5。(4)添加表面活性剂将鼠李糖脂表面活性剂加入步骤(3)土壤中，加入量为180mg/kg土壤。(5)制备枝顶孢霉菌种子液制备枝顶孢霉菌种子液的步骤与实施例1相同。(6)制备枝顶孢霉菌菌液制备枝顶孢霉菌菌液的步骤与实施例1相同。(7)添加枝顶孢霉菌菌液向土壤中接入枝顶孢霉菌菌液，接种量为120g/kg，再加入有机肥料，有机肥料的添加量为1200mg/kg，混匀，将污染土壤的表面用塑料薄膜覆盖，通气，维持土壤含水率为30％，15～35℃处理90天。(8)测定滴滴伊降解率测定土壤中滴滴伊降解率的方法与实施例13中相同。当前第1页12