专利名称：近红外光谱快速在线检测中药苦黄注射剂有效成分的方法
技术领域：
本发明涉及一种中药注射剂成分的检测方法，具体地说是涉及一种采用近红外光谱检测苦黄注射剂有效成分快速在线检测方法，实现对中药注射剂有效成分的快速在线检测。
背景技术：
苦黄注射液起源于我国古代著名医圣张仲景所著“伤寒论”中名方“茵陈蒿汤”，由苦参、大黄等我国道地中药材组方，经科学提取和精制而成，是国家中药保护品种。苦黄注射液临床治疗各型肝病，退黄迅速、降酶显著，能提高免疫同时改善临床症状，且安全度高。苦黄注射液的有效成分主要是芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、槐果碱、苦参碱，传统的测定方法如HPLC，样品处理过程及操作复杂，难以实现在线检测。
近红外技术作为一种在线检测方法，具有无前处理、无污染、方便快捷和多组分同时检测等优点，近年来在食品、化工、医药和环保领域中得到空前的发展。而且光谱技术作为构建指纹图谱的组成部分，在中药质量标准的构建中也将发挥着重要的作用。本发明将近红外技术应用于中药注射液的有效成分的快速在线检测，有助于中药注射剂生产过程的全程质量控制，达到中药自动化、标准化生产，可以充分保证产品的质量水平达到安全，稳定，可控，消除不良反应隐患，对整个中药注射剂的健康发展具有较好的示范作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用近红外光谱快速在线检测中药苦黄注射剂有效成分的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的一种近红外光谱快速在线检测中药苦黄注射剂有效成分的方法，其特征在于检测步骤如下(1)用高效液相法(HPLC)测定中药苦黄注射剂样品中有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、槐果碱、苦参碱的含量，并以此含量作为对照值；
(2)扫描苦黄注射剂样品的近红外吸收光谱；采用近红外线吸收检测系统，以固定分辨率在设定波长9500-4000cm-1范围内，以内置背景为参照进行多次扫描，每批样品取3份做平行，每份重复3次，取平均值为吸收值；(3)近红外光谱预处理；结合多重散射校正和导数光谱法对近红外吸收光谱进行预处理，用以消除光谱散射效应和基线飘移；(4)选择波长；水分子在波数5000cm-1和7000cm-1附近的两个强吸收带，对其他分子吸收峰有较强干扰，本发明首先采用基线校正的方法去除这两个强吸收带，再根据RMSEP值对建模波段进行局部修饰，确定最优建模波段；(5)用PLS法(偏最小二乘法)建立近红外光谱多元校正模型；以交叉验证误差均方根(RMSECV)为指标，运用留一法交叉验证(LOOCV)确定最佳PLS主因子数，模型对未知样本的预测效果采用预测误差均方根(RMSEP)来考核。
上述的检测方法在中药注射剂有效成分的快速检测中的应用。
上述的检测方法在苦黄注射剂有效成分的快速检测中的应用。
四
图1苦黄注射液原始近红外光谱图五具体实施方式
近红外线光谱快速在线检测苦黄注射液有效成分的方法，其检测步骤如下(1)用高效液相法(HPLC)测定苦黄折射液样品中有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、槐果碱、苦参碱的含量，并以此作为对照值，具体方法如下1.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量测定色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以冰醋酸∶水(1∶100)为流动相A相，冰醋酸∶甲醇(1∶100)为流动相B相，按以下线性梯度洗脱0min(15％B)，25min(67％B)，65min(100％B)；柱温40℃；检测波长为254nm。理论塔板数以大黄酸峰计算不低于15000。
对照品溶液的制备精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml含0.03mg芦荟大黄素、0.1mg大黄酸、0.2mg大黄素、0.1mg大黄酚、0.02mg大黄素甲醚的溶液，即得。
供试品溶液的制备准确量取苦黄注射液5ml于圆底烧瓶中，加入冰醋酸-盐酸(5∶1)的混合溶液2ml和石油醚(60～90℃)50ml，置水浴中加热回流1小时，放冷，分取有机相，水相再用石油醚60～90℃)同法提取3次(50、30、30ml)，每次约30min，至石油醚层近无色，合并石油醚提取液，回收石油醚至干，残渣用氯仿溶解，转移至5ml量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得测定法分别精密吸取对照品溶液2μl、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1。
2.槐果碱、苦参碱的含量测定色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(适用pH范围1.5～11.5)；以水∶氨水∶甲醇(52∶0.05∶48，v/v/v)为流动相；柱温40℃；检测波长为220nm。理论塔板数以苦参碱峰计算不低于10000。
对照品溶液的制备精密称取槐果碱、苦参碱对照品适量，用少量甲醇溶解并用水稀释制成每1ml含槐果碱0.1mg、苦参碱0.4mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取苦黄注射液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1。
表1HPLC法测定的样品有效成分含量(mg/mL)
(2)扫描样品的近红外漫反射光谱。
采用近红外检测系统，以固定分辨率在设定波长9500-4000cm-1范围内，以内置背景为参照进行多次扫描，每批样品取3份做平行，每份重复3次，结果见图1。
(3)近红外光谱预处理。
结合多重散射校正和导数光谱法对近红外光谱进行预处理，用以消除光谱散射效应和基线飘移。
(4)选择波长。
水分子在波数5000cm-1和7000cm-1附近的两个强吸收带，对其他分子吸收峰有较强干扰。本发明首先采用基线校正的方法去除这两个强吸收带，再根据RMSEP值对建模波段进行局部修饰，确定最优建模波段，结果如表2所示。
表2近红外光谱建模波段
(5)用PLS法建立近红外光谱多元校正模型。
以交叉验证误差均方根(RMSECV)为指标，运用留一法交叉验证(LOOCV)确定最佳PLS主因子数。模型对未知样本的预测效果采用预测误差均方根(RMSEP)来考核。模型预测值与实际测定值比较，以验证预测模型的可靠性。结果见表3。
表3预测值与实测值比较成分名称 HPLC测得值(mg/ml) 预测值(mg/ml)芦荟大黄素0.00690.0073大黄酸0.00680.0072大黄素0.01800.0171大黄酚0.01720.0166槐果碱0.145 0.153苦参碱0.439 0.428
本发明提出近红外光谱在线检测中药注射剂有效成分含量的方法，研究结果表明，通过建立PLS多元校正模型，近红外光谱分析方法可以对苦黄注射液的有效成分进行有效在线检测。该方法只需要简单的样品处理，同传统方法相比，如HPLC，可以节省大量的分析时间和花费，从而为发展中药等天然药物实时分析技术开辟了一个新途径。
权利要求
1.一种近红外光谱快速在线检测中药苦黄注射剂有效成分的方法，其特征在于检测步骤如下(1)用高效液相法测定中药苦黄注射剂样品中的有效成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、槐果碱、苦参碱的含量，并以此含量作为对照值；(2)扫描苦黄注射剂样品的近红外吸收光谱；采用近红外吸收检测系统，以固定分辨率在设定波长9500-4000cm-1范围内，以内置背景为参照进行多次扫描，每批样品取3份做平行，每份重复3次，取平均值为吸收值；(3)近红外光谱预处理；结合多重散射校正和导数光谱法对近红外光谱进行预处理，用以消除光谱散射效应和基线飘移；(4)选择波长；水分子在波长5000cm-1和7000cm-1附近的两个强吸收带，对其他分子吸收峰有较强干扰，本发明首先采用基线校正的方法去除这两个强吸收带，再根据RMSEP值对建模波段进行局部修饰，确定最优建模波段；(5)用PLS法即偏最小二乘法建立近红外光谱多元校正模型；以交叉验证误差均方根为指标，运用留一法交叉验证确定最佳PLS主因子数，模型对未知样本的预测效果采用预测误差均方根来考核。
2.如权利要求1所述的在线检测方法，在中药注射剂有效成分的快速检测中的应用。
3.如权利要求1所述的在线检测方法，在苦黄注射剂有效成分的快速检测中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用近红外光谱快速在线检测苦黄注射剂有效成分含量的方法。苦黄注射剂的有效成分主要是芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、槐果碱、苦参碱等，采集苦黄注射剂的近红外吸收光谱，将高效液相(HPLC)方法获得有效成分含量数据同该样品的近红外光谱相关联，用偏最小二乘回归方法建立校正模型，实现对该注射剂有效成分的快速在线检测。研究结果表明，近红外光谱分析方法可以对苦黄注射剂的有效成分进行有效检测。该方法样品预处理简单、检测快速、同时检测多个组分，能够用于中药制药过程的实时分析和在线质量控制。
文档编号G01N33/15GK101078685SQ200710022408
公开日2007年11月28日 申请日期2007年5月17日 优先权日2007年5月17日
发明者陈力建, 王恒斌, 刘雪松, 顾治平, 阙瑞艳 申请人:常熟雷允上制药有限公司