一种ASE法萃取蓖麻子中蓖麻碱的方法与流程

本发明属于蓖麻碱的提取领域，尤其是一种ase法萃取蓖麻子中蓖麻碱的方法。

背景技术：

《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：取本品粉末(过二号筛)约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流提取4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

该方法耗时长，对技术人员的专业水平要求较高。

技术实现要素：

针对上述不足，本发明旨在提供一种ase法萃取蓖麻子中蓖麻碱的方法，该方法萃取时间短且提取效果与药典一样。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ase法萃取蓖麻子中蓖麻碱的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：将蓖麻子样品粉碎，过二号筛，取1g与1g硅藻土混合；

步骤2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的ase萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤3：用正己烷萃取除杂，再用50％甲醇萃取，结束后，用甲醇将其定容至25ml。

优选地，步骤3所述的除杂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。

优选地，步骤3所述的提取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。

优选地，所述的ase萃取池的体积为10ml。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1、本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用石油醚加热回流1h除酯后，采用50％甲醇加热回流1h，杂质较少。而石油醚易挥发，易燃，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、50％甲醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，50％甲醇提取后蓖麻碱含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。

2、在除杂过程中，药典方法加入石油醚加热回流4h，时间相对较长，石油醚易挥发，易燃，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，3次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数3次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取2次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。

附图说明

图1为以蓖麻子对照品的浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归图；

图2为蓖麻子对照品的色谱图；

图3为采用ase法萃取所得的供试品溶液的色谱图；

图4为采用药典方法提取所得的供试品溶液的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(xa205du)、ase350快速溶剂萃取仪(美国dionex公司)、thermou3000uhplc液相色谱仪

1.2水：符合gb/t6682规定的一级水。

2、方法

2.1对照品溶液的制备：取蓖麻碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柚皮苷0.17mg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备

2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：

取本品粉末(过二号筛)约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)适量，加热回流提取4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转移至具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2快速溶剂萃取法(ase)制备供试品方法：

样品经粉碎机粉碎，过二号筛，取1.0g，精密称定，与约1g硅藻土混合均匀，待用，移入到预先放好纤维滤膜的ase10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖，放入快速萃取仪中进行萃取。萃取结束后，把萃取液转移至25ml容量瓶中，用少量甲醇清洗萃取瓶3次合并至容量瓶中，使用甲醇定容至刻度，即得。

2.3ase萃取条件

除杂参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。

提取参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为80％，吹扫时间为100s。

2.4色谱条件与系统适用性试验

a)仪器：thermo双三元液相(u-3000)；

b)色谱柱：thermosyncronisdim.(mm)aq，1.7μm，50×2.1mm；

c)柱温：40℃；

d)流速：0.3ml/min；

e)流动相：水：乙腈(90：10)；

f)检测波长：307nm；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。

2.5测定法

照高效液相色谱法(通则0512)测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.6标准限值要求

本品按干燥品计算，含蓖麻碱不得过0.32％。

2.7计算(外标法)

式中cr—对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/l)；

ax—供试品的峰面积；

ar—对照品峰面积。

注意：

使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；

萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；

萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；

开机前检查气瓶气压是否达到1mpa；

使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。

3、结果

3.1线性关系

取蓖麻碱对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.7mg的溶液，即得，然后分别精密吸取该溶液0.1μl、0.3μl、0.5μl、1.0μl、1.2μl、1.5μl进入lc测定，并依照上述方法测定，结果见表1。

以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归，详见图1，求得回归方程：柚皮苷y＝7708.7x-28.51，r²＝1,蓖麻碱在0.015～0.233mg/ml围内呈良好的线性关系。

表1线性实验结果

3.2重现性实验

取相同批号的样品(批号：蓖麻子2)1.0g，共4份，精密称定，按上述ase提取方法提取供试品溶液，进样量为1μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中蓖麻碱的含量见表2，rsd为0.01％，试验表明ase提取方法重复性良好。

表2重现性实验结果

3.3精密度和稳定性试验

取蓖麻碱对照品溶液(0.1553mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，见图2，峰面积rsd为0.30％，表明仪器精密度良好。

取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，8，10h依法测定。结果蓖麻碱峰面积的rsd为0.32％，表明供试品溶液在12h内稳定。

其中，采用ase萃取的样品色谱图见图3，采用药典方法提取的样品色谱图见图4。

3.4样品不同仪器提取结果及与药典方法结果比较(2批)

表3不同ase仪的提取含量结果

表4ase与药典方法提取的样品含量结果

4、讨论

4.1ase提取溶剂的选择：

试验中曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用石油醚加热回流1h除酯后，采用70％甲醇加热回流1h，杂质较少。而石油醚易挥发，易燃，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、70％甲醇作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，70％甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。

4.2ase提取条件的优化

在除杂过程中，药典方法加入石油醚加热回流4h，时间相对较长，石油醚易挥发，易燃，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，3次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数3次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取2次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。

以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围内。