专利名称：生物液体样本检测卡的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物检测技术，具体涉及一种生物液体样本检测卡。
背景技术：
尿微量白蛋白一般是指尿液中白蛋白的含量在20-200mg/L，即高于正常含 量，但常规方法无法检出的白蛋白，尿微量白蛋白的检测作为早期肾损害诊断 的重要指标已受到广泛重视，对早期肾损害的诊断远远优于常规定性或半定量 试验。尿微量白蛋白常可见于糖尿病性肾病、高血压肾病、妊娠子痫前期及各 种毒性物质所致的肾损伤等，也可在隐匿肾炎及肾炎恢复期尿中出现，是比较 敏感的早期发现肾损伤的重要指标。近年来，尿微量白蛋白测定已用于监测和 追踪早期肾损伤。
目前，釆用市场上销售的尿微量白蛋白检测试纸(如图1所示)就可以 方便、快速的进行尿液中微量白蛋白的半定量检测。该检测试纸包括进样 区1、金标抗体区2、显色区3以及吸液区4，显色区的纤维素膜上分别固定 有纯化的人白蛋白(检测带T)和二抗(质控带C),其是利用竞争性金标抗 体免疫层析的原理进行检测，当尿液中白蛋白含量超过20mg/L时，只在对照 带显红色，即试纸上仅出现一条红带，检测结果为阳性；当尿液中白蛋白的 含量小于20mg/L时，在检测带和对照带都显红色，即试纸上出现两条红带， 检测结果为阴性。但现有的用来检测尿白蛋白的试纸的缺点在于只能判断白 蛋白是高于还是低于20mg/L这一浓度点，而对其他的浓度值并不能进行判读，
因此无法获得尿微量白蛋白的更精确的浓度信息，从而无法更准确的监测早 期肾脏病变时微量白蛋白的浓度变化，不利于早期肾脏损伤病变的预防、发 现及治疗。另外，目前对血样、便样、唾液等样本的参数利用免疫层析试纸也 同样不能实现更精确的不同浓度范围的检测。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种生物液体样本检测卡，以检测生物 液体样本参数(如尿样中的微量白蛋白等)的不同浓度范围。
为了实现上述目的，本发明的生物液体样本检测卡包括支撑基片及位于所 述基片上的层析结构，该层析结构包括进样区、抗体/抗原区、显色区及吸液区， 其中
所述进样区设置有导流膜；
所述抗体/抗原区固化有以显色标记物标记的抗体/抗原； 所述显色区设置有一条质控带及多条检测带，通过所述多条检测带来检测 生物液体样本中参数的浓度范围； 所述吸液区设置有吸水物质；
所述进样区的生物液体样本由导流膜层析至金标抗体区、显色区及吸液区。 所述生物液体样本为尿样、血样、粪便或唾液样本。 所述参数为白蛋白。
所述抗体/抗原区还固化有非标记的特异性抗体/抗原。 所述检测带中包被有用于与所述标记的抗体/抗原结合的抗原/抗体。 所述检测带中包被的抗原为人白蛋白，所述质控带中包被有二抗。 所述以显色标记物标记的抗体为人白蛋白单克隆抗体或多克隆抗体。 所述显色标记物为胶体金、胶体硒或者彩色微球。 所述导流膜为无纺布或玻璃纤维素膜。 所述以显色标记物标记的抗体/抗原固化于纤维素膜上。 所述质控带和检测带固化于纤维素膜上。
本发明的生物液体样本检测卡可以检测生物液体样本中样本参数(如尿样 中微量白蛋白等参数)的不同浓度范围，从而不仅可用于早期肾脏损伤病变的 预防定期检测，而且还可以用于微量白蛋白尿治疗过程中的监测(监测治疗过 程中尿微量白蛋白的变化)，从而简便、易行、经济、准确、快速早期发现及
监测肾脏病变及其他部位的病变。
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分， 并不构成对本发明的限定。在附图中
图l为现有尿微量白蛋白试片的结构示意图； 图2为本发明一实施例的尿微量白蛋白检测卡的结构示意图3a为本发明的检测卡四条显色带都显色时的示意图3b为本发明的检测卡三条显色带显色时的示意图； 图3c为本发明的检测卡两条显色带显色时的示意图； 图3d为本发明的检测卡仅质控带带显色时的示意图4为本发明另一实施例的尿微量白蛋白检测卡的结构示意图。
具体实施例方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图对本发明的 具体实施例进行详细说明。在此，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本 发明，但并不作为对本发明的限定。
本发明的生物液体样本检测卡与现有的检测卡相比，采用的是多条检测带 的设置，通过多条检测带的显色情况，可以实现尿样、血样、粪便、唾液等样 本参数(如尿样、血样、粪便、唾液样本中的蛋白、微生物、病毒等具有抗原 或抗体活性的生物样本参数)的不同浓度范围的检测，从而获得更准确的参数 信息。下面仅以测量尿微量白蛋白的检测卡为例来进行说明。
本发明的尿微量白蛋白检测卡包括支撑基片和置于该支撑基片上的层析结
构，所述层析结构又包括进样区IO、抗体区20、显色区30及吸液区40 (如图2所 示)。
其中，所述进样区设置有导流膜，该导流膜可为无纺布或玻璃纤维素膜。 所述抗体区设置有纤维素膜(如玻璃纤维素膜或硝酸纤维素膜等)，在所 述纤维素膜上包被有金标抗体，用于与尿样中相应的抗原结合。待测尿样通过
导流膜到达所述金标抗体部分。本实施例中，所述金标抗体为由胶体金标记的 人白蛋白单克隆抗体或多克隆抗体，其中显色标记物胶体金还可以由胶体硒或
彩色微球等来代替。在检测过程中，当尿样由于毛细作用移动至又抗体的区域 时，尿样中相应的抗原即与所述抗体发生特异性结合，使用免疫胶体金可使该 区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。
所述显色区设置有纤维素膜，该纤维素膜上包被有质控带C和多条(两条或
两条以上)检测带T，通过质控带C和检测带T的显色情况可获得检测结果。所述 质控带中包被有质控标志物，该质控标志物为针对金标抗体的物质(如羊抗鼠IgG
二抗)，用于标识检测结果的有效性无论待测尿样是否阳性，所述质控带都 会显色，否则测试失效；所述检测带中包被有检测标志物，该检测标志物为抗 原(如人白蛋白)，用于与金标抗体结合。本实施例中，该显色区中的纤维素 膜可以为硝酸纤维素膜(NC膜)或醋酸纤维素膜。本发明通过多条检测带的设 置可以实现尿样中微量白蛋白的不同浓度范围的检测。例如，在纤维素膜上设 置三条检测带(Tl、 T2、 T3线)和一条质控带C，三条检测带检测的浓度拐点为 20mg/L、 50mg/L、 100mg/L，即当尿液中的白蛋白呈阴性即小于20mg/L时，质控 带和三条检测带共四条显色带都显色，当尿液中白蛋白的含量为20-50mg/L时， 质控带和两条检测带(Tl、 T2线)显色，当尿液中白蛋白的含量为50-100mg/L 时，质控带和一条检测带(Tl线)显色，当尿液中白蛋白的含量大于100mg/L时， 仅质控带显色。本实施例中为了实现0-20mg/L、 20-50mg/L、 50-100mg/L及大于 100mg/L的白蛋白的浓度范围的检测，固化在纤维素膜各检测带上的比例约为2: 3: 5，在实际操作中还可根据检测带显色深浅的情况，适当调节纤维素膜上的 抗原量。
本发明中，纤维素膜上检测带的条数可以根据尿微量白蛋白含量的范围需 要进行合适的设定，例如可以设置两条检测带，也可以设置三条、四条、五条 甚至更多的检测带。另外，要测量的尿微量白蛋白含量的范围也可以根据需要进行 设定，例如，可设置各检测带上的浓度拐点可以为20 mg/L、 50 mg/L、 100 mg/L，
也可以为20 mg/L、 80 mg/L，或者20 mg/L、 50 mg/L、 100 mg/L、 150 rag/L等 等。只要合适的设置包被在检测带上的抗原的比例关系，就可以实现更精细地 尿样中微量白蛋白的检测。
所述的吸液区设置有吸水纸，所述吸水纸为滤纸或玻璃纤维素膜，其用于 引流层析的液体。
所述进样区的导流膜、金标抗体区的纤维素膜、显色区的纤维素膜、及吸 液区的吸水纸在支撑基片上依次相衔接排列。
所述支撑基片可为常规的聚碳酸酯、聚烯烃或聚酯等聚合物材料，如PVC、 PP、 PET等，所述支撑基片上涂有不干胶或其它粘性材料形成不干胶背板，从而 与NC膜、吸水纸、玻璃纤维素膜、导流膜等通过所述粘性材料粘接固定。
基于本发明的尿微量白蛋白测试片就可以进行尿微量白蛋白的更精确测 定，下面以设置有三条检测带，检测浓度拐点对应为20mg/L、 50mg/L、 100mg/L 的检测卡为例进行说明
尿样经测试装置的有导流膜的一端进入，经导流膜到达金标位置，当待测 尿样中不含尿白蛋白或白蛋白浓度小于20 mg/L时，尿样中的抗原与少量金标抗 体发生反应，没有结合抗原的金标抗体再层析到各检测带位置时，固定在NC膜 上的抗原会捕捉金标抗体，故各T线(Tl、 T2、 T3、 T4线)都显色，C线也显色， 如图3a所示，此时得到的是阴性结果，表示白蛋白含量属正常范围；当尿样中 含有尿白蛋白含量大于100mg/L时，尿样中的白蛋白与金标抗体完全结合，形成 金标抗原抗体复合物，再沿硝酸纤维素膜层析到第一条检测带(Tl线)位置时， 金标抗体已没有空余的位点与检测带上的人白蛋白(HSA)结合，故第一条检测 带(Tl线)不显色，其余的两条检测带也不显色，而质控带显色，如图3d所示， 此检测结果说明白蛋白含量大于100mg/L，即微量白蛋白含量已比较高或已出现 大量白蛋白，应及时去医院诊治，并定期监测尿微量白蛋白；当尿样中含有尿 白蛋白含量为50-100mg/L时，尿样中的白蛋白与金标抗体结合后，再沿硝酸纤 维素膜层析到第一条检测带(Tl线)位置时，金标抗体还有空余的位点与第一
条检测带上的人白蛋白(HSA)结合，故T1线显色，但金标抗体没有空余的位点 与其余两条检测带(T2、 T3)上的人白蛋白结合，因此T2、 T3线不显色，而质 控带显色，如图3c所示，此检测结果说明尿样中的白蛋白含量为50-100mg/L， 应引起重视并及时去医院检査；同理，当尿样中含有尿白蛋白含量为20-50mg/L 时，尿样中的白蛋白与金标抗体结合后，金标抗体有空余的位点与第一、第二 条检测带(Tl、 T2)上的人白蛋白结合，从而使T1、 T2线显色，但第三条检测 带(T3线)不显色，而质控带显色，如图3b所示，此检测结果说明尿样中的白 蛋白含量为20-50mg/L，属于微量白蛋白尿的早期，肾脏损伤病变的早期，如果 初次发现应并去医院进一步检查；若C线、所有T线都不显色，则表示测试装置 中试剂失效。
作为本发明的另一实施例，本发明检测卡的抗体区除固化有以显色标记物 标记的抗体外，还可以固化有没有标记的特异性抗体(如单克隆抗体或多克隆 抗体)。如图4所示，本实施例中抗体区20分为两部分，设置有非标记的抗体的 第一区域201及为设置有金标抗体的第二区域202。在检测时，样本中的抗原先 与未标记的抗体进行反应，然后剩余的抗原再与金标抗体反应。这样可以减少 金标抗体的用量，从而降低背景的颜色。在没有使用未标记的抗体时，可检测 的浓度梯度范围比较小，尤其对于尿白蛋白浓度很高时，通过显色的检测带条 数的变化获得更精确的浓度梯度关系变得比较困难。适当的增加没有标记抗体 的用量还可以增加检测范围，增加没有标记抗体的量越大，检测范围越宽，从 而使显色的检测带条数的变化对应的浓度关系更具有临床检测的意义。但同时 要注意如果没有标记的抗体的量过量会占据显色区内固化的抗原位点，会使显 色条带的颜色变浅，然而这个问题可以通过增加固化抗原的量来得到部分解决。 因此，固化的没有标记的抗体量要在一定的范围，保证既可以消耗掉一部分检 测样本中的抗原，又要使剩余的抗原可以与金标抗体进行反应。
由此可见，本发明的尿微量白蛋白检测卡可以快速、准确地检测微量白蛋 白的不同浓度范围，从而不仅可用于早期肾脏损伤病变的预防定期检测，而且
还可以用于微量白蛋白尿治疗过程中的监测(监测治疗过程中尿微量白蛋白的 浓度变化)，从而简便、易行、经济、准确、快速早期发现及监测肾脏病变。.
尿白蛋白是一种抗原，因此在进行尿微量白蛋白检测时，尿微量白蛋白检 测卡的抗体区设置的是以显色标记物标记的抗体，而在检测带中包被的是用于 与所述标记的抗体结合的抗原。如果要检测的是尿样、血样、粪便或唾液等体 液中的抗体，则在对应于尿微量白蛋白检测卡的抗体区的位置设置的是以显色 标记物标记的抗原(此时该位置成为抗原区)，而在检测带中包被的是用于与 所述标记的抗原结合的抗体。此时，可选地，除固化有以显色标记物标记的抗 原外，抗原区还可以固化有没有标记的特异性抗原。
以上具体实施方式
仅用于说明本发明，而非用于限定本发明。凡在本发明 的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明 的保护范围之内。
权利要求
1.一种生物液体样本检测卡，包括支撑基片及位于所述基片上的层析结构，该层析结构包括进样区、抗体/抗原区、显色区及吸液区，其特征在于所述进样区设置有导流膜；所述抗体/抗原区固化有以显色标记物标记的抗体/抗原；所述显色区设置有质控带及多条检测带，通过所述多条检测带来检测生物液体样本中参数的浓度范围；所述吸液区设置有吸水物质；所述进样区的生物液体样本由导流膜层析至金标抗体区、显色区及吸液区。
2. 根据权利要求l所述的检测卡，其特征在于 所述生物液体样本为尿样、血样、粪便或唾液样本。
3. 根据权利要求2所述的检测卡，其特征在于 所述参数为白蛋白。
4. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于所述抗体/抗原区还固化有非标记的特异性抗体/抗原。
5. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于 所述检测带中包被有用于与所述标记的抗体/抗原结合的抗原/抗体。
6. 根据权利要求5所述的检测卡，其特征在于 所述检测带中包被的抗原为人白蛋白； 所述质控带中包被有二抗。
7. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于所述以显色标记物标记的抗体为人白蛋白单克隆抗体或多克隆抗体。
8. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于所述显色标记物为胶体金、胶体硒或者彩色微球。
9. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于 所述导流膜为无纺布或玻璃纤维素膜。
10. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于: 所述以显色标记物标记的抗体/抗原固化于纤维素膜上。
11. 根据权利要求1至3中任意一项所述的检测卡，其特征在于: 所述质控带和检测带固化于纤维素膜上。
全文摘要
本发明提供一种生物液体样本检测卡，该检测卡包括支撑基片及位于所述基片上的层析结构，该层析结构包括进样区、抗体/抗原区、显色区及吸液区，其中所述进样区设置有导流膜；所述抗体/抗原区设置有以显色标记物标记的抗体或抗原，还可包括未标记的抗体/抗体；所述显色区设置有一条质控带及多条检测带，通过所述多条检测带来检测生物液体样本中参数的浓度范围；所述吸液区设置有吸水物质；所述进样区的生物液体样本由导流膜层析至抗体/抗原区、显色区及吸液区。该检测卡可检测样品参数(例如尿液中的微量白蛋白)的不同浓度范围。
文档编号G01N33/558GK101173924SQ20071019585
公开日2008年5月7日 申请日期2007年11月30日 优先权日2007年11月23日
发明者伟 何, 夏桂芳, 李元光, 彬 杨, 祺 程 申请人:北京怡成生物电子技术有限公司