专利名称：一种蛋白质芯片的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及芯片技术和体外临床诊断检测技术领域，更确切地说，涉及一种适于多指标、多人份并行检测的蛋白质芯片。
背景技术：
利用抗原、抗体反应检测疾病是一种成熟的、重要的诊断方法，在临床上已获得了广泛应用。但是，目前的免疫学检测方法，如ELISA、放射同位素标记、金标、荧光、化学发光、时间分辨荧光等，大多是单指标检测，严格地说，是一种单指标、多人份检测，如果能变为一多指标、多人份检测，则检测效率会有很大提高，耗费的时间、人力将会大大减少。
蛋白质芯片技术的发展，为实现临床诊断的快速化、并行化、高通量化，即多指标、多人份同时检测提供了可能。Ruo-pan Huang、Thomas.o.Joos对如何在NC、PDVF等膜上构建蛋白质微点阵及进行疾病诊断进行了研究，其方法、原理为(1)用高速机器人点样仪把相应疾病的抗原或抗体点到膜上，(2)加待测血清于膜上反应，(2)加标记过的反应液，(3)加化学发光液，(4)用CCD获取图像，(5)对图像进行分析，诊断疾病。同一张膜上可构建多个蛋白质点阵，每个点阵检测一人份，每个点阵内部可放置不同疾病的抗原或抗体，进行多指标检测，据此，一张膜可实现多人份、多指标并行化处理。
然而，利用上述原理制造出临床上方便应用的蛋白质芯片产品，还必须解决以下问题1、要把各个蛋白质点阵分开，不同人份的免疫反应单独进行，2、膜的两面都要方便清洗，3、防止反应过程中试剂渗漏(膜的通透性很大)，4、反应后的膜能方便取出，以便CCD进行图像处理。
因此，本领域迫切需要开发新的使用方便的蛋白质芯片。
发明内容
本实用新型的目的在于针对上述问题，提供一种可用于临床应用的多指标、多人份并行化疾病检测蛋白质芯片。该芯片不仅可方便清洗，而且可防止反应过程中试剂渗漏，更能在反应后的将膜方便取出，以便CCD进行图像处理。
本实用新型提供了一种蛋白质芯片，它含有以下组件一底座(50)，所述底座四周具有凸起的边框(52)以及凹陷的凹槽(54)；一粘片(40)，所述的粘片放置于底座的凹槽内，并且其上表面为粘性表面；一膜片(30)，位于粘片(40)的上方，其上有蛋白质微阵列区域(32)，所述的每个微阵列区域含有2-100个蛋白质点样点(34)；一覆膜(20)，位于膜片(30)的上方，下表面有粘性，其上有孔阵列(22)，且孔阵列的各孔(24)与膜片上的蛋白质点样点(34)的位置相对应；一反应板(10)，所述反应板可嵌入底座的凹槽(54)中，且具有孔阵列(12)；其中，各个组件是相互分离的，且迭放一起时，所述的反应板的孔阵列、覆膜的孔阵列和蛋白质微阵列区域相互对应。
在一优选例中，反应板(10)、覆膜(20)、膜片(30)、粘片(40)的形状、大小与底座凹槽的形状、大小是相同的。
在另一优选例中，所述膜片(30)以蛋白质微阵列为单位平均分割成若干小膜片，小膜片之间有缝隙。
在另一优选例中，覆膜(20)的材料选自下组塑料、聚乙烯、聚丙烯、或尼龙。
在另一优选例中，膜片(30)选自下组NC膜、PDVF膜。
在另一优选例中，粘片(40)的材料选自下组塑料、橡胶、或金属。
在另一优选例中，所述的孔阵列具有4-10000个孔。
在另一优选例中，所述的反应体(10)上的孔为矩形、圆形或椭圆形，且覆膜上孔的直径为膜片上的蛋白质点样点的直径1.5-50倍。
在另一优选例中，所述的反应板和底座的凹槽形状、大小、高度相同，外形基本上为矩形、六边形、八边形或圆形。
图1是本实用新型的一种实例的部件分解图。
具体实施方式
参见图1，本实用新型的蛋白质芯片包括底座50、粘片40、膜片30、覆膜20、反应板10等五个组件，各组件相互独立。此外，还可含有任选的固定夹，用于将上述组件固定在一起。
底座50为带有凹槽54的平板，凹槽的底部为平面，四周为边框52。
粘片40两面有粘性，位于底座50的槽内，材料为塑料、橡胶、金属等。
膜片30位于粘片40的上方，其上有蛋白质微阵列32，材料可为NC、PDVF等。
覆膜20位于膜片的上方，下表面有粘性，其上有孔阵列，为塑料、聚乙烯、聚丙烯、尼龙等材料。
反应板10为多孔板，其上孔的形状为方形、圆形等，孔的数量为4-10000个，较佳地9-1000个，更佳地16-1000个。
覆膜20、膜片30、粘片40的形状、大小与底座凹槽的形状、大小是相同的。
反应板10上的孔12与膜片30上的每个蛋白质点阵区域32、覆膜20上的每一个孔阵列22相对应。覆膜上每个孔24的大小比膜片30上的蛋白质点样点34的大小稍大，通常覆膜上孔的直径为膜片上的蛋白质点样点的直径1.5-50倍，较佳地为5-20倍。
反应板和底座的凹槽形状、大小、高度相同。外形没有特别限制，基本上可以为矩形、六边形、八边形或圆形。
本发明蛋白质芯片的各个组件是可相互分离的，且当迭放在一起时，所述的反应板的孔阵列、覆膜的孔阵列和蛋白质微阵列区域相互对应。
一种分别的固定方式是将反应板10可嵌入底座的凹槽内。此外，必要时，还可利用固定夹固定，所述固定夹用于夹持迭在一起的反应板、覆膜、膜片、粘片、和底座的边缘。
至于反应板10、和底座50的材料，可以选用塑料、玻璃、金属或陶瓷材料。
作为反应体主要构件的蛋白质膜片可以是蛋白质芯片领域中常用的各种膜片，例如硝酸纤维素(NC)膜片、PDVF膜片等。
在本实用新型的另一优选例中，所述膜片以蛋白质微阵列为单位分割为多个小膜片，小膜片之间有缝隙，每一个小膜片及上面的方阵对应着反应板、底座上面的孔，反应板不同孔之间的反应单独进行，试剂液不会相互渗透。
本实用新型所述反应板、垫片与底座上凹槽的形状、大小相同、对应，其上孔的数量、大小、位置相同、对应。
至于反应板和底座等组件的孔阵列的各孔的大小，没有特别限制，例如为约1毫米×1毫米至20毫米×20毫米，较佳地为约5-10毫米×5-10毫米。
至于孔深度，也没有特别限制，通常为1-20毫米，较佳地为5-10毫米。
各反应孔的体积也没有特别限制，通常为25微升-5000微升，较佳地为约100-500微升。
在本实用新型的反应板的各孔中，可进行不同人份的免疫学反应。由于覆膜上的各孔的直径大于对应的蛋白质点样点的直径，因此膜片上的点样点暴露在反应液中。同时，由于覆膜的保护作用，防止了膜片在洗涤等步骤中破损。此外，由于各反应孔是独立的，且各孔所对应的蛋白质点样点阵列含有多个点样点，因此不仅各孔的反应互不相干，而且每个孔可进行多指标的检测。
本实用新型的主要优点在于(a)结构简单，装配方便，(b)降低信号本底，而且信号的本底值均一化，(c)能有效地防止样品的交叉污染，(d)易于实现装配、洗涤、检测的自动化，一次可以检测多人，每人可以检测多个指标，缩短了检测时间，节省了人力，大大提高了疾病诊断的效率。
下面以病毒性肝炎检测芯片为具体实例进一步阐述本实用新型，但并不限制本实用新型的范围。
实施例1采用图1、图2所示的蛋白质芯片。该蛋白质芯片，包括底座(50)、粘片(40)、膜片(30)、覆膜(20)、反应板(10)。底座(50)为有凹槽的塑料板，槽深5mm，底部为平面。粘片(40)由橡胶材料制成，两面有粘性，下粘性面粘于底座(50)凹槽内。膜片(30)选用NC膜，上有30个由5×5个点组成蛋白质微阵列，微阵列包含了甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎的12种标志物的抗原或抗体，点样点的直径为0.4mm，膜片(30)的下表面粘于粘片(40)的上方。覆膜(20)下表面有粘性，位于膜片的上方，采用聚乙烯材料，其上有30个与膜片(30)上的蛋白质样点阵列对应的、由5×5个孔组成的孔阵列，每个孔的直径为0.5mm(比蛋白质点样点的直径大)。反应板(10)为30孔塑料板，孔的形状为方形的，孔的高度为5mm，孔的横截面边长为7mm，每一个孔与膜片(30)上的每一个蛋白质阵列、覆膜(20)上的每一个孔阵列对应。底座(50)上凹槽的形状与粘片、膜片、覆膜的形状、大小相同，反应板和底座的凹槽形状、大小、高度相同，外形为矩形。
组装方法(1)用高速点样仪在NC膜上构建蛋白质点阵。
(2)用打孔器在覆膜上制作孔阵列。
(3)将膜片(30)的背面粘于粘片(40)上，用切割器以蛋白质点阵为单位将NC膜切割成小膜片。
(4)覆膜(20)上的孔阵列与膜片(30)上的蛋白质点阵列对应，将二者粘合在一起，注意每一个孔与每一个蛋白质样点应严格对应。
(5)将膜片(30)、覆膜(20)与粘片(40)的复合体粘于底座的槽内。
(6)将反应板(10)放置、夹持于底座槽内，其上每一个孔对应覆膜上的每个孔阵列、膜片(30)上的每个蛋白质样点阵列。
检测方法(1)加一定稀释的待检血清样品100ul于反应室的反应孔中(同时做空白孔、阴性对照孔及阳性对照孔)，37℃孵育30分钟；(2)洗板机洗涤15分钟，拍干；(3)在各反应孔内加反应液100ul，37℃温浴30分钟；(4)用洗板机洗涤15分钟，拍干；(5)加发光液50ul；(6)将芯片放入CCD芯片检测仪检测；(7)计算机图像分析，图像上的亮点，表示阳性反应，发光强度越高，表示待检物质的含量越高。
结果，本发明的蛋白质芯片可灵敏准确地用于使用方便，可实现蛋白质检测的多人份、多指标并行化处理，且操作过程非常简便。
应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求1.一种蛋白质芯片，其特征在于，它含有以下组件一底座(50)，所述底座四周具有凸起的边框(52)以及凹陷的凹槽(54)；一粘片(40)，所述的粘片放置于底座的凹槽内，并且其上表面为粘性表面；一膜片(30)，位于粘片(40)的上方，其上有蛋白质微阵列区域(32)，所述的每个微阵列区域含有2-100个蛋白质点样点(34)；一覆膜(20)，位于膜片(30)的上方，下表面有粘性，其上有孔阵列(22)，且孔阵列的各孔(24)与膜片上的蛋白质点样点(34)的位置相对应；一反应板(10)，所述反应板可嵌入底座的凹槽(54)中，且具有孔阵列(12)；其中，各个组件是相互分离的，且迭放一起时，所述的反应板的孔阵列、覆膜的孔阵列和蛋白质微阵列区域相互对应。
2.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，反应板(10)、覆膜(20)、膜片(30)、粘片(40)的形状、大小与底座凹槽的形状、大小是相同的。
3.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，所述膜片(30)以蛋白质微阵列为单位平均分割成若干小膜片，小膜片之间有缝隙。
4.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，覆膜(20)的材料选自下组塑料、聚乙烯、聚丙烯、或尼龙。
5.根据权利要求2所述的蛋白质芯片，其特征在于，膜片(30)选自下组NC膜、PDVF膜。
6.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，粘片(40)的材料选自下组塑料、橡胶、或金属。
7.如权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，所述的孔阵列具有4-10000个孔。
8.如权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，所述的反应体(10)上的孔为矩形、圆形或椭圆形，且覆膜上孔的直径为膜片上的蛋白质点样点的直径1.5-50倍。
9.如权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，所述的反应板和底座的凹槽形状、大小、高度相同，外形基本上为矩形、六边形、八边形或圆形。
专利摘要本实用新型公开了一种蛋白质芯片，它含有以下组件一底座(50)，所述底座四周具有凸起的边框(52)以及凹陷的凹槽(54)；一粘片(40)；一膜片(30)；一覆膜(20)；一反应板(10)，所述反应板具有孔阵列(12)且可嵌入底座凹槽；其中，各个组件是相互分离的，且叠放一起时，所述的反应板的孔阵列、覆膜的孔阵列和蛋白质微阵列区域相互对应。本实用新型使用方便，可实现多人份、多指标并行化处理。
文档编号G01N33/50GK2593194SQ0228824
公开日2003年12月17日 申请日期2002年12月13日 优先权日2002年12月13日
发明者穆海东 申请人:穆海东