蛋白A包覆磁性纳米团簇以及制备方法及其在捕获抗体方面的应用与流程

文档序号:20875837发布日期:2020-05-26 16:30阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种蛋白a包覆磁性纳米团簇,其特征在于:它的磁性单元是30-80nm小尺寸的四氧化三铁纳米团簇,该纳米复合材料具有粒径小、分散性好、磁响应强的特点。

2.一种蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于:将水合三氯化铁,乙酸胺,乙二醇,聚丙烯酸和柠檬酸钠混合超声,利用微波辅助多元醇法制备富含羧基的小尺寸四氧化三铁纳米团簇,然后在磁性团簇表面通过活化负载蛋白a,制得所述蛋白a包覆磁性纳米团簇。

3.根据权利要求2所述的蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于具体步骤如下:

①称取水合三氯化铁,乙酸胺溶于乙二醇中,超声后加入聚丙烯酸和柠檬酸钠,继续超声,直到混合液变为亮红色;

②将①得到的溶液倒入微波反应管中,设定加热温度和反应时间,进行微波反应,反应完毕后,得到黑色液体;用乙醇与去离子水交替离心洗涤三次,低压冷冻干燥后得到羧基化的fe3o4纳米团簇;

③利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺活化fe3o4纳米团簇的羧基;

④使用磷酸缓冲盐溶液洗涤活化后的磁性物质,磁分离,弃上清液;再加入蛋白a,在样品混合仪上室温震荡反应过夜,得到蛋白a包覆磁性纳米团簇。

4.根据权利要求3所述的蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述的水合三氯化铁与乙酸胺的摩尔比为1:3-1:5,聚丙烯酸和柠檬酸钠分别固定为1.39mmol和0.3mmol。

5.根据权利要求4所述的蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述的微波反应前驱液须最终呈现亮红色,反应完全后方可进行后续的微波反应。

6.根据权利要求5所述的蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述的微波反应加热温度为220-260°c,反应时间为30-60min。

7.根据权利要求7所述蛋白a包覆磁性纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述中蛋白a的浓度为1mg/ml,加入量的体积范围为50μl-100μl。

8.用权利要求1所述的蛋白a包覆磁性纳米团簇进行捕获抗体的检测方法,其特征在于包括如下步骤:

①将两份荧光素标记的人免疫球蛋白g分别与pbs分散的磁性纳米团簇和蛋白a包覆磁性纳米团簇混合,室温下孵育,磁分离后进行荧光测试;

②利用荧光光谱仪对蛋白a包覆磁性纳米团簇捕获抗体的能力进行检测,对比磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白g与蛋白a包覆磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白g的荧光强度;

③利用荧光电子显微镜对蛋白a包覆磁性纳米团簇捕获抗体的能力进行表观分析,对比磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白g与蛋白a包覆磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白g的荧光强度。

9.一种蛋白a包覆磁性纳米团簇在捕获抗体方面的应用。


技术总结
本发明公开了一种蛋白A包覆磁性纳米团簇以及制备方法及其在捕获抗体方面的应用,属于纳米磁性材料和生物技术领域。制备方法包括将水合三氯化铁、乙酸胺、乙二醇、聚丙烯酸和柠檬酸钠混合超声,利用微波辅助多元醇法制备了富含羧基的小尺寸四氧化三铁纳米团簇,然后在磁性团簇表面通过活化负载蛋白A,制得所述蛋白A包覆磁性纳米团簇。本发明充分结合了微波辅助加热法、蛋白A定向连接抗体以及荧光检测,制备了高性能的蛋白A包覆磁性纳米团簇,并且设计了一种简单有效检测捕获抗体的方法。蛋白A作为衔接蛋白定向连接抗体和磁性纳米团簇,这种特异性结合的技术在生物医学领域有重要价值。

技术研发人员:刘一丹;左显维;韩根亮;冯治棋;何欣
受保护的技术使用者:甘肃省科学院传感技术研究所
技术研发日:2019.12.24
技术公布日:2020.05.26
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