专利名称：一种塑料包埋制片方法
技术领域：
本发明涉及一种生物标本的包埋制片方法，尤其是一种塑料包埋制片方法。
背景技术：
塑料包埋是指它的包埋剂是一种甲基丙烯酸羟乙酯、聚乙二醇-400、 N-N二 甲基苯胺的混合试剂，用于替代石蜡。用塑料包埋剂制作的切片，与石蜡切片 相比，具有细胞收縮小，结构清晰，分辨率高等优点。传统的塑料包埋的制片 方法采用下述工艺步骤
1、 固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液(PCF)固定组织标本。固 定时间〉12h。
2、 脱钙用体积分数2X硝酸对组织标本脱转2.5h。
3、 脱水梯度脱水，对组织标本脱水，用体积分数80M乙醇脱水40mim-95 %乙醇脱水40mim-100%乙醇脱水40mim (2次)，纯丙酮吸附组织标本中残留乙 醇15mim。
4、 浸透浸透液选用甲基丙烯酸羟乙脂(HEMA)，浸透脱水后的组织标本， 在浸透进行到一半时，用甲基丙烯酸羟乙脂更换一次甲基丙烯酸羟乙脂，继续 浸透，约12h。
5、 包埋(1)从浸透液最后一步液体中取出组织标本，用滤纸吸去多余浸 透液；
(2) 把组织标本放入包埋盒底部，放平，同时把标签放入，包埋盒壁的一 侧数字正面向外；
(3) 包埋液甲液(甲基丙烯酸羟乙脂)乙液(聚乙二醇-400、 N-N二甲 基苯胺的混合液)二IOO : 1.6—100 : 2，将包埋液搅拌均匀立即加满盛满组织 标本的内包埋盒，在包埋盒口盖一塑料薄膜，使液体与空气隔离促进表面聚合;(4)将包埋盒放入4r冰箱内冷藏，时间大于12h。取出后放室温2h，变 硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用钢锉磨去包埋块底部，暴露出组织切面，用切片机将组织切面 切成l一3um薄切片，在洁净水面中展平，捞至洁净玻片上。并在60—8(TC电 热板上充分烤1. 5-2. 5h。此过程需3h左右。
7、 染色用苏木素一姬姆萨一伊红(H-Gieinsa-E)染色，然后用中性树胶 封片，即可得到塑料包埋制片。
上述得到的塑料包埋制片用图文分析系统根据组织形态的特点即可分析结 果。这种传统常规操作程序大致需要4个工作日(注在〉12小时操作中过夜 的时间未计算在工作日内)，严重制约了制片速度，长期以来是组织学领域的一 个难以解决的困难。对于急需获得病理结果的患者来说，4天时间太长，尤其是 门诊病人、远道求医的患者或者外地甚至国外的患者，4天的时间的等待、住宿 及消费会消耗患者大量的时间和金钱，从而使患者承担严重的经济负担、消耗 保贵的治疗时间。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制片时间短的塑料包埋制片方法，以 减少患者的经济负担和等待时间。
为解决上述技术问题，本发明方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、 切片和染色过程，其中固定、脱钙、脱水、浸透在超声波高频振谐下进行。
本发明方法进一步的工艺步骤为
(1) 、固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3 — 5h;
(2) 、脱钙用体积分数2^硝酸对组织标本脱钙15—25mim;
(3) 、脱水用体积分数60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液对脱钙 后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7 — 12mim，然后用纯丙酮吸 附组织标本中残留乙醇3—6mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2 — 5h;(5) 、包埋从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加
入包埋液后密封，将包埋盒在4。C冷藏40mim—2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片机将包埋后的组织切面切成l一3ixm薄切片，将薄切 片在60—80。C电热板上充分烤1. 5—2. 5h;
(7) 、染色用苏木素一姬姆萨一伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封
片，即可得到塑料包埋制片。
本发明原理是超声波以每秒80万次高频振谐使生物组织、有机溶剂、浸
透液(HEMA)随高速振荡而产生周期性縮张运动，在一定温度下加速分子运动， 使生物组织的水分更容易被有机溶剂替代出来，并加速有机溶剂、浸透液(HEMA) 浸透到生物组织内。由于分子运动加快，加速了组织与各种试剂的反应，使整 个操作程序在短时间内完成。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于本发明方法与传统塑料包埋制 片法相比，时间从50小时縮短到15小时左右，约节省3个工作日。大大减少 塑料包埋制片的时间，从而减少了患者的经济负担，赢来保贵的治疗时间。
具体实施例方式
本塑料包埋制片方法使用生物组织快速处理仪(型号规格TKY-KC)在超 声波为每秒80万次高频振谐的环境下进行包埋切片。
实施例h本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下 述工艺步骤，
1、 固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本4h;
2、 脱钙用体积分数2。/a肖酸对组织标本脱钙20mim;
3、 脱水采用梯度脱水，即用体积分数60%、 70%、 80%、 95%乙醇溶液 对脱钙后的组织标本分别脱水10mim，再用体积分数100X乙醇脱水5min，更换 100%乙醇后，再脱水5min;最后用纯丙酮吸附组织标本中残留乙醇4mim;
4、 浸透用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本1.5h，更换甲基丙烯 酸羟乙脂后再浸透1.5h。5、 包埋(1)从浸透液最后一步液体中取出组织标本，用滤纸吸去多余浸 透液；
(2) 把组织标本放入包埋盒底部，放平，同时把标签放入，包埋盒壁的一 侧数字正面向外；
(3) 包埋包埋液是甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2 (体积比)混合而成； 其中甲液是甲基丙烯酸羟乙脂，乙液为聚乙二醇-400 : N-N二甲基苯胺^15 : 1
(体积比)的混合液。将包埋液搅拌均匀立即加满盛满组织标本的内包埋盒， 在包埋盒口盖一塑料薄膜，使液体与空气隔离促进表面聚合；
(4) 将包埋盒放入4'C冰箱内冷藏lh。包埋盒取出变硬后即可去掉包埋盒。
6、 切片用钢锉磨去包埋块底部，暴露出组织切面，用切片机将组织切面 切成1—3um薄切片，在洁净水面中展平，捞至洁净玻片上。并在60—8(TC电 热板上充分烤2h。
7、 染色用苏木素一姬姆萨一伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封片， 即可得到塑料包埋制片。
实施例2:本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下 述工艺步骤，
(1) 、固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3h;
(2) 、脱钙用体积分数2X硝酸对组织标本脱钙25mim;
(3) 、脱水脱水，用体积分数60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7mim，然后用纯丙酮 吸附组织标本中残留乙醇3mim;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本5h;
(5) 、包埋从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加 入包埋液后密封，将包埋盒在4。C冷藏40mim,然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片机将包埋后的组织切面切成l一3um薄切片，将薄切 片在60—8(TC在烤片机上烤2. 5h;
7(7)、染色用苏木素一姬姆萨一伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封 片，即可得到塑料包埋制片。
实施例3:本塑料包埋制片方法在超声波每秒80万次高频振谐下，采用下 述工艺步骤，
(1) 、固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本5h;
(2) 、脱钙用体积分数2。/a肖酸对组织标本脱钙15mim;
(3) 、脱水脱水，用体积分数60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液 对脱钙后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水12mim，然后用纯丙酮 吸附组织标本中残留乙醇6mirn;
(4) 、浸透用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2h;
(5) 、包埋从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加 入包埋液后密封，将包埋盒在fC冷藏2h，然后去掉包埋盒；
(6) 、切片用切片机将包埋后的组织切面切成l一3um薄切片，将薄切 片在60—8(TC在烤片机上烤1. 5h;
(7) 、染色用苏木素一姬姆萨一伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封
片，即可得到塑料包埋制片。
权利要求
1、一种塑料包埋制片方法，该方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、切片和染色过程，其特征在于该方法中固定、脱钙、脱水、浸透在超声波高频振谐下进行。
2、 根据权利要求1所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于该方法采用 下述工艺步骤-(1) 、固定用升汞、重铬酸钾、甲醛混合固定液固定组织标本3 —5h;(2) 、脱钙用体积分数2Q/a肖酸对组织标本脱钙15—25mim;(3) 、脱水用体积分数60%、 70%、 80%、 95%、 100%乙醇溶液对脱钙 后的组织标本梯度脱水，各浓度乙醇溶液分别脱水7 — 12mim，然后用纯丙酮吸 附组织标本中残留乙醇3—6mim;(4) 、浸透用甲基丙烯酸羟乙脂浸透脱水后的组织标本2 — 5h;(5) 、包埋从浸透液取出的组织标本放入包埋盒内，然后在包埋盒内加入包埋液后密封，将包埋盒在4(冷藏40mim—2h,然后去掉包埋盒；(6) 、切片用切片机将包埋后的组织切面切成1—3nm薄切片，将薄切 片在60—8(TC电热板上充分烤1. 5—2, 5h;(7) 、染色用苏木素一姬姆萨一伊红将薄切片染色，然后用中性树胶封 片，即可得到塑料包埋制片。
3、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述固 定过程中的固定时间为4h。
4、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述脱 钙过程中的脱f5时间为20min。
5、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述脱 水过程中在用体积分数100%乙醇脱水时，更换一次同等浓度乙醇溶液进行脱 水。
6、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透过程中的浸透时间为3h。
7、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述浸透过程中，更换一次甲基丙烯酸羟乙脂进行浸透。
8、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋过程中的包埋液是体积比甲液乙液=100 : 1.6 100 : 2混合而成；其中甲 液是甲基丙烯酸羟乙脂，乙液为体积比聚乙二醇-400 : N-N^甲基苯胺二15 : 1的混合液。
9、 根据权利要求1或2所述的一种塑料包埋制片方法，其特征在于所述包 埋过程中，包埋盒在4'C冷藏lh。
全文摘要
本发明公开了一种骨髓组织塑料包埋制片方法，该方法包括固定、脱钙、脱水、浸透、包埋、切片和染色过程，其中固定、脱钙、脱水、浸透过程在超声波高频振谐下进行。本塑料包埋制片方法与传统塑料包埋制片法相比，时间从50小时缩短到15小时左右，约节省3个工作日。大大减少塑料包埋制片的时间，从而减少了患者的经济负担，蠃来宝贵的治疗时间。
文档编号G01N1/36GK101430261SQ20081007982
公开日2009年5月13日 申请日期2008年11月25日 优先权日2008年11月25日
发明者丽 姚, 尚银涛, 张学军, 华 彭, 琳 杨, 杨敬慈, 温树鹏, 王福旭, 罗建民 申请人:河北医科大学第二医院