专利名称：：中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法
技术领域：
：本发明涉及利用化学指示剂对非生物材料的检测，尤其涉及二氢吡啶类降压化合物的检测方法。
背景技术：
：降压西药根据其药理不同大致可分为五大类，利尿剂、e受体阻滞剂、钙拮抗剂(ccB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)。长期过量服用降压西药会带来严重的副作用，如口唇麻木、头痛、消化道出血、肝功能下降甚至丧失、诱发或使糖尿病恶化。一些不法厂商在巨大的经济利益引诱下，利用消费者急于治疗的心理和中药无毒副作用的认识误区，在中草药降压产品(包括中草药制成的中成药、保健品和食品)中大量掺杂国家法律法规明令禁止的化学降压药以增强其降压效果。患者在不知情的情况下大量服用，严重危害了广大消费者的健康。二氢吡啶类降压化合物中以掺杂硝苯地平、尼莫地平和尼群地平最为常见。硝苯地平，其起效剂量为10mg，化学名称为2，6-二甲基-4(2-硝基苯基)-1，4二氢-3，5-吡啶二甲酸二甲酯，该化合物为黄色结晶性粉末，无臭，无味，遇光不稳定，在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶。2005年版《中国药典》上记载的该化合物的化学鉴别方法为取本品约25mg，加丙酮lml溶解，加20%氢氧化钠溶液3-5滴，振摇，溶液显橙红色。尼群地平，其起效剂量为10mg，化学名称为2，6-二甲基-4(3-硝基苯基)_1，4二氢-3，5-吡啶二甲酸-甲乙酯，该化合物为黄色结晶或结晶性粉末，无臭，无味，遇光易变质，在丙酮或三氯甲烷中易溶，在甲醇或乙醇中略溶，在水中几乎不溶。2005年版《中国药典》上记载的该化合物的化学鉴别方法为取本品约50mg，加丙酮lml，加20%氢氧化钠试液3-5滴，溶液显橙红色。尼莫地平，其起效剂量为10mg，化学名称为2，6-二甲基-4(3-硝基苯基)-1，4二氢-3，5-吡啶二甲酸-2甲氧乙基-(l-甲乙基)酉旨，该化合物为黄色结晶性粉末或粉末，无臭，无味，遇光不稳定，在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中略溶，在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。2005年版《中国药典》上记载的该化合物的化学鉴别方法为取本品约20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液2ml，1.5mol/L的硫酸溶液1滴与0.5mol/L的氢氧化钾溶液lml，强烈振摇，1分钟内沉淀由灰绿色变成红棕色。药典中硝苯地平和尼群地平的鉴别方法选用丙酮作为溶剂，而氢氧化钠和氢氧化钾在丙酮溶液中容易析出，按照药典上记载的鉴别方法进行实验，无法得到其描述的实验结果。而药典中尼莫地平的鉴别方法选用乙醇作为溶剂，众所周知，氢氧化钠和氢氧化钾可溶于乙醇，但硝苯地平、尼群地平和尼莫地平在乙醇中几乎不溶，因此，简单的溶剂替换(乙醇替换丙酮)也无法检测硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。另一方面，即使药物纯度高达90%以上(药典中记载的鉴别方法所使用的纯度)，其在20%的氢氧化钠-水溶液中反应所呈现的颜色也很浅，更何况中草药产品中的硝苯地平、尼群地平和尼莫地平含量较低(10%以下)，其在20%的氢氧化钠-水溶液中反应更加不灵敏，颜色变化更加不明显，加上中草药降压产品的提取液一般带有较深的颜色(棕黄色)，反应的颜色的变化往往被覆盖，无法判断检测结果。再者，20%的氢氧化钠-水溶液为高浓度强碱性溶液，具有强腐蚀性，储藏和使用极其不方便。因此，使用药典中记载的鉴别方法不适合用于检测中草药降压产品中是否掺杂硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法。本发明所要解决的技术问题还在于提供一种实施中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法的专用试剂盒。本发明的技术方案是这样的-一种中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量5-10倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；'(2)取lml步骤(l)所得的滤液，滴加3-5滴质量浓度为2%-3%的氢氧化钾-乙醇溶液，摇匀，观察颜色变化；若溶液变成红棕色，则表明样品中掺杂有二氢吡啶类降压化合物；所述的二氢吡啶类降压化合物为硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一种或两种以上。本发明上述技术方案中，滴加氢氧化钾-乙醇后溶液颜色的深浅与样品中所掺杂的二氢吡啶类降压化合物的量有关，所掺杂的二氢吡啶类降压化合物越多，溶液颜色越深。为了方便地实施本发明方法，本发明还提供所述方法的专用试剂盒，该试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%-3%的氢氧化钾-乙醇溶液。本发明所述的试剂盒还包括至少一个滤头、至少一支带刻度的注射器和至少一个带塞样品瓶。本发明所述的方法选用体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液作为溶剂，既使得硝苯地平、尼群地平和尼莫地平能够完全溶解，又使得氢氧化钾不析出，确保了反应的顺利进行，并提高了反应的灵敏度；选用2%3%的氢氧化钾-乙醇溶液作为指示剂避免了使用具有强腐蚀性的高浓度碱溶液，并进一步提高了反应的灵敏度，使得颜色变化更加明显，有助于检测结果的判断。与现有的检测方法相比，本发明具有以下优点1、成本低廉。与高效液相色谱、薄层层析等方法相比，本发明方法具有成本低廉的特点，适合大批量药物的筛查和检验，具有较高的推广和应用价值。2、操作简单。本发明方法的操作极其简单，都是本领域最简单最基本的操作，无需专业的技术人员进行专门的操作。3、检测时间短。本发明方法的检测时间非常短，完成检测的全过程只需5分钟。本发明的有益效果由以下实验证明。实验一溶剂的选择研究1、试剂(1)丙酮;(2)乙醇；(3)体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；(4)质量浓度为20%的氢氧化钠-水溶液；(5)质量浓度为20%的氢氧化钾-水溶液；(6)质量浓度为2%的氢氧化钠_乙醇溶液(7)质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液。2、实验仪器样品瓶、试管、滴管、滤头和注射器。3、样品硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。4、实验方法5(1)取丙酮3管，每管lml,第一管加入100mg(起效剂量的IO倍)硝苯地平，第二管加入100mg尼群地平，第三管加入100mg尼莫地平，各振摇l分钟，静置；分别以乙醇和体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液替换丙酮重复上述实验；(2)取丙酮4管，每管lml，第一管滴加4滴质量浓度为20%的氢氧化钠-水溶液，第二管滴加4滴质量浓度为20%的氢氧化钾-水溶液，第三管滴加4滴质量浓度为2%的氢氧化钠-乙醇溶液，第四管滴加4滴质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液，各振摇1分钟，静置；分别以乙醇和体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液替换丙酮重复上述实验。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可知，硝苯地平、尼群地平和尼莫地平在乙醇中几乎不溶；由表2可知，氢氧化钠和氢氧化钾在丙酮中容易析出，因此，乙醇和丙酮都不适宜作为溶剂用于这三种药物的检测方法中。而体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液既使得硝苯地平、尼群地平和尼莫地平能够完全溶解(参见表l),又可以使得氢氧化钠和氢氧化钾不析出(参见表2),满足作为溶剂的要求。实验二指示剂对检测结果的影响1、试剂(1)体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；(2)质量浓度为20%、30%、35°/。、40%的氢氧化钠-水溶液；(3)质量浓度为20%、30%、35%、40%的氢氧化钾_水溶液；(4)质量浓度为1%、2%、3°/。、4%的氢氧化钠-乙醇溶液；(5)质量浓度为1°/。、2%、3%、4%的氢氧化钾-乙醇溶液。'2、实验仪器试管、滴管、滤头和注射器。3、样品样品1:取清脑降压片4片，破碎，加入相当于清脑降压片质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液；样品2:取脑立清胶囊4粒，其内容物掺入2mg硝苯地平、2mg尼群地平和lmg尼莫地平，加入相当于脑立清胶囊、硝苯地平、尼群地平和尼莫地平总质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液；样品3:取复方丹参片4片，破碎，掺入5mg硝苯地平，加入相当于复方丹参片和硝苯地平总质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液；样品4:取复方丹参片4片，破碎，掺入5mg尼群地平，加入相当于复方丹参片和尼群地平总质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液；样品5:取清脑降压片4片，破碎，掺入5mg尼莫地平，加入相当于清脑降压片和尼莫地平总质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液；样品6:取脑立清胶囊4粒，其内容物掺入lmg硝苯地平和lmg尼莫地平，加入相当于脑立清胶囊、硝苯地平和尼莫地平总质量6倍的体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；振摇使其溶解，静置，过滤，保留滤液。4、实验方法(1)取样品1的滤液4管，每管lml，第一管滴加3滴质量浓度为2(m的氢氧化钠-水溶液，第二管滴加3滴质量浓度为30%的氢氧化钠-水溶液，第三管滴加3滴质量浓度为35%的氢氧化钠-水溶液，第四管滴加3滴质量浓度为4(W的氢氧化钠-水溶液，摇匀，观察颜色变化；其他各样品分别代替样品1重复上述实验；(2)取样品1的滤液4管，每管lml，第一管滴加3滴质量浓度为10%的氢氧化钾-水溶液，第二管滴加3滴质量浓度为20%的氢氧化钾-水溶液，第三管滴加3滴质量浓度为30%的氢氧化钾-水溶液，第四管滴加3滴质量浓度为35%的氢氧化钾-水溶液，摇匀，观察颜色变化；其他各样品分别代替样品1重复上述实验；(3)取样品1的滤液4管，每管lml，第一管滴加3滴质量浓度为1%的氢氧化钠-乙醇溶液，第二管滴加3滴质量浓度为2%的氢氧化钠-乙醇溶液，第三管滴加3滴质量浓度为3%的氢氧化钠乙醇溶液，第四管滴加3滴质量浓度为4%的氢氧化钠_乙醇溶液，摇匀，观察颜色变化；其他各样品分别代替样品1重复上述实验；(4)取样品1的滤液4管，每管lml，第一管滴加3滴质量浓度为1%的氢氧化钾_乙醇溶液，第二管滴加3滴质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液，第三管滴加3滴质量浓度为3%的氢氧化钾-乙醇溶液，第四管滴加3滴质量浓度为4%的氢氧化钾-乙醇溶液，摇匀，观察颜色变化；其他各样品分别代替样品1重复上述实验。表3-1不同浓度的氢氧化钠-水溶液对检测结果的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3-2不同浓度的氢氧化钾-水溶液对检测结果的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3-3不同浓度的氢氧化钠-乙醇溶液对检测结果的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3-4不同浓度的氢氧化钾-乙醇溶液对检测结果的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注表3-1至3-4中，表示颜色变化度，两个"+"以上表示肉眼可区分，表示无颜色变化。表3-1和表3-2表明，当硝苯地平、尼群地平和尼莫地平含量较少、溶液背景色较深时，即使在氢氧化钠-水溶液和氢氧化钾-水溶液的质量浓度高达40%的条件下，也不能观察到溶液的颜色变化。表3-3中，将指示剂替换为氢氧化钠-乙醇溶液，当其质量浓度为1%-4%时不能观察到溶液颜色变化；而表3-4中，将指示剂替换为氢氧化钾-乙醇溶液后，由于氢氧化钾的碱性较氢氧化钠强，同时受到溶剂效应(乙醇)的影响，当滴加的氢氧化钾-乙醇溶液质量浓度>2%时，即可观察到溶液的颜色变化，适用于检测中草药降压产品中是否掺杂硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。实验三:灵敏度研究1、实验试剂和仪器实施例l中的检测试剂盒2、样品样品l:称取lmg(起效剂量的10分之一)硝苯地平，加入lml体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解；样品2:称取lmg(起效剂量的IO分之一)尼群地平，加入lml体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解；样品3:称取lmg(起效剂量的10分之一)尼莫地平，加入lml体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解；样品4:称取0.5mg尼群地平和0.5mg硝苯地平(总量不超出各药物起效剂量的10分之一)，加入lml体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解；样品5:称取0.3mg尼莫地平、0.4mg尼群地平和0.3mg硝苯地平(总量不超出各药物起效剂量的10分之一)，加入lml体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解；3、实验方法往各样品中滴加3-5滴质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液，观察颜色变化。表4灵敏度研究<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表4可知，在各药物含量为其起效剂量的IO分之一时，本发明的方法亦可将其检测出来，因此，本发明适用于检测中草药降压产品中是否掺杂硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液；该试剂盒还包括10个5ml的带塞样品瓶、10个滤头和10支带刻度的注射器。取清脑降压片l片，破碎，加入相当于清脑降压片质量5倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤，滤液呈浅棕黄色，取lml滤液，滴加5滴试剂B，摇匀，溶液没有颜色变化，该结果与实际相符。实施例2检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为3%的氢氧化钾_乙醇溶液；该试剂盒还包括20个5ml的带塞样品瓶、20个滤头和20支带刻度的注射器。取复方丹参片l片，破碎，加入相当于复方丹参片质量6倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤，滤液呈浅棕黄色，取lml滤液，滴加3滴试剂B，摇匀，溶液没有颜色变化，该结果与实际相符。.实施例3检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液；该试剂盒还包括1个5ml的带塞样品瓶、1个滤头和1支带刻度的注射器。取脑立清胶囊1粒内容物，掺入lmg的硝苯地平，加入相当于脑立清胶囊和硝苯地平总质量7倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴加4滴试剂B，摇匀，溶液由浅黄色变成红棕色，该结果与实际相符。实施例4检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为3%的氢氧化钾-乙醇溶液；该试剂盒还包括5个5ml的带塞样品瓶、5个滤头和5支带刻度的注射器。取正天丸3粒，破碎，掺入5mg的尼群地平，加入相当于正天丸和尼群地平总质量8倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴加3滴试剂B，摇匀，溶液由浅棕黄色变成红棕色，该结果与实际相符。实施例5检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液；该试剂盒还包括10个5ml的带塞样品瓶、10个滤头和10支带刻度的注射器。取益脑胶囊l粒，其内容物惨入5mg的尼莫地平，加入相当于益脑胶囊和尼莫地平总质量9倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴加5滴试剂B，摇匀，溶液由浅黄色变成红棕色，该结果与实际相符。实施例6检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；11头和3支带刻度的注射器。取复方丹参片l片，破碎，掺入3mg的硝苯地平和6mg的尼群地平，加入相当于复方丹参片、硝苯地平和尼群地平总质量10倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴加3滴试剂B，摇匀，溶液由浅黄色变成红棕色，该结果与实际相符。实施例7检测试剂盒的组成为试剂A:体积比为5:l的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%的氢氧化钾-乙醇溶液；该试剂盒还包括8个5ml的带塞样品瓶、8个滤头和8支带刻度的注射器。取清热消炎宁胶囊1粒，其内容物掺入3mg的硝苯地平、7mg的尼莫地平和6mg的尼群地平，加入相当于清热消炎宁胶囊、硝苯地平、尼莫地平和尼群地平总质量8倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴加4滴试剂B，摇匀，溶液由浅黄色变成红棕色，该结果与实际相符。权利要求1、一种中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量5-10倍的体积比为5∶1的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取1ml步骤(1)所得的滤液，滴加3-5滴质量浓度为2％-3％的氢氧化钾-乙醇溶液，摇匀，观察颜色变化；若溶液变成红棕色，则表明样品中掺杂有二氢吡啶类降压化合物；所述的二氢吡啶类降压化合物为硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一种或两种以上。2、一种实施权利要求1所述快筛方法的专用试剂盒，该试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的丙酮-乙醇溶液；试剂B:质量浓度为2%-3%的氢氧化钾-乙醇溶液。3、根据权利要求2所述的专用试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括至少一个滤头、至少一支带刻度的注射器和至少一个带塞样品瓶。全文摘要本发明涉及中草药降压产品中掺杂二氢吡啶类降压化合物的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量5-10倍的体积比为5∶1的丙酮-乙醇溶液，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取1ml步骤(1)所得的滤液，滴加3-5滴质量浓度为2％-3％的氢氧化钾-乙醇溶液，摇匀，观察颜色变化；若溶液变成红棕色，则表明样品中掺杂有二氢吡啶类降压化合物；所述的二氢吡啶类降压化合物为硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一种或两种以上。本发明还公开了实施上述方法的专用试剂盒，该试剂盒包括体积比为5∶1的丙酮-乙醇溶液和质量浓度为2％-3％的氢氧化钾-乙醇溶液。本发明的快筛方法具有快速、成本低廉、操作简单等特点。文档编号G01N21/77GK101666757SQ20091019268公开日2010年3月10日申请日期2009年9月25日优先权日2009年9月25日发明者李泳雪,肖树雄,莫结丽,贾宜军申请人:广东省药品检验所