一种制作CEF细胞的鸡胚破碎装置的制作方法

本技术属于疫苗制备技术过程中cef细胞制作领域，尤其涉及一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置。

背景技术：

1、鸡胚就是鸡的胚胎，在疫苗的开发和研究中有着不可替代的作用。鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast，cef)是最早用于体外培养的细胞之一，它具有取材相对容易，增值能力强，适应性强，良好的耐受性，性状比较稳定，不易发生转化等特点，因此使得其被广泛应用于分子和细胞生物学研究等许多方面，同时也是疫苗生产的一种重要的细胞资源。用它可生产多种鸡的疫苗，如法氏囊、新城疫、马立克疫苗等。cef制备在疫苗生产中是很重要、也是最关键的一步，其制备过程主要包括鸡蛋的孵化、消毒、取出鸡胚、破碎、胰酶消化、分散细胞、分装细胞等过程。鸡胚破碎时，需要将鸡胚无菌破碎成米粒大小的组织块，然后经胰酶消化，使组织中细胞之间连接破坏，将组织离散成单细胞，加细胞营养液后分装于细胞瓶进行细胞增殖培养，在适宜的条件下细胞有丝分裂，最终形成致密的单层细胞供生产或研究使用。

2、cef制备过程主要包括鸡蛋的孵化、消毒、取出鸡胚、破碎、胰酶消化、分散细胞、分装细胞等过程。受精的鸡蛋经恒温恒湿孵化机孵育至9～11日龄，将发育良好的鸡胚外表消毒，剪去鸡胚气室部位蛋壳，无菌挑出鸡胚，再去掉头、爪和内脏，用洗液冲洗鸡胚，在容器内破碎鸡胚，再次洗胚除掉组织中血液，然后把破碎的鸡胚移入三角瓶中加入胰酶水浴消化，待组织发白、疏松时，倒出消化液并终止消化，分散细胞并用细胞培养液制备成细胞悬液，定量分装至细胞瓶恒温进行培养，一般24h细胞长成致密单层。

3、cef制备过程中的细胞破碎质量直接影响组织消化的好坏，组织消化的好坏又对细胞培养成功或质量起决定性作用。鸡胚破碎时，需要将鸡胚无菌破碎成米粒大小的组织块，然后经胰酶消化，使组织中细胞之间连接破坏，将组织离散成单细胞，加细胞营养液后分装于细胞瓶进行细胞增殖培养，在适宜的条件下细胞有丝分裂，最终形成致密的单层细胞供生产或研究使用。

4、现有的鸡胚破碎技术是人工剪切，即在烧杯中拿剪刀进行反复裁剪，很难做到把鸡胚剪切得大小均匀，常出现鸡胚剪切得到的团块有大有小，不均匀一致，在加胰酶消化时，消化程度很难把握，也无法合理把握。以小块组织消化到位终止消化时，大块组织还未消化完全，在进行细胞培养时，一则因分散的细胞数量不足造成细胞增殖减慢，二则未消化的组织团块不易贴附瓶壁，在细胞瓶旋转时滑动将所在之处一圈细胞刮掉，造成细胞生长不均匀；以大块组织消化到位终止消化时，小块组织则消化过火，细胞膜被胰酶消化破坏引起细胞死亡，在进行细胞培养时，死细胞粘附于瓶壁，影响活细胞的生长，造成细胞生长缓慢，死细胞还会释放胺类毒性物质，影响活细胞活性，造成细胞受伤变形，逐渐聚集，停止增殖。另外，由于人工剪切，耗时较长，增加了污染的风险几率，一旦细胞污染就无法培养成功，以失败告终。

技术实现思路

1、本实用新型的目的是提供一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，以解决鸡胚人工剪切后大小不一，导致细胞死亡的问题。

2、本实用新型采用以下技术方案：一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，包括：

3、容纳筒，其内用于盛放鸡胚，其底部均匀开设有多个通过孔，

4、推动杆，竖向设置、且位于容纳筒内，

5、按压板，位于容纳筒内，水平设置，其上侧与推动杆的下端固定连接，用于自上而下沿容纳筒的轴线在推动杆的推动下移动，进而将容纳筒内的鸡胚挤压，使得鸡胚经过通过孔后破碎成大小均匀的颗粒，进而进行培养细胞，按压板上均匀开设有多个挤压孔，

6、剪切管，竖向设置，套设在推动杆的外围，其下端固定连接有多个弯刀，多个弯刀沿剪切管的轴线呈放射状排布，多个弯刀用于对进入容纳筒的鸡胚进行手动预破碎，进而使得鸡胚通过挤压孔后，被按压板挤压再经过通过孔。

7、进一步地，还包括：

8、推动板，水平设置，位于容纳筒的外部上侧，

9、多个立杆，竖向设置，位于容纳筒内腔，其上端与推动板的下侧固定连接，其下端固定连接有挤压板，各挤压板的直径与挤压孔的直径相同、且与挤压孔对应设置，多个挤压板用于在待鸡胚从挤压孔进入容纳筒下部后，伸入挤压孔并卡在挤压孔内，进而随着按压板一起向下运动，对鸡胚进行挤压。

10、进一步地，推动板中心开设有伸入孔，伸入孔用于推动杆的上端自下而上伸入，还用于剪切管的上端自下而上伸入。

11、进一步地，沿各挤压孔的下侧边沿设置有环状的挡板，各挡板的外沿与挤压孔的内沿固定连接，各挡板用于抵在立杆的下端，避免立杆伸出挤压孔的下侧，进而配合按压板对鸡胚进行挤压。

12、本实用新型的有益效果是：

13、1、本实用新型保证了鸡胚破碎的均一度，进而容易把握鸡胚的消化进程，达到鸡胚组织消化程度的同步，避免消化过火造成的死细胞或未消化的组织块，产生的单个细胞数量多，能较快培养形成致密、均匀、光滑的单层细胞；

14、2、本实用新型缩短了鸡胚破碎时间，降低了细胞污染的风险，保证了细胞培养的成功率；能较快培养形成致密、均匀、光滑的单层细胞供生产或研究使用；

15、3、本实用新型可以在容纳筒内的密闭状态下破碎鸡胚，防止因鸡胚破碎时开放操作而带来的污染风险，提高了细胞培养的成功率；

16、4、本实用新型通过设置剪切管，可以对鸡胚进行预破碎，进而加快鸡胚破碎的速度，提高生产效率。

技术特征：

1.一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，其特征在于，还包括：

3.根据权利要求2所述的一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，其特征在于，所述推动板(5)中心开设有伸入孔，所述伸入孔用于推动杆(2)的上端自下而上伸入，还用于剪切管(4)的上端自下而上伸入。

4.根据权利要求2所述的一种制作cef细胞的鸡胚破碎装置，其特征在于，沿各所述挤压孔(8)的下侧边沿设置有环状的挡板，各所述挡板的外沿与挤压孔(8)的内沿固定连接，各所述挡板用于抵在立杆(6)的下端，避免立杆(6)伸出挤压孔(8)的下侧，进而配合按压板(3)对鸡胚进行挤压。

技术总结
本技术公开了一种制作CEF细胞的鸡胚破碎装置，包括：容纳筒，其内用于盛放鸡胚，其底部均匀开设有多个通过孔，推动杆，按压板，其上侧与推动杆的下端固定连接，用于自上而下沿容纳筒的轴线在推动杆的推动下移动，进而将容纳筒内的鸡胚挤压，使得鸡胚经过通过孔后破碎成大小均匀的颗粒，进而进行培养细胞，按压板上均匀开设有多个挤压孔，剪切管，套设在推动杆的外围，其下端固定连接有多个弯刀；本技术保证了鸡胚破碎的均一度，进而容易把握鸡胚的消化进程，达到鸡胚组织消化程度的同步，避免消化过火造成的死细胞或未消化的组织块，产生的单个细胞数量多，能较快培养形成致密、均匀、光滑的单层细胞。

技术研发人员：胡春艳,胡江锋
受保护的技术使用者：杨凌绿方生物工程有限公司
技术研发日：20230406
技术公布日：2024/1/13