专利名称：一种粗壮脉纹胞菌发酵生产β-胡萝卜素的方法
技术领域：
本发明涉及一种粗壮脉纹胞菌发酵生产3-胡萝卜素的方法。
背景技术：
P-胡萝卜素主要作为天然色素和营养强化剂使用，可防治人体维生素A 的缺乏症和干眼病等。近年来研究还表明，天然(3-胡萝卜素在防癌抗癌和预 防心血管疾病等方面有明显作用。目前国内外用于生产P-胡萝卜素的菌株主 要有克拉克须霉菌(/V2yeowyoce5 6緣asA:ea"W50、三孢布拉霉菌(5/afes/ea 的^wra)和红酵母(及/z^fotora&)。其中克拉克须霉菌产量低，没有经 济价值。三孢布拉霉菌生长十分迅速，生物量高，培养48h每升发酵液 可获得50 g以上的干菌种，产P-胡萝卜素的能力强，培养5 d 6 d总胡萝卜 素产量在lg/L以上，其中80% 90%是0-胡萝卜素，该菌是实现工业化生 产的好菌种。发明内容本发明的目的在于提供一种粗壮脉纹胞菌发酵生产P -胡萝卜素的方 法，该方法生产成本低，周期短，操作简单方便的生产P-胡萝卜素。 本发明是这样来实现的，其特征是生产方法为(1) 称取按质量豆渣米糠为1 8:1混合，将其混合均匀后润水蒸料；(2) 蒸料完成后冷却至室温，接种粗壮脉纹胞菌，于20 °C 50 t:培养 条件下培养ld 5d;(3) 发酵结束，65 °C 80 'C条件下干燥发酵培养基或收集孢子，用超 声破碎仪破碎菌体成熟孢子，用有机溶剂提取e-胡萝卜素；(4)对3-胡萝卜素进行分离、纯化、干燥，得0-胡萝卜素成品。 本发明的优点是1、采用粗壮脉纹胞菌发酵生产P-胡萝卜素，产品质 量好，产量高；2、用豆渣和米糠为培养基，原料易得低廉生产成本低；3、 粗壮脉纹胞菌发酵周期短，生产效率高，过程易控制，可操作性强。
具体实施方式
实施例一将豆渣和米糠按2:1混合均匀后润水蒸料，熟料冷却至室温迅速揉碎， 接种粗壮脉纹胞菌，于20 °C 50 。C温度条件下培养1 d 5 d，菌体成熟后 于65 °C 80 r条件下干燥培养基(或收集孢子)，向干燥的培养基中加 入适量丙酮用超声破碎仪破碎菌体成熟孢子，再用乙酸乙酯用同样方法反 复两次提取卩-胡萝卜素，合并提取液并置于分液漏斗中，水洗两次，每次 8mL 10mL，弃去水层。有机层自分液漏斗上口倒入干燥的小三角瓶中， 加入适量无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥过夜。过滤，减压蒸馏浓縮至1 mL 2mL。所得浓縮液即为P-胡萝卜素样品。最后利用分光光度法测定产 量为17.00 ng/g干重培养基，158.50 pg/g孢子。 实施例二将豆渣和米糠按3:1混合均匀后润水蒸料，熟料冷却室温左右迅速揉 碎，接种粗壮脉纹胞菌，于4(TC 50 。C温度条件下培养3 d 5 d，菌体成 熟后于65 °C 80 "C条件下干燥培养基(或收集孢子)，向干燥的培养基 中加入适量丙酮用超声破碎仪破碎菌体成熟孢子，再用乙酸乙酯用同样方 法反复两次提取卩-胡萝卜素，合并提取液并置于分液漏斗中，水洗两次， 每次15mL，弃去水层。有机层自分液漏斗上口倒入干燥的小三角瓶中，加入适量无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥过夜。过滤，减压蒸馏浓縮至1 mL~2mL。所得浓縮液即为P-胡萝卜素样品。最后利用分光光度法测定产量为 15.00 pg/g干重培养基，150.03 pg/g孢子。 实施例三将豆渣和米糠按5:1混合均匀后润水蒸料，熟料冷却至37 r左右迅速 揉碎，接种粗壮脉纹胞菌，于20 °C~45 "温度条件下培养3d 5d，菌体 成熟后于65 °C 80 "C条件下干燥培养基(或收集孢子)，向干燥的培养基 中加入适量丙酮用超声破碎仪破碎菌体成熟孢子，再用乙酸乙酯用同样方 法反复两次提取P-胡萝卜素，合并提取液并置于分液漏斗中，水洗两次，每 次20mL，弃去水层。有机层自分液漏斗上口倒入干燥的小三角瓶中，加入 适量无水硫酸镁或无水硫酸钠干燥过夜。过滤，减压蒸馏浓縮至lmL 2 mL。所得浓縮液即为卩-胡萝卜素样品。最后利用分光光度法测定产量为 20.00 lig/g干重培养基，160.84 pg/g孢子。
权利要求
1、一种粗壮脉纹胞菌发酵生产β-胡萝卜素的方法，其特征是生产方法为(1)称取按质量豆渣米糠为1～8∶1混合，将其混合均匀后润水蒸料；(2)蒸料完成后冷却至室温，接种粗壮脉纹胞菌，于20℃～50℃培养条件下培养1d～5d；(3)发酵结束，65℃～80℃条件下干燥发酵培养基或收集孢子，用超声破碎仪破碎菌体成熟孢子，用有机溶剂提取β-胡萝卜素；(4)对β-胡萝卜素进行分离、纯化、干燥，得β-胡萝卜素成品。
全文摘要
一种粗壮脉纹胞菌发酵生产β-胡萝卜素的方法，其特征是生产方法为(1)称取按质量豆渣∶米糠为1～8∶1混合，将其混合均匀后润水蒸料；(2)蒸料完成后冷却至室温，接种粗壮脉纹胞菌，于20℃～50℃培养条件下培养1d～5d；(3)发酵结束，65℃～80℃条件下干燥发酵培养基或收集孢子，用超声破碎仪破碎菌体成熟孢子，用有机溶剂提取β-胡萝卜素；(4)对β-胡萝卜素进行分离、纯化、干燥，得β-胡萝卜素成品。本发明的优点是1.产品质量好，产量高；2.用豆渣和米糠为培养基，原料易得低廉生产成本低；3.粗壮脉纹胞菌发酵周期短，生产效率高，过程易控制，可操作性强。
文档编号C12R1/645GK101575632SQ20091011555
公开日2009年11月11日 申请日期2009年6月19日 优先权日2009年6月19日
发明者蓉 刘, 静 李, 李红艳, 范亚苇, 贾才华, 邓泽元 申请人:南昌大学