专利名称：一种基于玻璃毛细管构制的组装阵列多道电导免疫传感器的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种电化学电导免疫传感器阵列。
背景技术：
电导型免疫传感器是利用免疫反应引起溶液或薄膜的电导发生变化来进行分析 的传感装置。酶催化底物的反应，导致反应体系中离子种类及浓度的变化，从而改变容溶液 的导电率。例如，尿酶催化尿素生成离子产物NH1+时，形成的NH4+使溶液导电率的增加，其 增加值与酶的量相关，因此电导测量可以确定酶联免疫中酶标示踪物的量。本发明利用这 一现象，在玻璃毛细管里设计免疫反应，引进尿酶标记物，通过竞争反应，将酶标记物固定 在毛细管内表面上，通过酶催化尿素水解使溶液电导增加，从而进行免疫分析。对一种样品多种成分进行免疫检测，一般需要多种不同类型的标记物，而且检测 过程复杂，相互干扰因素很多。本发明提供了较为简单的能够对一种样品多种成分进行免 疫检测的基于多对玻璃毛细管构制的组装阵列多道电导免疫传感器。
发明内容
1、免疫传感器构制(1)、免疫电极构制通过氨基硅烷试剂和戊二醛分别将抗体A、B、C、D···(抗原A、 B、C、D···)固定在玻璃毛细管内壁上，插入钼丝固定作为电极。(2)、封闭用磷酸盐缓冲溶液清洗后，用0. 1% BSA溶液封闭活性吸附点，洗涤干
ο(3)、组装将二根一样构制的玻璃毛细管作为对应蛋白的检测电极对，将固定有 不同蛋白的检测电极对进行组装，集成在一起，即得到组装阵列多道电导免疫传感器。(4)、保存将免疫传感器保存在4°C的冰箱中备用。2、测量过程本发明组装阵列多道电导免疫传感器检测包括以下步骤(1)、免疫反应过程选择酶标物，酶标物是标记有尿酶的待测物，将酶标物加入待 测物中。将此溶液缓慢通过毛细管，通过免疫反应，使待测物和酶标物竞争性吸附到毛细管里。(2)、洗涤免疫反应结束后，用磷酸缓冲溶液洗涤毛细管，除去非特异性吸附蛋 白。(3)、酶催化反应将免传感器置于尿素溶液中，让尿素进入毛细管，经过尿酶标物 催化水解。
(4)、测量以插入尿酶底物溶液里的二根构制相同的毛细管作为电极，构成测量 回路，记录尿酶底物进入毛细管后一定时间内电导值相对变化，可以得到对应待测物浓度。 通过开关转换，可以依次测量不同电极对的电导改变值，从而得到相应待测物浓度。本发明的优点是
1、免疫检传感器构造简单、方便，在玻璃毛细管内固定免疫试剂和发生免疫反应， 各种长度和内径毛细管易得且价格低廉。2、毛细管里面的溶液体积小，检测所需试剂用量很少，在灵敏度、响应时间和重现 性方面都有较大的提高。3、检测信号是电导，所需的仪器设备简单，价格低廉，易于实现微型化、自动化、数字化。4、采用竞争免疫分析法，本电导免疫传感器具有良好的响应特异性。
5、这种免疫检测技术无须昂贵的仪器设备，易于自动化，适合用于家庭保健和临 床初检。
具体实施例方式实施例1 用于检测IgG、IgM、IgA的电导免疫传感器(1)、免疫电极构制将10%氨丙基三乙氧基硅烷NH2 (CH2)3Si (OEt)3的酒精溶液注 入毛细管(长80mm，内径Imm)里，保持20分钟，在毛细管表面引进氨基，清洗后然后注入 10%的戊二醛溶液，然后注入0. 的羊抗人IgM试剂，保持20分钟，用0. IM磷酸盐缓冲溶 液洗净，插入钼丝固定作为电极。(3)、注入0. 1 % BSA溶液，封闭活性吸附点，洗涤干燥。(4)、组装将二根固定有羊抗人IgG玻璃毛细管组合在一起，即得到IgG免疫检 测元器件。同样，将固定有羊抗人IgM的玻璃毛细管组合在一起，即得到IgM免疫检测元器 件，将固定有羊抗人IgA的玻璃毛细管组合在一起，即得到IgA免疫检测元器件。将三种元 器件组装即得到IgG、IgM、IgA的电导免疫传感器阵列。(5)、保存将免疫传感器保存在4°C的冰箱中备用。(6)、免疫反应过程将0. 3 μ g/ml的尿酶标记IgG、尿酶标记IgM和尿酶标记IgA 加入1. Oml待测物中。将此溶液缓慢通过毛细管，通过免疫反应，使待测物和酶标物竞争性 吸附到毛细管里。(7)、洗涤免疫反应结束后，用0. IM的磷酸缓冲溶液洗涤毛细管，除去非特异性 吸附蛋白。(8)、酶催化反应将免疫传感器置于0. 5M的尿素溶液里，让尿素溶液进入毛细 管，尿素溶液经过尿酶标物催化水解，溶液电导率增加。(9)、测量以插入尿素溶液里的二根构制相同毛细管作为电极构成测量回路，记 录尿素溶液进入毛细管后电导值的相对变化，以20分钟后电导相对变化值作为分析信号， 可以得到对应待测物浓度。通过开关转换，可以依次测量不同电极对之间的电导改变值，从 而得到相应待测物浓度。通过线性回归分析，本免疫传感器可在0. 06 8 μ g/mL范围内定 量检测IgG样品含量，在0. 2 30 μ g/mL范围内定量检测IgM样品含量，在0. 1 15 μ g/ mL范围内定量检测IgA样品含量。
权利要求
一种组装阵列多道电导免疫传感器，其特征在于用玻璃毛细管构制免疫传感器，首先通过氨基硅烷试剂和戊二醛将抗体(抗原)固定在玻璃毛细管内壁上，将铂丝电极插入毛细管里固定，注入非特异性蛋白，封闭活性吸附点，经过洗涤干燥后，然后把二根一样构制的玻璃毛细管作为免疫敏感元器件，将多对固定有不同蛋白的免疫敏感元器件组合在一起，即得到组装阵列多道电导免疫传感器。
2.根据权利要求1的免疫传感器，其特征在于在传感器可由长度100mm以下，毛细管内 径1mm以下的各种玻璃毛细管构制。
3.根据权利要求1的免疫传感器，其特征在于几对敏感免疫电极对组合在一起，一次 分析可以实现对同一样品多种成分的检测。
全文摘要
本发明属于电化学免疫分析技术领域。本发明为一种基于玻璃毛细管构制的组装阵列多道电导免疫传感器，首先通过氨基硅烷试剂和戊二醛将抗体A(抗原A)固定在玻璃毛细管内壁上，将铂丝电极插入毛细管里固定，注入非特异性蛋白，封闭活性吸附点，经过洗涤干燥后，然后把二根同样构制的玻璃毛细管组合在一起，得到对A敏感的免疫电极对。用同样方法构制对B敏感的免疫电极对，依次可以构制对C敏感的免疫电极对，对D敏感的免疫电极对，将几对电极组装在一起，即得到组装阵列多道电导免疫传感器，对应的免疫反应在毛细管里培育、洗涤后，插入尿酶的底物溶液中，尿酶标抗原(尿酶标抗体)催化底物反应，导致溶液电导增加，由此得到各抗原(抗体)的含量。
文档编号G01N27/327GK101871932SQ20091003881
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月21日 优先权日2009年4月21日
发明者周亚民 申请人:周亚民