专利名称：加压毛细管电色谱化学发光检测装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于分离检测复杂样品的分析仪器，具体涉及一种加压毛细管电色谱化学发光检测装置。
背景技术：
加压毛细管电色谱(Pressurized Capillary Electrochromatography，简称pCEC)融合了毛细管电泳(CE)的高效性和高效液相色谱(HPLC)的高选择性，是一种新型的微柱分离分析技术(Tsuda，T.Anal.Chem.1988，60，1677-1680)。具有分离效率高、分析时间短、进样量小、试剂消耗少、易于实现自动化等优越性能。在pCEC应用中，由于进样体积小(nL级)，管径细微和样品中待测组分含量低等特点，对检测器的灵敏度要求较高，缺乏高灵敏的检测器已成为限制该技术应用的主要因素。化学发光(Chemiluminescence，CL)分析法不用外加光源，因而背景低，可获得较高的灵敏度高，此类检测器最大特点是仪器设备简单、操作方便、易于与各种分离技术联用。将pCEC和CL检测技术相结合，可同时兼备CL的高灵敏度和pCEC高效性的特点，是微分析领域中较为理想的分离分析方法，目前没有相关的技术报道。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，将化学发光分析法和加压毛细管电色谱分离技术相结合，提供一种加压毛细管电色谱化学发光检测装置。
本发明的加压毛细管电色谱化学发光检测装置，包括流动相的储液容器(1)，用以传送流动相的高压泵(2)，高压电源(16)，高压泵经可输入样品的微流控制仪向接入检测池(10)的分离毛细管电色谱柱(9)供液，高压电源的两端分别施加于所述分离毛细管电色谱柱(9)的进液端和检测池，所述检测池下方放置有用于采集待测物光信号的光电倍增管(12)，所述光电倍增管(12)的输出端经信号放大器(13)与计算机(14)连接。
本发明的显著优点是一将化学发光分析法和加压毛细管电色谱分离技术相结合，可同时兼备化学发光分析法的高灵敏度和加压毛细管电色谱分离技术高效性的特点，是微分析领域中较为理想的分离分析方法。本发明以经典的发光物质鲁米诺为检测对象，通过调试和优化pCEC-CL装置，测得鲁米诺的检测限为2.0×10-10mol/L，并利用该装置成功实现对氨基酸等生化样品的分离和检测，获得了满意的实验结果。
二本发明装置操作容易，检测灵敏度高适合于食品安全、环境检测、临床医学等领域的应用，易于推广。
图1是本发明设计的仪器结构总体示意图，其中1-流动相的储液容器，2-高压泵，3-六通进样阀，4-进样端，5-废液端，6-四通分流器，7-防电箱，8-反压阀，9-分离毛细管电色谱柱，10-检测池，11-毛细管，12-光电倍增管，13-信号放大器，14-计算机，15-废液池，16-高压电源。
图2是加压毛细管电色谱化学发光检测装置分离和检测鲁米诺的电色谱图。
图3是是加压毛细管电色谱化学发光检测装置分离和检测苏氨酸和酪氨酸电色谱图。
具体实施例方式
本发明的微流控制仪包括六通进样阀(3)，四通分流阀(6)和反压阀(8)，所述六通进样阀的输出口经四通分流阀接至分离毛细管电色谱柱(9)的进液端，四通分流阀的另一端口与通往废液池的反压阀的输入端连接。
毛细管电色谱柱(9)可以是填充柱，整体柱或开管柱中的任意一种。
化学发光检测池可以是柱端式、在柱或柱后套管式化学发光检测池中的一种。
四通分流阀、反压阀、废液池、高压电源、检测池、光电倍增管和信号放大器放置于防电箱(7)内。
本装置的操作流程如下贮备在储液容器(1)中的流动相在高压泵(2)的推动下，输送至六通进样阀(3)，待测样品经(4)位置注射，随即切换六通进样阀(3)，将多余的待测样品从(5)位置排出，定量的待测样品(2μL)则在流动相的推动下带入四通分流器(6)，通过调节反压阀(8)保持恒定的柱压，最后约1/250体积的待测样品进入毛细管电色谱柱(9)，当高压电源(16)施加高压时，待测样品在电渗流和压力流的双重驱动下，在毛细管电色谱柱(9)内得到有效的分离，并依次流出柱末端，与检测池(10)中的发光试剂充分反应而产生发光信号，经光电倍增管(12)采集，传输至信号放大器(13)接受并输出检测信号至计算机(14)，反应后溶液由毛细管(11)排出，接地端放置在废液池(15)中构成整个回路。
实施例1利用加压毛细管电色谱化学发光检测装置，以经典的发光物质鲁米诺为检测对象，考查该系统性能，结果见图2。结果表明，该仪器能满足实验要求，灵敏度高、重现性好。实验条件为固定相为3μm ODS-C18柱；流动相为乙腈∶磷酸盐＝30∶70(％v/v；pH8.0；5mmol/L；含Co2+1.0×10-4mol/L)；流速为0.01ml/min；柱后发光试剂为H2O2(浓度为100mmol/L)，用NaOH调至pH12.30；柱后发光试剂流速为1.3μL/min；分离电压为-4kv；检测结果鲁米诺线性范围为2.0×10-9～2.0×10-6mol/L(r＝0.9960)；检测限为2.0×10-10mol/L。
实施例2利用加压毛细管电色谱化学发光检测装置，测定苏氨酸和酪氨酸，结果见图3。实验条件为polymerized(IBMA-EDMA-AMPS)整体柱；流动相为甲醇∶磷酸盐＝20∶80(％v/v；pH8.0；5mmol/L；含luminol1.0×10-4mol/L；Cu2+1.0×10-5mol/L)；流速为0.01ml/min；柱后发光试剂为H2O2(浓度为100mmol/L)，用NaOH调至pH12.30；柱后发光试剂流速为1.3μL/min；样品1-苏氨酸(1.68×10-4mol/L)；2-酪氨酸(1.2×10-4mol/L)。
权利要求
1.一种加压毛细管电色谱化学发光检测装置，包括流动相的储液容器(1)，用以传送流动相的高压泵(2)，高压电源(16)，其特征在于所述高压泵经可输入样品的微流控制仪向接入检测池(10)的分离毛细管电色谱柱(9)供液，高压电源的两端分别施加于所述分离毛细管电色谱柱(9)的进液端和检测池(10)，所述检测池下方放置有用于采集待测物光信号的光电倍增管(12)，所述光电倍增管(12)的输出端经信号放大器(13)与计算机(14)连接。
2.根据权利要求1所述的加压毛细管电色谱化学发光检测装置，其特征在于所述的微流控制仪包括六通进样阀(3)，四通分流阀(6)和反压阀(8)，所述六通进样阀的输出口经四通分流阀接至分离毛细管电色谱柱(9)的进液端，四通分流阀的另一端口与通往废液池的反压阀的输入端连接。
3.根据权利要求1或2所述的加压毛细管电色谱化学发光检测装置，其特征在于所述分离毛细管电色谱柱是填充柱，整体柱和开管柱中的一种。
4.根据权利要求1或2所述的加压毛细管电色谱化学发光检测装置，其特征在于所述化学发光检测池是柱端式、在柱或柱后套管式化学发光检测池中的一种。
5.根据权利要求1或2所述的加压毛细管电色谱化学发光检测装置，其特征在于所述的四通分流阀、反压阀、废液池、高压电源、检测池、光电倍增管和信号放大器放置于防电箱(7)内。
全文摘要
本发明提供一种加压毛细管电色谱化学发光检测装置，包括流动相的储液容器，用以传送流动相的高压泵，高压电源，高压泵经可输入样品的微流控制仪向接入检测池的分离毛细管电色谱柱供液，高压电源的两端分别施加于分离毛细管电色谱柱的进液端和检测池，检测池下方放置有用于采集待测物光信号的光电倍增管，光电倍增管的输出端经信号放大器与计算机连接。本发明将化学发光分析法和加压毛细管电色谱分离技术相结合，装置操作容易，检测灵敏度高，适合于食品安全、环境检测、临床医学等领域的应用，易于推广。
文档编号G01N30/00GK101038274SQ200710008810
公开日2007年9月19日 申请日期2007年4月10日 优先权日2007年4月10日
发明者谢增鸿, 林子俺, 林旭聪, 吴晓苹 申请人:福州大学