专利名称：一种灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种药品或保健品质量分析方法，具体是涉及一种测定灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其制剂中麦角甾醇含量的方法。
背景技术：
灵芝是担子菌纲多孔菌科(Polyproraceae)灵芝属(Ganoderma)真菌赤芝[Ganoderma lucidium(Leyss.ex Fr.)Karst.]和紫芝[Ganodermajaponicum(Fr.)Lloyd.]的总称，具有扶正固本等功效，被《本经》称为上品。灵芝孢子(Ganoderma lucidiumspore)是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质，其药用价值也正日益受到重视。灵芝孢子的药理作用主要有抗肿瘤、免疫调节、调节血脂以及对神经、心血管和呼吸系统有调节改善作用。关于灵芝孢子的产品也越来越多，如灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其它们的制剂有灵芝孢子油软胶囊、灵芝孢子油脂肪乳注射剂、灵芝孢子油脂肪乳口服剂、灵芝孢子粉胶囊、灵芝孢子粉片、灵芝孢子粉散剂等，但真假难分，质量优劣难分，没有一种好的控制质量的方法。
灵芝孢子的化学成分复杂，文献报道有以下几类甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯、蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、和无机离子类等。现有报道控制灵芝孢子质量的文献主要集中在水溶性成分灵芝多糖的含量测定，而对脂溶性成分的含量测定主要是用紫外光谱法测定灵芝孢子油中的总三萜含量，但在灵芝孢子粉中三萜的含量很少，且测定时专属性不强，在其它植物油用同样的方法中也能测到总三萜类成分；用高效液相色谱法几乎测不到总三萜中单一成分，用来评价孢子粉及孢子油的质量有一定的局限性。现仍未有用麦角甾醇的含量来评价灵芝孢子粉、孢子油及其制剂质量的文献报道。
麦角甾醇是菌类植物特有成分，不仅存在于灵芝孢子粉中，在灵芝孢子油中亦有麦角甾醇。作为脂肪油是灵芝孢子油为目前文献所报导的唯一的菌类植物油，因此，麦角甾醇亦是灵芝孢子油区别于其它植物油的特征成分。灵芝孢子中含有较高含量的脂肪油，约20％～30％，可通过提取直接制成灵芝孢子油。灵芝孢子油主含脂肪酸，也含甾醇类，具有与灵芝孢子粉相同的功效。所以建立灵芝孢子粉、灵芝孢子油及其制剂中麦角甾醇的测定含量方法是控制其质量的一种有效方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的既能控制灵芝孢子粉又能控制灵芝孢子油及其制剂的质量的测定方法，具体是测定灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其制剂中麦角甾醇含量的方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现的一种灵芝孢子油或灵芝孢子粉或其制剂的质量控制方法是a.用高效液相色谱法测定其产品中麦角甾醇的含量或b、用薄层扫描色谱法测定其产品中麦角甾醇的含量，具体操作方法按中国药典附录规定的常规技术进行。
所说的a、用采高效液相色谱法测定灵芝孢子油或灵芝孢子粉或其制剂产品中麦角甾醇的含量的具体色谱条件、操作方法经试验摸索，可以按下述步骤进行一、供试品溶液的制备(1)灵芝孢子油及制剂供试品的制备取0.5～5g灵芝孢子油或含灵芝孢子油0.5～5g的制剂，以油的10倍量的石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用10倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得；(2)灵芝孢子粉及其制剂供试品的制备取灵芝孢子粉1～10g或含灵芝孢子粉1～10g的制剂，采用有机溶剂提取，回收溶剂得灵芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用10倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀配成每1ml含0.2mg或0.08mg麦角甾醇的溶液为对照品溶液；三、色谱条件用十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或甲醇、乙醇、乙腈与水的三元或四元组成混合液或四氢呋喃∶水为75∶25的溶液为流动相；检测波长为280±2nm；理论板数按麦角甾醇峰计算，应不低于2000；四、测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得，每1g灵芝孢子粉、灵芝孢子油或相当于1g灵芝孢子粉、1g灵芝孢子油的制剂中含麦角甾醇的量分别应为0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
优选的色谱条件、操作方法是在步骤一、供试品溶液的制备(1)灵芝孢子油及制剂的供试品溶液的制备精密取灵芝孢子油1g或含灵芝孢子油1g的制剂，以石油醚10ml使溶解，加于100～200目，10g，内径15mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为9∶1的溶液120ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为8∶2的溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用10倍量甲醇溶解、定容，摇匀，即得供试品溶液；所述的步骤三、色谱条件中优选用甲醇为流动相。
所说的b、薄层扫描色谱法测定灵芝孢子油或灵芝孢子粉或其制剂产品中麦角甾醇的含量的具体色谱条件、操作方法经试验摸索，可以按下述步骤进行一、供试品溶液的制备(1)灵芝孢子油及制剂供试品的制备取0.5～5g灵芝孢子油或含灵芝孢子油0.5～5g的制剂，以油的10倍量石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用5倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得。(2)灵芝孢子粉及其制剂供试品的制备取灵芝孢子粉1～10g或含灵芝孢子粉1～10g的制剂，采用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、石油醚提取，回收溶剂得灵芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用5倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀配成每1ml含0.2mg或0.08mg麦角甾醇的溶液为对照品溶液；三、色谱条件与波长用硅胶薄层板、；展开系统60～90℃的石油醚∶醋酸乙酯为7.5∶2.5或甲苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸为7.5∶2.2∶0.3或60～90℃的石油醚∶氯仿∶甲醇为4.5∶4.5∶1或苯∶氯仿∶醋酸乙酯为3∶5∶2；测定波长为280±2nm；硅胶薄层板可用硅胶G、硅胶GF254、硅胶H等薄层板；四、测定分别精密吸取对照品溶液4μl和8μ和供试品溶液各6μl，交叉点样于薄层板上，展开系统展开，取出，凉干，外标法扫描测定，计算，即得；每1g灵芝孢子粉、灵芝孢子油或相当于1g灵芝孢子粉、1g灵芝孢子油的制剂中含麦角甾醇的量分别应为0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
薄层扫描色谱法的测定方法中优选的色谱条件、操作方法是所说的步骤中一、(1)灵芝孢子油或其制剂的供试品溶液制备精密称取灵芝孢子油1g或含灵芝孢子油1g的制剂，以石油醚10ml使溶解，加于100～200目，10g，内径15mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为9∶1的溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为8∶2的溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用5倍量的甲醇溶解并定容，摇匀，即得供试品溶液；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；三、色谱条件与波长用硅胶GF254薄层板，展开系统是苯∶氯仿∶醋酸乙酯为3∶5∶2的溶液；本发明的有益效果该含量测定方法能准确的测定灵芝孢子油和灵芝孢子粉及其制剂中的麦角甾醇的含量，可作为这些产品质量控制的方法和依据，该方法可操作性强，重现性高，特异性强，麦角甾醇是控制灵芝孢子油和灵芝孢子粉及制剂质量的有效成分指标之一。
下面通过实施例进一步说明本发明的技术方案。
具体实施例方式
实施例1、高效液相色谱法测定灵芝孢子油中麦角甾醇含量的方法的研究(1)仪器与样品仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，四元梯度泵，G2170AA数据处理软件系统(美国)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
样品对照品麦角甾醇由sigma公司提供；灵芝孢子油由广州汉方现代中药研究开发有限公司提供。
供试品溶液的制备精密称取1g灵芝孢子油，加石油醚10ml使溶解，加于(100～200目，10g，内径15mm)的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为90∶10的溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为80∶20的溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，即得供试品溶液；对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液。
(2)色谱条件色谱柱Kromasil C18，4.6mm×250mm，5um柱；柱温30℃；流动相甲醇；检测波长280nm；流速0.8ml/min。
(3)洗脱溶剂的选择分别依次用石油醚→石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)、石油醚→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)、石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)、石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)→石油醚∶乙酸乙酯(7∶3)的顺序进行洗脱，收集最后的洗脱液，进行含量测定分析，显示了麦角甾醇的最佳洗脱顺序为石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)。
(4)洗脱溶剂用量的选择分别依次用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)120ml→石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml→石油醚∶乙酸乙酯(7∶3)120ml洗脱，收集各部分洗脱液，分别蒸干，并定容到10ml。然后分别进样10ul进行含量测定，结果说明洗脱溶剂的用量为120ml最佳。
(5)高效液相色谱流动相考察麦角甾醇在Kromasil C18柱，不同流动相中的各参数，结果以甲醇、甲醇∶水(95∶5)、乙腈、乙腈∶水(95∶5)、四氢呋喃∶水(75∶25)条件下麦角甾醇的峰形良好，分离度大于1.5，均可作为流动相。
(6)线性关系考察精密量取麦角甾醇对照品溶液(0.158mg/ml)适量，用甲醇稀释成浓度分别为0.0316，0.0632，0.0948，0.1264，0.158mg/ml的溶液，分别取以上各浓度的标准品溶液10ul，注入液相色谱仪，以进样量(ng)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。
表1 线性关系实验数据(n＝5)
Y＝1.08581X+1.58888，R＝0.99999。
以上结果表明在316ng～1580ng范围内，呈良好的线性关系。
(7)精密度试验取麦角甾醇对照品溶液(0.158mg/m1)适量，用甲醇稀释成浓度分别为0.079mg/ml的溶液，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl重复进样6次，麦角甾醇峰面积值的RSD＜2％，结果见表2。
表2 精密度试验数据(n＝6)
试验证明，精密度良好。
(8)稳定性试验取样品供试液分别于0小时，1小时，2小时，3小时，4小时，24小时，分别进样10μl，测得样品中麦角甾醇峰面积的RSD＜2％，结果见表3。
表3 稳定性试验数据
试验结果表明，样品供试液在24小时内稳定性良好。
(9)重现性试验照含量测定项下操作，对同一批样品6份进行测定，求得相对标准偏差RSD为1.57％。表4表4 重现性试验数据
(10)回收率试验用加样回收，精密称取已知含量为0.0585％的样品0.5g，分别精密加入麦角甾醇对照品溶液(0.079mg/ml)4ml，照含量测定项下操作，结果见表5表5 回收率试验结果
试验结果表明回收率在99.37-103.80％之间，加样回收良好。
实施例2、灵芝孢子油中麦角甾醇含量测定照上述实施例1含量测定的方法操作，测定了10个样品灵芝孢子油中麦角甾醇的含量，结果见表6。
表6 样品中麦角甾醇的含量测定结果(n＝2)
测得每1g灵芝孢子油中麦角甾醇的含量在0.423～1.920mg之间。
实施例3、灵芝孢子油乳剂中麦角甾醇的含量测定用高效液相色谱法测定色谱条件与波长选择用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇为流动相；检测波长为280nm。理论板数按麦角甾醇峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密称取含灵芝孢子油乳剂10g，加入2g无水硫酸钠，于水浴上加热使乳剂破裂，转移至分液漏斗中，以乙醚萃取3次，每次20ml，合乙醚液，蒸干，以石油醚10ml溶解，加于已处理好的硅胶柱(100～200目，10g，内径15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)120ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；测定结果分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得。每1g乳剂中含麦角甾醇0.08mg。
实施例4、薄层扫描色谱法测定灵芝孢子油中麦角甾醇含量方法的研究1.仪器试剂 瑞士CAMAGIII型薄层扫描仪，GF254硅胶板，试剂均为AR级，灵芝孢子油由广州汉方现代中药研究开发有限公司通过，麦角甾醇对照品由sigma公司提供。
2.含量测定对照品溶液的制备精密称取麦角甾醇2.0125mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1ml含0.20125mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备精密称取灵芝孢子油1g，以石油醚10ml使溶解，加于已处理好的硅胶柱(100～200目，10g，内径15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1)100ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；2.1标准曲线制备精密吸取对照品溶液4、6、8、10、12μl点样于同一薄层板上，以石油醚∶氯仿∶甲醇为4.5∶4.5∶1的溶液上行展开，取出晾干，于254nm紫外光下定位。以含量为纵坐标，积分面积为横坐标进行回归计算，结果表明样品测定量在0.8050～2.4150μg之间成良好的线性关系。回归方程Y＝-4538.2+13476.9X；γ＝0.9991。
2.2样品含量测定点样供试品溶液6μl于GF254硅胶板上，同时点样标准液4μl，8μl于同一块板，按标准曲线制备项下进行扫描测定，以两点法计算含量，换算成样品的百分含量。测得灵芝孢子油中麦角甾醇含量0.0825(％)，RSD为1.83％(n＝5)。
2.3加样回收率实验用加样回收，精密称取已知含量为0.083％的样品0.5g，分别精密加入麦角甾醇对照品溶液(0.079mg/ml)5ml，照样品含量测定项下操作，计算回收率，结果测得灵芝孢子油中麦角甾醇平均回收率为102.0％，RSD为2.13％(n＝5)。
2.4精密度实验用标准液点样5份，每个点样5μl于同一块板，同法进行测定，结果平均峰面积值为8325.4，RSD为2.07％(n＝5)。
2.5稳定性实验将供试品液点样6μl，展开，取出晾干后，立即进行扫描，并每隔1h测定1次，结果证明在8h内稳定，测得平均峰面积积分值为15973.2，RSD为2.54％。
2.6重现性实验用同一批样品，取5份，照样品含量测定项下操作，计算含量，结果测得灵芝孢子油中麦角甾醇平均含量为0.084％，RSD为2.13％(n＝5)。
实施例5、灵芝孢子粉的含量测定用高效液相色谱法测定色谱条件与波长选择用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇为流动相；检测波长为280nm。理论板数按麦角甾醇峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.08mg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备取灵芝孢子粉3.5g，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚30ml，冷浸过夜，再加入乙醚50ml，于水浴加热提取8小时，提取液回收乙醚至尽，残渣以10ml石油醚溶解，加于已处理好的硅胶柱(100～200目，10g，内径15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(90∶10)120ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯(80∶20)120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；测定结果分别精密吸取对照品溶液与灵芝孢子油供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得。每1g灵芝孢子粉中含麦角甾醇0.28mg。
实施例6、灵芝孢子粉片的含量测定用高效液相色谱法测定色谱条件与波长选择用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇为流动相；检测波长为280nm。理论板数按麦角甾醇峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备取灵芝孢子粉片20片，研细，精密称取5g，置索氏提取器中，加入乙醚30ml，冷浸过夜，再加入乙醚50ml，于水浴加热提取8小时，提取液回收乙醚至尽，残渣以10ml石油醚溶解，加于已处理好的硅胶柱(100～200目，10g，内径15mm)上，用石油醚∶乙酸乙酯(90∶10)120ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯(80∶20)120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；测定结果分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得。每片灵芝孢子粉片中含麦角甾醇0.05mg。
实施例7、灵芝孢子粉胶囊的含量测定同实施例6测定方法，供试品溶液的制备时取灵芝孢子粉胶囊15粒，去除胶囊皮，取内入物后精密称取5g，其他同实施例6操作。测得每粒灵芝孢子粉胶囊中含麦角甾醇0.08mg。
权利要求
1.一种灵芝孢子油或灵芝孢子粉或其制剂的质量控制方法，其特征在于，a、用高效液相色谱法测定产品中麦角甾醇的含量或b、用薄层扫描色谱法测定产品中麦角甾醇的含量。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所说的a、高效液相色谱法测定产品中麦角甾醇含量的方法是按下述步骤进行一、供试品溶液的制备(1)灵芝孢子油及制剂的供试品溶液的制备取0.5～5g灵芝孢子油或含灵芝孢子油0.5～5g的制剂，以油的10倍量的石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用10倍量的甲醇溶解并定容，摇匀，即得；(2)灵芝孢子粉及其制剂供试品的制备取灵芝孢子粉1～10g或含灵芝孢子粉1～10g的制剂，采用有机溶剂提取，回收溶剂得灵芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用10倍量的甲醇溶解并定容，摇匀，即得；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀，配成每1ml含0.2mg或0.08mg麦角甾醇的溶液为对照品溶液；三、色谱条件用十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或甲醇、乙醇、乙腈与水的三元或四元组成混合液或四氢呋喃∶水为75∶25的溶液为流动相；检测波长为280±2nm；理论板数按麦角甾醇峰计算，应不低于2000；四、测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得，每1g灵芝孢子粉、灵芝孢子油或相当于1g灵芝孢子粉、1g灵芝孢子油的制剂中含麦角甾醇的量分别为0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所说的b、薄层扫描色谱法的测定方法是按下述步骤进行一、供试品溶液的制备(1)灵芝孢子油及制剂的供试品溶液的制备取0.5～5g灵芝孢子油或含灵芝孢子油0.5～5g的制剂，以油的10倍量石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用5倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得；(2)灵芝孢子粉及其制剂的供试品溶液的制备取灵芝孢子粉1～10g或含灵芝孢子粉1～10g的制剂，采用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、石油醚提取，回收溶剂得灵芝孢子粉提取物，以提取物的10倍量的石油醚溶解，加于50～300目，5～25g，内径10～20mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为99∶1～85∶15的溶液60～150ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为50∶50～85∶15的溶液60～150ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用5倍量甲醇溶解并定定容，摇匀，即得；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品，加甲醇溶解并定容，摇匀配成每1ml含0.2mg或0.08mg麦角甾醇的溶液为对照品溶液；三、色谱条件与波长用硅胶薄层板；展开系统60～90℃的石油醚∶醋酸乙酯为7.5∶2.5或甲苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸为7.5∶2.2∶0.3或60～90℃的石油醚∶氯仿∶甲醇为4.5∶4.5∶1或苯∶氯仿∶醋酸乙酯为3∶5∶2；测定波长为280±2nm；四、测定分别精密吸取对照品溶液4μl和8μ和供试品溶液各6μl，交叉点样于薄层板上，展开系统展开，取出，晾干，外标法扫描测定，计算，即得；每1g灵芝孢子粉、灵芝孢子油或相当于1g灵芝孢子粉、1g灵芝孢子油的制剂中含麦角甾醇的量分别为0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。
4.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述的步骤一、中(1)灵芝孢子油或其制剂的供试品溶液制备精密称取灵芝孢子油1g或含灵芝孢油1g的制剂，以石油醚10ml使溶解，加于100～200目，10g，内径15mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为9∶1的溶液120ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为8∶2的溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用10倍量的甲醇溶解、定容、摇匀，即得供试品溶液；所述的步骤三、色谱条件中以甲醇为流动相。
5.根据权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于，所说的薄层扫描色谱法的测定方法的步骤一、(1)灵芝孢子油或其制剂的供试品溶液制备精密称取灵芝孢子油1g或含灵芝孢子油1g的制剂，以石油醚10ml使溶解，加于100～200目，10g，内径15mm的硅胶柱上，用石油醚∶乙酸乙酯为9∶1的溶液100ml洗脱，弃去洗脱液，再用石油醚∶乙酸乙酯为8∶2的溶液120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用5倍量甲醇溶解并定容，摇匀，即得供试品溶液；二、对照品溶液的制备取麦角甾醇对照品加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；三、色谱条件与波长用硅胶GF254薄层板，展开系统是苯∶氯仿∶醋酸乙酯为3∶5∶2的溶液。
全文摘要
一种灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其制剂的质量控制方法，涉及一种药品或保健品质量分析方法，具体是涉及一种测定灵芝孢子油、灵芝孢子粉及其制剂中麦角甾醇含量的方法，即是a.用高效液相色谱法测定其产品中麦角甾醇的含量或b.用薄层扫描色谱法测定其产品中麦角甾醇的含量。每1g灵芝孢子粉、灵芝孢子油或相当于1g灵芝孢子粉、1g灵芝孢子油的制剂中含麦角甾醇的量分别应有0.1mg～0.5mg、0.4mg～2.0mg。该含量测定方法可准确控制产品的质量，可操作性强，重现性高，特异性强。
文档编号G01N30/02GK1872097SQ20051003482
公开日2006年12月6日 申请日期2005年5月30日 优先权日2005年5月30日
发明者李吉来, 宁德山, 刘菊妍, 陈路林, 庞胜凤, 吴德玄 申请人:广州汉方现代中药研究开发有限公司