抑亢散的质量控制方法

专利名称：抑亢散的质量控制方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，尤其是指中药制剂中成份含量测定和 鉴别方法。
背景技术：
抑亢散是由羚羊角40.9g、白芍62g、天竺黄82g、桑椹205g、 延胡索(醋炙)83g、青皮(醋炙)124g、香附41g、玄参39g、石决 明43g、黄精59g、黄药子144g、天冬121g、女贞子1083g、地黄16g 组成的中药复方制剂，羚羊角矬研成细粉；天竺黄、白芍、香附、桑 椹、延胡索(醋炎)、青皮(醋炙)、石决明、玄参粉碎成细粉；黄药 子、天冬、地黄、女贞子、黄精加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎 煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓 縮成稠膏，与上述粉末混合，干燥，粉碎，再与羚羊角粉配研，过筛， 混匀，分装，制成1000g。
该药物为棕黄色的粉末；味微苦。该药物的功能主治为育阴潜 阳，豁痰散结，降逆和中，用于瘿病(甲状腺机能亢进)引起的突眼， 多汗心烦，心悸怔忡，口渴，多食，肌体消瘦，四肢震颤等。该药物 的用法用量为口服， 一次l袋,每袋相当于处方药材10.07g， 一日2 次。该药物每袋装4.7g,每袋相当于处方药材10.07g，密封贮藏。
该药物目前的质量控制方法较为单一，在《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第三册85页颁布了抑亢丸的质量控制 方法，在抑亢丸的质量控制方法中，只有一个显微鉴别项，质量控制 方法局限性大，专属性不强，难于控制药物的质量标准。本发明克服 了现有技术的不足，提高了药品的质量控制标准，建立了药物中含量 测定指标及其检测方法，增加其中主要药味延胡索、女贞子、香附、 白芍薄层色谱鉴别方法，保证了该药物较高的质量标准水平。
青皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干 燥幼果或未成熟果实的果皮，具有疏肝破气，消积化滞的功效，主要 成分挥发油、黄酮苷(如橙皮苷)类物质，青皮醋制后可缓和辛烈之 性，增强疏肝止痛，消积化滞的作用。
延胡索为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang的 干燥块茎，具有活血，利气，止痛的功效，主要成分为延胡索甲素、 延胡索乙素等生物碱类物质，延胡索醋制后使难溶于水的生物碱变成 了生物碱盐，大大提高了延胡索有效成分在煎液中的溶解度，从而增 强疗效。
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果 实，具有补肝肾，强腰膝，治阴虚内热，头昏目花，耳鸣，腰膝酸软， 须发早白等功效，主要成分为齐墩果酸油酸、亚油酸，棕榈酸，硬脂 酸、甘露醇等，果皮含有三萜类成分齐墩果酸约占14%。
香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎，具有 行气解郁，调理气机，行气止痛的功效，含有a-香附酮等挥发性成 分。白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根， 具有柔肝止痛，养血调经，敛阴止汗，平抑肝阳的功效，主要成分有 芍药苷、牡丹酚、芍药花苷等成分。

发明内容
本发明提供一种抑亢散的质量控制方法，以解决目前的质量控制 方法不能满足要求的问题。本发明采取的技术方案是包括用高效液 相色谱法测定所述药物的一种成分的含量；用薄层色谱法鉴别其中的
用高效液相色谱法测定该药物中橙皮苷C28H34015的含量； 色谱条件
以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(15-55: 45-85)或 甲醇-水-冰乙酸(15-55:45-85:0.05-6)或乙腈-水(10-35: 65-90)或乙 腈-水-冰乙酸(10-35:65-90:0.05-6)为流动相；检测波长为284土2nm， 理论板数按橙皮苷计算不得少于3000;
对照品溶液的制备
精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇或乙醇制成每lml含橙皮苷 0.1mg-0.3mg的溶液；
供试品溶液的制备
精密称定已经研细的该药物lg，置锥形瓶中，精密加入50ml的 甲醇或乙醇，称定重量，超声处理，功率50-200W，频率25-75KHz， 10-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5ml，置5ml-15ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度， 摇匀，即得；
含量测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1^1-1(^1，注入液相色 谱仪，测定橙皮苷含量。
该药物每袋含青皮以橙皮苷<:281134015计，不得少于60.0mg。
流动相中的冰乙酸也可以是磷酸。
鉴别方法
a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分
供试品溶液的制备
称取该药物2g，加25ml-75ml的甲醇或乙醇，超声处理10-50分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加入10ml-30ml水使溶解，加氨水调至碱 性，用乙醚振摇提取2-4次，每次5ml-15ml，合并乙醚液，挥干，残 渣加甲醇或乙醇0.5ml-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取延胡索乙素对照品，加甲醇或乙醇制成每lml含延胡索乙素 0.5mg-l,5mg的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液5-15pl，对照品溶液l-5pl，分别点于同一硅胶 G薄层板上或用ln/。NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以展开剂展 开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在日光下检视；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以碘化铋钾试液，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是正己垸-三氯甲烷-甲醇 (5-18:2-10:0.5-2)或正己垸-三氯甲垸-甲醇-二乙胺 (5-18:2-10:0.5-2:0.05-1 )或正己烷-三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5-18:2-10:0.5-2:0.05-1);以及其它常用的展开剂及配比。
b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分
供试品溶液的制备
称取该药物lg，加20 ml -60 ml甲醇或乙醇，加热回流20-40分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇:三氯甲烷=2-4:1-3的混合溶 0.5ml-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取齐墩果酸对照品，加甲醇或乙醇制成每lml含齐墩果酸 0.5mg-1.5mg的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液5-15pl、对照品溶液l-10)il，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液， 在10(TC-120'C加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；本发明一种实施方式是显色反应中喷以10%硫酸溶液或者喷以
磷钼酸试液，在10(TC-12(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检视， 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
以及其它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是环己垸-丙酮-乙酸乙酯 (4-6:1-3:0.5-1.5)或三氯甲烷-甲醇(30-50:1-5)或甲苯-乙酸乙酯-醋酸(8-14:2-4:0.1-0.5)或三氯甲烷-丙酮(8-10:0.5-1.5)或环己烷-丙酮(3-5:0.5-1.5)或环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-醋酸 (19-21:4-6:7-9:0.05-1)或正己烷-乙酸乙酯-醋酸(5-7:3-5:0.05-1)或甲 苯-乙酸乙酯(1-2:1-2);以及其它常用的展开剂及配比。
本发明鉴别方法中还包括:c)用薄层色谱法鉴别其中的a -香附酮 成分；
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加乙醚10ml-30ml，放置0.5小时-1.5小时，时 时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试 品溶液。
对照品溶液的制备
称取a-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每lml含a-香附酮lmg 的溶液，作为对照品溶液。 薄层色谱法试验
吸取上述两种溶液各5^1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以展开剂展开，取出，晾千，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝 基苯肼试液，日光下检视，斑点渐变为橙红色。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以盐酸酸性5%三氯化铁
乙醇溶液，在100。C-12(TC加热3-20分钟；供试品色谱中，在与对
照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以1%香草醛硫酸溶液或
10%的硫酸乙醇溶液，在100。C-120。C加热3-20分钟，置365nm紫外 光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的荧光斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是正己烷-乙酸乙酯(10-30: 1-5) 或苯-乙酸乙酯(5-70:0.5-2)或苯-乙酸乙酉旨-冰醋酸(50-95:l-5:l-5)或环 己烷-乙酸乙酯(5-15:0.5-2)或石油醚(60。C-90。C)-乙酸乙酯(5-20:2-5) 或正己烷-乙酸乙酯-二乙胺(10-30:3-8:0.5-2)。
本发明鉴别方法中还包括d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成
分；
供试品溶液的制备
取该药物4.7g,加甲醇或乙醇30ml-50ml，加热回流20分钟-40 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇lml使溶解，作为供试品 溶液。
对照品溶液的制备
称取芍药苷对照品，加甲醇或乙醇制成每lml含芍药苷lmg的 溶液，作为对照品溶液。薄层色谱法试验
吸取供试品溶液8ul、对照品溶液5tU，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液， 在10(TC-12(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以硫酸乙醇溶液，在 10(TC-12(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以茴香醛试液，在 100-120'C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一 甲酸(30-50: 1-10: 5-15: 0.1-0.3)或三氯甲烷 一 乙酸乙酯一甲醇 (6-10:0.5-2:3-5)或三氯甲烷一乙酯乙酯一甲醇一浓氨试液 (6-10:0.5-2:3-5:0.5-2)或三氯甲烷一甲醇(2-10: 0.5-2)或三氯甲烷一 甲醇一水(10-30: 3-20: 0.5-10)。
本发明的优点是克服了传统中药不足，建立了该药物先进的质 量控制方法，利用高效液相色谱法测定该药物中的橙皮苷的含量，对 药物中主药延胡索、女贞子、香附、白芍药味进行了薄层色谱法鉴别， 保证了药物质量控制方法的准确性和先进性，能够有效地控制该药物 的产品质量。
具体实施方式
所述的药物配方是由羚羊角40.9g、白芍62g、天竺黄82g、桑椹 205g、延胡索(醋炙)83g、青皮(醋炙)124g、香附41g、玄参39g、 石决明43g、黄精59g、黄药子144g、天冬121g、女贞子1083g、地 黄16g组成的中药复方制剂，羚羊角矬研成细粉；天竺黄、白芍、香 附、桑椹、延胡索(醋炎)、青皮(醋炙)、石决明、玄参粉碎成细粉； 黄药子、天冬、地黄、女贞子、黄精加水煎煮二次，第一次加8倍量 水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤 液浓縮成稠膏，与上述粉末混合，干燥，粉碎，再与羚羊角粉配研， 过筛，混匀，分装，制成1000g;该药物每袋装4.7g，每袋相当于处 方药材10.07g。
实施例1
用高效液相色谱法测定所述药物的一种成分的含量；用薄层色谱 法鉴别其中的四种成分；
用高效液相色谱法测定该药物中橙皮苷C28H34015的含量。 色谱条件
以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰乙酸15:45:0.05 为流动相；检测波长为284±2nm，理论板数按橙皮苷计算不得少于 3000;
对照品溶液的制备
精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每lml含橙皮苷0.1mg 的溶液；供试品溶液的制备
精密称定已经研细的该药物lg，置锥形瓶中，精密加入50ml的 甲醇，称定重量，超声处理，功率50W，频率25KHz， 50分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5ml， 置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
含量测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各lnl，注入液相色谱仪， 测定橙皮苷含量。
该药物每袋含青皮以橙皮苷<:281134015计，不得少于60.0mg。
流动相中的冰乙酸也可以是磷酸。
鉴别方法
a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分
供试品溶液的制备
称取该药物2g，加25ml的甲醇，超声处理50分钟，滤过，滤 液蒸干，残渣加入10ml水使溶解，加氨水调至碱性，pH值8，用乙 醚振摇提取2次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇0.5ml 使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每lml含延胡索乙素0.5mg 的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液5jnl，对照品溶液ljul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂正己垸-三氯甲烷-甲醇5:2:0.5展开，取出，晾干， 以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽碘后，置 365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以碘化铋钾试液，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是正己垸-三氯甲垸-甲醇-二乙胺
(5-18:2-10:0.5-2:0.05-1 )或正己烷-三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5-18:2-10:0.5-2:0.05-1);以及其它常用的展开剂及配比。 b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分
供试品溶液的制备
称取该药物lg，加20ml甲醇，加热回流40分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇.'三氯甲烷=2.'1的混合溶0.5ml使溶解，作为 供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每lml含齐墩果酸0.5mg的溶 液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液5pl、对照品溶液l)il，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以展开剂环己烷-丙酮-乙酸乙酯4:1:0.2展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在12(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检
视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 占.
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本发明一种实施方式是显色反应中喷以10%硫酸溶液或者喷以
磷钼酸试液，在12(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品
色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是三氯甲烷-甲醇(30-50:1-5) 或甲苯-乙酸乙酯-醋酸(8-14:2-4:0.1-0.5)或三氯甲垸-丙酮
(8-10:0.5-1.5)或环己烷-丙酮(3-5:0.5-1.5)或环己垸-三氯甲垸-乙 酸乙酯-醋酸(19-21:4-6:7-9:0.05-1)或正己烷-乙酸乙酯-醋酸
(5-7:3-5:0.05-1)或甲苯-乙酸乙酯(1-2:1-2);以及其它常用的展开 剂及配比。
c)用薄层色谱法鉴别其中的a -香附酮成分
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加乙醚10ml，放置1.5小时，时时振摇，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备
称取a-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每lml含a-香附酮lmg 的溶液，作为对照品溶液。 薄层色谱法试验
吸取上述两种溶液各5^1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以展开剂正己烷-乙酸乙酯10: l展开，取出，晾干，置254nm紫外 光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，日光下检视，斑点渐变为橙红色。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以盐酸酸性5%三氯化铁 乙醇溶液，在12CTC加热3分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以1%香草醛硫酸溶液或
10%的硫酸乙醇溶液，在IO(TC加热20分钟，置365nm紫外光灯下 检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是苯-乙酸乙酯(5-70:0.5-2)或苯-乙酸乙酯-冰醋酸(50-95:l-5:l-5)或环己垸-乙酸乙酯(5-15:0.5-2)或石 油醚(60°C -90 。C )-乙酸乙酯(5-20:2-5)或正己烷-乙酸乙酯-二乙胺 (10-30:3-8:0.5-2)。
d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成分
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加甲醇30ml，加热回流40分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备
称取芍药苷对照品，加甲醇制成每lml含芍药苷lmg的溶液， 作为对照品溶液。
薄层色谱法试验吸取供试品溶液8lU、对照品溶液5"1，分别点于同一硅胶G
薄层板上，以展开剂三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸30: 1: 5:
0.1展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在120'C加热至斑
点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。
本发明一种实施方式是:显色反应中喷以硫酸乙醇溶液，在120°C
加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以茴香醛试液，在120°C
加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇
(6-10:0.5-2:3-5)或三氯甲烷一乙酯乙酯一甲醇一浓氨试液 (6-10:0.5-2:3-5:0.5-2)或三氯甲烷一甲醇(2-10: 0.5-2)或三氯甲垸一 甲醇一水(10画30: 3-20: 0.5-10)。
实施例2
用高效液相色谱法测定所述药物的一种成分的含量；用薄层色谱 法鉴别其中的四种成分； 含量测定
用高效液相色谱法测定该药物中橙皮苷C28H34015的含量。 色谱条件.-
以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰乙酸40:56:4为流动相；检测波长为284±2nm，理论板数按橙皮苷计算不得少于3000; 对照品溶液的制备
精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每lml含橙皮苷0.2mg 的溶液；
供试品溶液的制备
精密称定已经研细的该药物lg，置锥形瓶中，精密加入50ml的 甲醇，称定重量，超声处理，功率120W，频率50KHz， 30分钟，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5ml， 置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
含量测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5^1,注入液相色谱仪， 测定橙皮苷含量。
该药物每袋含青皮以橙皮苷C28H340"+，不得少于60.0mg。
流动相中的冰乙酸也可以是磷酸。
鉴别方法
a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分
供试品溶液的制备
称取该药物2g，加50ml的甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤 液蒸干，残渣加入20ml水使溶解，加氨水调至碱性pH值10，用乙 醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1.0ml 使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备称取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每lml含延胡索乙素l.Omg 的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液1(Hil，对照品溶液3^，分别点于同一用l%NaOH 溶液制备的硅胶G薄层板上，以展开剂正己垸-三氯甲烷-甲醇7.5:4:1 展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在日光下检视；供 试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在 空气中挥尽碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以碘化铋钾试液，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是正己烷-三氯甲烷-甲醇-二乙胺 (5-18:2-10:0,5-2:0.05-1 )或正己烷-三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5-18:2-10:0.5-2:0.05-1);以及其它常用的展开剂及配比。
b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分
供试品溶液的制备
称取该药物lg，加40ml甲醇，加热回流30分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇:三氯甲烷=3:2的混合溶1.0 ml使溶解，作为 供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每lml含齐墩果酸l.Omg的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液10pl、对照品溶液5)！1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以展开剂环己垸-丙酮-乙酸乙酯5:2:1展开，取出，晾干， 喷以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检 视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以10%硫酸溶液试液，在 ll(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其它常用显色反应。 本发明一种实施方式是展开剂是三氯甲垸-甲醇(30-50:1-5) 或甲苯-乙酸乙酯-醋酸(8-14:2-4:0.1-0.5)或三氯甲烷-丙酮 (8-10:0.5-1.5)或环己烷-丙酮(3-5:0.5-1.5)或环己烷-三氯甲烷-乙 酸乙酯-醋酸(19-21:4-6:7-9:0.05-1)或正己烷-乙酸乙酯-醋酸 (5-7:3-5:0.05-1)或甲苯-乙酸乙酯(1-2:1-2);以及其它常用的展开 剂及配比。
c)用薄层色谱法鉴别其中的a -香附酮成分
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加乙醚20ml，放置1.0小时，时时振摇，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备
称取a-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每lml含a-香附酮lmg的溶液，作为对照品溶液。 薄层色谱法试验
吸取上述两种溶液各5^1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以展开剂正己烷-乙酸乙酯17:3展开，取出，晾干，置254nm紫外光 灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，日光下检视，斑点渐变为橙红色。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以盐酸酸性5%三氯化铁 乙醇溶液，在110'C加热10分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以1%香草醛硫酸溶液或 10%的硫酸乙醇溶液，在110。C加热11分钟，置365nm紫外光灯下 检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是苯-乙酸乙酯(5-70:0.5-2)或苯-乙酸乙酯-冰醋酸(50-95:l-5:l-5)或环己烷-乙酸乙酯(5-15:0.5-2)或石 油醚(60。C-90。C)-乙酸乙酯(5-20:2-5)或正己烷-乙酸乙酯-二乙胺 (10-30:3-8:0.5-2)。
d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成分
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加甲醇40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备称取芍药苷对照品，加甲醇制成每lml含芍药苷lmg的溶液， 作为对照品溶液。
薄层色谱法试验
吸取供试品溶液8"1、对照品溶液5tU，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以展开剂三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸40:5:10:0.2 展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105。C加热至斑点 显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点。
本发明一种实施方式是:显色反应中喷以硫酸乙醇溶液，在105°C 加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以茴香醛试液，在105'C 加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是三氯甲垸一乙酸乙酯一甲醇
(6-10:0.5-2:3-5)或三氯甲烷一乙酯乙酯一甲醇一浓氨试液 (6-10:0.5-2:3-5:0.5-2)或三氯甲烷一甲醇(2-10: 0.5-2)或三氯甲烷一 甲醇一水(10-30: 3-20: 0.5-10)。 实施例3
用高效液相色谱法测定所述药物的一种成分的含量；用薄层色谱 法鉴别其中的四种成分；用高效液相色谱法测定该药物中橙皮苷C28H3401S的含量。
色谱条件
以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；甲醇-水35: 65为流动相； 检测波长为284±2nm，理论板数按橙皮苷计算不得少于3000; 对照品溶液的制备
精密称定橙皮苷对照品适量，加乙醇制成每lml含橙皮苷0.3mg 的溶液；
供试品溶液的制备
精密称定已经研细的该药物lg，置锥形瓶中，精密加入50ml的 乙醇，称定重量，超声处理，功率200W，频率75KHz， IO分钟，放 冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5ml， 置15ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得；
含量测定方法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各lO)il，注入液相色谱 仪，测定橙皮苷含量。
该药物每袋含青皮以橙皮苷(:28&4015计，不得少于60.0mg。
流动相中的冰乙酸也可以是磷酸。
鉴别方法
a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分
供试品溶液的制备
称取该药物2g，加75ml的乙醇，超声处理10分钟，滤过，滤 液蒸干，残渣加入30ml水使溶解，加氨水调至碱性，pH值13，用乙醚振摇提取4次，每次5ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1.5ml 使溶解，作为供试品溶液； 对照品溶液的制备
称取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml含延胡索乙素1.5mg 的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液15^1，对照品溶液5^1，分别点于同一用l%NaOH 溶液制备的硅胶G薄层板上，以展开剂正己烷-三氯甲垸-甲醇-二乙 胺12:6:1.5:0.5展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在 日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点；在空气中挥尽碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以碘化铋钾试液，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是正己烷-三氯甲烷-甲醇 (5-18:2-10:0.5-2)或正己烷-三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5-18:2-10'.0.5-2:0.05-l);以及其它常用的展开剂及配比。
b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分
供试品溶液的制备
称取该药物lg，加60ml乙醇，加热回流20分钟，滤过，滤液 蒸干，残渣加无水乙醇:三氯甲垸=4:3的混合溶1.5 ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备
称取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每lml含齐墩果酸1.5mg的溶 液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验
吸取供试品溶液15^1、对照品溶液10^1，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以展开剂三氯甲烷-丙酮9:l展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
本发明一种实施方式是显色反应中喷以10%硫酸溶液或者喷以 磷钼酸试液，在IO(TC加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；以及其 它常用显色反应。
本发明一种实施方式是展开剂是环己烷-丙酮-乙酸乙酯 (4-6:1-3:0.5-1.5)或三氯甲烷-甲醇(30-50:1-5)或甲苯-乙酸乙酯-醋酸(8-14:2-4:0.1-0.5)或环己烷-丙酮(3-5:0.5-1.5)或环己垸-三氯 甲烷-乙酸乙酯-醋酸(19-21:4-6:7-9:0.05-l)或正己垸-乙酸乙酯-醋酸 (5-7:3-5:0.05-1)或甲苯-乙酸乙酯(1-2:1-2);以及其它常用的展开 剂及配比。
c)用薄层色谱法鉴别其中的a -香附酮成分
供试品溶液的制备
取该药物4.7g，加乙醚30ml，放置0.5小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备
称取a-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每lml含a-香附酮lmg 的溶液，作为对照品溶液。 薄层色谱法试验
吸取上述两种溶液各5|il，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以展开剂环己烷-乙酸乙酯10:l展开，取出，晾干，置254nm紫外光 灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，日光下检视，斑点渐变为橙红色。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以盐酸酸性5%三氯化铁 乙醇溶液，在100。C加热20分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以1%香草醛硫酸溶液或
10%的硫酸乙醇溶液，在IO(TC加热20分钟，置365nm紫外光灯下 检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是正己烷-乙酸乙酯(10-30: 1-5) 或苯-乙酸乙酯(5-70:0.5-2)或苯-乙酸乙酯-冰醋酸(50-95:l-5:l-5)或石 油醚(60°C-90°C)-乙酸乙酯(5-20:2-5)或正己烷-乙酸乙酯-二乙胺 (10-30:3-8:0.5-2)。
d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成分
供试品溶液的制备取该药物4.7g，加乙醇50ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备
称取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含芍药苷lmg的溶液， 作为对照品溶液。
薄层色谱法试验
吸取供试品溶液8ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以展开剂三氯甲垸一乙酸乙酯一甲醇8:1:4展开，取出， 晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在IO(TC加热至斑点显色清晰，供 试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是:显色反应中喷以硫酸乙醇溶液，在100。C 加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是显色反应中喷以茴香醛试液，在100'C 加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
本发明一种实施方式是展开剂是三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一 甲酸(30-50: 1-10: 5-15: 0.1-0.3)或三氯甲烷一乙酯乙酯一 甲醇一浓
氨试液(6-10:0.5-2:3-5:0.5-2)或三氯甲垸一甲醇(2-10: 0.5-2)或三氯 甲垸一甲醇一水(10-30: 3-20: 0.5-10)。
权利要求
1、抑亢散的质量控制方法，其中所述的药物配方是由羚羊角40.9g、白芍62g、天竺黄82g、桑椹205g、延胡索(醋炙)83g、青皮(醋炙)124g、香附41g、玄参39g、石决明43g、黄精59g、黄药子144g、天冬121g、女贞子1083g、地黄16g组成的中药复方制剂，羚羊角锉研成细粉；天竺黄、白芍、香附、桑椹、延胡索(醋炙)、青皮(醋炙)、石决明、玄参粉碎成细粉；黄药子、天冬、地黄、女贞子、黄精加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，与上述粉末混合，干燥，粉碎，再与羚羊角粉配研，过筛，混匀，分装，制成1000g；该药物每袋装4.7g，每袋相当于处方药材10.07g；其特征在于包括用高效液相色谱法测定所述药物的一种成分的含量；用薄层色谱法鉴别其中的两种成分；含量测定用高效液相色谱法测定该药物中橙皮苷C28H34O15的含量，色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(15-55∶45-85)或甲醇-水-冰乙酸(15-55∶45-85∶0.05-6)或乙腈-水(10-35∶65-90)或乙腈-水-冰乙酸(10-35∶65-90∶0.05-6)为流动相；检测波长为284±2nm，理论板数按橙皮苷计算不得少于3000；对照品溶液的制备精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇或乙醇制成每1ml含橙皮苷0.1mg-0.3mg的溶液；供试品溶液的制备精密称定已经研细的该药物1g，置锥形瓶中，精密加入50ml的甲醇或乙醇，称定重量，超声处理，功率50-200W，频率25-75KHz，10-50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液5ml，置5ml-15ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得；含量测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl-10μl，注入液相色谱仪，测定橙皮苷含量；该药物每袋含青皮以橙皮苷C28H34O15计，不得少于60.0mg；鉴别方法a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分供试品溶液的制备称取该药物2g，加25ml-75ml的甲醇或乙醇，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加入10ml-30ml水使溶解，加氨水调至碱性，用乙醚振摇提取2-4次，每次5ml-15ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇或乙醇0.5ml-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；对照品溶液的制备称取延胡索乙素对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含延胡索乙素0.5mg-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；薄层色谱法试验吸取供试品溶液5-15μl，对照品溶液1-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上或用1％NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽碘后，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分供试品溶液的制备称取该药物1g，加20ml-60ml甲醇或乙醇，加热回流20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇∶三氯甲烷＝2-4∶1-3的混合溶0.5ml-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；对照品溶液的制备称取齐墩果酸对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含齐墩果酸0.5mg-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；薄层色谱法试验吸取供试品溶液5-15μl、对照品溶液1-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃-120℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2、根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于:鉴别方法中还包括c) 用薄层色谱法鉴别其中的a -香附酮成分供试品溶液的制备取该药物4.7g，加乙醚10ml-30ml，放置0.5小时-1.5小时，时 时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试 品溶液；对照品溶液的制备称取a-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每lml含a-香附酮lmg 的溶液，作为对照品溶液； 薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各5^1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上， 以展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色 谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝 基苯肼试液，日光下检视，斑点渐变为橙红色。
3、根据权利要求1或2所述的抑亢散的质量控制方法，其特征 在于鉴别方法中还包括d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成分供试品溶液的制备取该药物4.7g，加甲醇或乙醇30ml-50ml，加热回流20分钟-40 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或乙醇lml使溶解，作为供试品 溶液；对照品溶液的制备称取芍药苷对照品，加甲醇或乙醇制成每lml含芍药苷lmg的 溶液，作为对照品溶液；薄层色谱法试验吸取供试品溶液8ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液， 在100'C-12(TC加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4、 根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于含量测定中色谱条件流动相中的冰乙酸是磷酸。
5、 根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于 鉴别方法a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分中显色反应中喷以碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的斑点。
6、根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在 于鉴别方法a)用薄层色谱法鉴别其中的延胡索成分中展开剂是正 己垸-三氯甲烷-甲醇(5-18:2-10:0.5-2)或正己烷-三氯甲烷-甲醇-二乙 胺(5-18:2-10:0.5-2:0.05-1)或正己烷-三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5-18:2-10:0.5-2:0.05-l)。
7、 根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于 鉴别方法b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分中显色反应中喷 以10%硫酸溶液或者喷以磷钼酸试液，在100。C-120。C加热至斑点显 色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；以及其它常用显色反应。
8、 根据权利要求1所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于鉴别方法b)用薄层色谱法鉴别其中的女贞子成分中展开剂是三氯甲烷-甲醇(30-50:1-5)或环己烷-丙酮-乙酸乙酯(4-6:1-3:0.2-1.5)或 甲苯-乙酸乙酯-醋酸(8-14:2-4:0.1-0.5)或三氯甲烷-丙酮(8-10:0.5-1.5) 或环己烷-丙酮(3-5:0.5-1.5)或环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-醋酸 (19-21:4-6:7-9:0.05-1)或正己烷-乙酸乙酯-醋酸(5-7:3-5:0.05-1)或甲 苯-乙酸乙酯(1-2:1-2)。
9、 根据权利要求2所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于 鉴别方法c)用薄层色谱法鉴别其中的a-香附酮成分，展开剂是正己 烷-乙酸乙酯(10-30: 1-5)或苯-乙酸乙酯(5-70:0.5-2)或苯-乙酸乙酯-冰醋酸(50-95:l-5:l-5)或环己烷-乙酸乙酯(5-15:0.5-2)或石油醚 (60°C-90°C)-乙酸乙酯(5-20:2-5)或正己垸-乙酸乙酯-二乙胺(10-30:3-8:0,5-2)。
10、 根据权利要求3所述的抑亢散的质量控制方法，其特征在于鉴别方法d)用薄层色谱法鉴别其中的芍药苷成分，展开剂是三氯甲 烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(30-50: 1-10: 5-15: 0.1-0.3)或三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇(6-10:0.5-2:3-5)或三氯甲烷一 乙酯乙酯一 甲醇一 浓氨试液(6-10:0.5-2:3-5:0.5-2)或三氯甲烷一甲醇(2-10: 0.5-2)或三 氯甲垸一甲醇一水(10-30: 3-20: 0.5-10)。
全文摘要
本发明涉及一种抑亢散的质量控制方法，属于中药技术领域，尤其是指中药制剂中成份含量测定和鉴别方法。包括用高效液相色谱法测定药物中橙皮苷C₂₈H₃₄O₁₅的含量；用薄层色谱法鉴别其中的延胡索、女贞子、α-香附酮和芍药苷成分。优点是克服了传统中药不足，建立了该药物先进的质量控制方法，利用高效液相色谱法测定该药物中的橙皮苷的含量，对药物中主药延胡索、女贞子、香附、白芍药味进行了薄层色谱法鉴别，保证了药物质量控制方法的准确性和先进性，能够有效地控制该药物的产品质量。
文档编号G01N30/90GK101564512SQ20091006694
公开日2009年10月28日 申请日期2009年5月13日 优先权日2009年5月13日
发明者刘召辉, 刘同彦, 夏国凤, 曹延梅, 宏 李, 萍 李, 柳洪峰, 袁家升, 许家洁, 陈志国 申请人:吉林敖东集团力源制药股份有限公司