专利名称：异维a酸软胶丸的测试方法
技术领域：
本发明属于药品检测技术领域。具体涉及异维A酸软胶丸的溶出度和其中的抗氧 齐U、防腐剂的鉴别测试方法。
背景技术：
异维A酸软胶丸目前执行的质量标准分别为中国药典现行版(中国药典2005版 二部P216)，检测项目为性状、鉴别、含量、含量均勻度、崩解、微生物限度控制等；美国药 典现行版，检测项目为性状、鉴别、含量、含量均勻度、崩解、有关杂质、微生物限度控制等。由于异维A酸为一性状极不稳定的活性原料，遇光、热、空气等极易变性。故通过 专门的工艺，并加入一定的药用辅料，将其制成油状混悬液，能使其性状相对稳定。目前药 典收载的检测项目仅对药物本身的活性原料作相应的定性或定量检测，而所用的药用辅料 在贮藏期内对药物稳定性作用(如抗氧化作用、防腐作用等)均没有明确的界定，故使该产 品对抗氧剂，防腐剂使用的有效性，没有明确的检测方法和衡量标准。另外，中国药典和美国药典等目前收载的软胶丸质量标准，均未将溶出度测试列 入其中。药品作为一特殊商品，安全、有效是质量控制的首要保障。由于生物等效性，使体 外溶出度基本反映了体内生物利用度。基于此，溶出度作为药品质量的有效性和可控性的 重要标志之一，随着对药品质量标准的不断提高和完善，软胶丸剂的溶出度试验应作为检 测项目被列入质量标准当中。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究设计关于提高异维A酸软胶丸质量标准的 方法。本发明提供了异维A酸软胶丸之一溶出度测试的方法，本发明的方法基于下列原 理溶出度测试作为模拟人体体内生物利用度的一个有效途径，已被列入固体制剂质 量标准的主要检测项目之一，至今已有数十年历史。经过反复论证和临床实验，按照与人体 生物等效性相关的原理，选用一合理的试剂作为溶出度测试介质，至关重要。目前常用的介 质基本包括0. 1NHC1、0. INNaOH、醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液，水等。根据药代动力学原理，异维A酸胶丸主要通过胃肠道吸收，服用人群主要是18 30岁青年人居多。上述几种介质均能作为该实验的溶出介质。由于软胶丸内容物性状多为油状，在上述提及的几种介质中，均为水溶性介质。本 实验利用异维A酸软丸内容物仅为混悬物，其主要活性成分并非脂溶性这一特点，经过旋 转后的游离分散，使主要活性成分溶解于溶出介质中，经过稀释、定量，用紫外分光光度计测定吸收值，计算溶出度。本实验的最终目的，是对药物通过体外溶出度测试，将得到的结果与临床所做的 体内生物利用度作比较，求出两者相关性，确认服用的有效性和安全性。由于体内利用度实 验费用大，周期长，该实验不宜于长期、反复进行。而体外溶出度正是解决了这一难题。经 反复测试，基本能掌握药物的有效作用时间和用量，达到预期效果。本发明的异维A酸软胶丸溶出度的测试方法包括下列步骤 取异维A酸软胶丸6粒，用崩解时限测定项下的装置，每杯置1粒，以900ml 0. INHCl、0. IN氢氧化钠或纯化水为介质；测试温度为37. 0°C 士 1°C ；40 45分钟时，立即 取溶出液20ml经0. 45um的膜滤过，冷却至室温。精密量取续滤液5ml，用0. lmol/LHCl、 0. lmol/L氢氧化钠或纯化水稀释成25m 1 (IOmg规格)；精密量取续滤液5ml，用0. lmol/L HCl、0. lmol/L氢氧化钠或纯化水稀释成50ml (20mg规格)；对照液精密称取异维A酸对照品10mg，用0. lmol/LHCl,0. lmol/L氢氧化钠或纯 化水溶解并稀释50ml ；精密量取2ml，用0. lmol/LHCl,0. lmol/L氢氧化钠或纯化水稀释成 200ml，按照分光光度法检测，在343nm的波长处分别测定吸收度，计算出每丸的溶出量。应 大于标示量的75%。本发明的另一目的是提供了异维A酸软胶丸中抗氧剂，防腐剂的鉴别测试方法。该软胶丸剂主要由两部分组成内容物为油状混悬物，外层为胶皮。由于胶皮主要 原料为明胶。鉴于明胶原料的特殊性，因而在胶液内加入微量防腐剂(< 0. 04% )，以防止 在贮藏期间引起生物变性。异维A酸软胶丸的内容物中主要活性成分异维A酸性状极不稳 定，在贮藏期内常常发生含量下降和有关杂质超标等质量问题。故本发明人在药液内添加 微量的抗氧剂(< 0. 008% )，用以保持活性成分的稳定性。目前执行的软胶丸剂质量标准中，均未将抗氧剂、防腐剂的鉴别列入，企业在产品 最终检验中，也未将此项作为监控项目。但在制剂制备中，药物内添加的微量辅料成分究竟 是否被破坏，没有明确界定，尤其是在药品贮藏期内，防腐剂、抗氧剂的有效性和延续性，应 需得到确认。本发明提供的异维A酸软胶丸中抗氧剂的鉴别测试方法包括下列步骤(1)系统适用性条件用DB-I毛细管柱(0. 25mmX30mX0. 25 μ m)、HP-5毛细管柱 (0. 25mm*30m*0. 3μπι)或 DB-2 毛细管柱(0. 25mmX30mX0. 25μπι)，分流比为 10 1，尾吹 为40ml/min，柱温在50或100°C保持2 5分钟，然后以20 30°C /分钟的速率升到150 或200°C，保持3 5分钟。(2)对照液的制备称取抗氧剂40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶 解并稀释至刻度，精密吸取1ml，至IOml容量瓶中，并稀释至刻度。(3)供试液的制备取本品20粒，剪开，去壳后，内容物放入具塞锥形瓶中，加IOml 甲醇、乙醇或正己烷，超声20分钟，静置，取上清液，即得。(4)测定法取对照液和供试液各1 μ 1，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试液 中抗氧剂的保留时间应分别与对照液中抗氧剂的保留时间一致。所述的抗氧剂为叔丁基对羟基茴香醚或2. 6- 二叔丁基对甲酚。本发明的异维A酸软胶丸中防腐剂的鉴别测试方法包括下列步骤(1)系统适用性条件用DB-I毛细管柱(0. 25mmX30mX0. 25 μ m)、HP-5毛细管柱 (0. 25mm*30m*0. 3μπι)或 DB-2 毛细管柱(0. 25mmX30mX0. 25μπι)，分流比为 10 1，尾吹为40ml/min，柱温在50或100°C保持2 5分钟，然后以20 30°C /分钟的速率升到150 或200，保持3 5分钟。(2)对照液的制备称取防腐剂40mg，置IOOml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷溶解 并稀释至刻度，精密吸取1ml，至IOml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷稀释至刻度。
(3)供试液的制备取本品20粒，剪开，去壳后，内容物放入具塞锥形瓶中，加IOml 甲醇、乙醇、正己烷，超声20分钟，静置，取上清液，即得。(4)测定法取对照液和供试液各1 μ 1，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试液 中防腐剂的保留时间应分别与对照液中防腐剂的保留时间一致。所述的防腐剂为山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯或苯甲酸钠。本发明提供的异维A酸软胶丸溶出度和其中的抗氧剂、防腐剂鉴别测试方法，在 药典规定的基础上，提高了异维A酸软胶丸剂的质量标准，为产品的质量控制提供保障，有 利于对产品稳定性的监测，有较大的实用价值。在本发明的检测产品中，异维A酸软胶丸有IOmg和20mg两个规格，每粒软胶丸的 内容物重量均为0. 25g，本发明在检测中样品均以“粒”表示。
具体实施例方式实例1溶出度测试实验步骤实验用仪器岛津紫外分光光度仪实验用对照品异维A酸对照品实验用样品本公司生产的异维A酸胶丸6粒实验用试剂二氯甲烷、正己烷、NaOH、HCl等方法一、取异维A酸软胶丸6粒，用崩解时限测定法下的装置，每杯置1粒；以 900ml 0. INHCl为介质；测试温度为37. 0°C 士 1°C ;40分钟时，立即取溶出液20ml经0. 45um 的膜滤过，冷却至室温。精密量取滤液5ml，用0. lmol/LHCl稀释成25ml (IOmg规格)；精密 量取续滤液5ml，用0. lmol/L HCl稀释成50ml (20mg规格)；对照液精密称取异维A酸对照品10mg，用0. lmol/LHCl溶解并稀释50ml ；精密量 取2ml，用0. lmol/LHCl稀释成200ml，按分光光度法，在343nm的波长处分别测定吸收度， 计算出每丸的溶出量。应大于标示量的75%。方法二、取异维A酸软胶丸6粒，用崩解时限测定法下的装置，每杯置1粒；以 900ml 0. IN氢氧化钠为介质；测试温度为37. 0°C 士 1°C ；45分钟时，立即取溶出液20ml经 0. 45um的膜滤过，冷却至室温。精密量取滤液5ml，用0. lmol/L氢氧化钠稀释成25ml (IOmg 规格)；精密量取续滤液5ml，用0. lmol/L氢氧化钠稀释成50ml (20mg规格)；对照液精密称取异维A酸对照品10mg，用0. lmol/L氢氧化钠溶解并稀释50ml ； 精密量取2ml，用0. lmol/L氢氧化钠稀释成200ml，按分光光度法，在343nm的波长处分别 测定吸收度，计算出每丸的溶出量。应大于标示量的75%。方法三、取异维A酸软胶丸6粒，用崩解时限测定法下的装置，每杯置1粒；以 900ml纯化水为介质；测试温度为37. 0°C 士 1°C ;45分钟时，立即取溶出液20ml经0. 45um 的膜滤过，冷却至室温。精密量取滤液5ml，用纯化水稀释成25ml (IOmg规格)；精密量取续 滤液5ml，用纯化水稀释成50ml (20mg规格)；。
对照液精密称取异维A酸对照品10mg，用纯化水溶解并稀释50ml ；精密量取 2ml，用纯化水稀释成200ml，按分光光度法，在343nm的波长处分别测定吸收度，计算出每 丸的溶出量。应大于标示量的75%。实例2抗氧剂叔丁基对羟基茴香醚鉴别测试实验步骤实验用仪器岛津气相色谱仪实验用对照品抗氧剂叔丁基对羟基茴香醚对照品40mg实验用样品本公司生产的异维A酸胶丸20粒实验用试剂甲醇、乙醇、正己烷等方法一供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至量具塞玻璃容器内，加甲醇15ml，超声溶解离心，静置，取上清液，即得。色谱系统色谱柱型号DB-I (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升温第一阶段100°C保持4分钟第二阶段100°C 200°C升温速率为30°C /s第三阶段200°C保持5分钟分流比10 1方法二 供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至具塞玻璃容器内，加正己烷 20ml，45°C水溶解，放至高温，即得。色谱系统色谱柱型号HP-5 (0. 25mm*30m*0. 3 μ m)程序升温第一阶段50°C保持5分钟第二阶段50°C 150°C升温速率为30°C /s第三阶段150°C保持3分钟分流比10 1方法三供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至具塞玻璃容器内，加乙醇 30ml，60°C水溶解，放至高温，即得。色谱系统色谱柱型号DB-2 (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升温第一阶段100°C保持3分钟第二阶段100°C 200°C升温速率为20°C /s第三阶段200°C保持5分钟分流比10 1实验结果溶出度测试结果> 75%/30min抗氧剂鉴定结果供试液中抗氧剂的保留时间分别与对照液中抗氧剂的保留时间一致。实例3方法同实例2，抗氧剂替换为2. 6- 二叔丁基对甲酚。实例4防腐剂山梨酸钾鉴别测试实验步骤实验用仪器岛津气相色谱仪实验用对照品防腐剂山梨酸钾对照品40mg实验用样品本公司生产的异维A酸胶丸20粒
实验用试剂甲醇、乙醇、正己烷等方法一供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至量具塞玻璃容器内，加甲醇15ml，超声溶解离心，静置，取上清液，即得。色谱系统色谱柱型号DB-I (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升温第一阶段100°C保持4分钟第二阶段100°C 200°C升温速率为30°C /s第三阶段200°C保持5分钟分流比10 1方法二 供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至具塞玻璃容器内，加正己烷 20ml，45°C水溶解，放至高温，即得。色谱系统色谱柱型号HP-5 (0. 25mm*30m*0. 3 μ m)程序升温第一阶段50°C保持5分钟第二阶段50°C 150°C升温速率为30°C /s第三阶段150°C保持3分钟分流比10 1方法三供试品制备取样品20粒，剪开，取内容物至具塞玻璃容器内，加乙醇 30ml，60°C水溶解，放至高温，即得。色谱系统色谱柱型号DB-2 (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升温第一阶段100°C保持3分钟第二阶段100°C 200°C升温速率为20°C /s第三阶段200°C保持5分钟分流比10 1实验结果溶出度测试结果> 75%/30min防腐剂鉴定结果供试液中防腐剂的保留时间分别与对照液中防腐剂的保留时间一致。实例 5方法同实例4，防腐剂替换为对羟基苯甲酸乙酯。实例6方法同实例4，防腐剂替换为苯甲酸钠。
权利要求
一种异维A酸软胶丸中抗氧剂的测试方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)系统适用条件用DB-1毛细管柱0.25mm×30m×0.25μm、HP-5毛细管柱0.25mm*30m*0.3μm或DB-2毛细管柱0.25mm×30m×0.25μm；分流比为10∶1；尾吹为40ml/min，柱温在50或100℃保持2～5分钟；然后以20～30℃/分钟的速率升到150或200℃，保持3～5分钟；(2)对照液的制备称取抗氧剂40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并稀释至刻度，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，并稀释至刻度；(3)供试液的制备取本品20粒，剪开，去壳，内容物放入具塞锥形瓶中，加10ml甲醇、乙醇或正己烷，超声20分钟，静置，取上清液，即得；(4)测定方法取对照液和供试液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试液中抗氧剂的保留时间应分别与对照液中抗氧剂的保留时间一致。
2.根据权利要求1所述的一种异维A酸软胶丸中抗氧剂的测试方法，其特征在于其中 所述的抗氧剂为叔丁基对羟基茴香醚或2. 6- 二叔丁基对甲酚。
3.—种异维A酸软胶丸中防腐剂的测试方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)系统适用条件用DB-I毛细管柱0.25mmX30mX0. 25 μ m、HP-5毛细管柱 0.25mm*30m*0.3ym 或 DB-2 毛细管柱 0.25mmX30mX0.25ym;分流比为 10 1 尾吹为 40ml/min ；柱温在50或100°C保持2 5分钟，然后以20 30°C /分钟的速率升到150或 200°C，保持3 5分钟；(2)对照液的制备称取防腐剂40mg，置IOOml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并 稀释至刻度，精密吸取1ml，置IOml容量瓶中，并稀释至刻度；⑶供试液的制备取本品20粒，剪开，去壳，内容物放入具塞锥形瓶中，加IOml甲醇、乙 醇或正己烷，超声20分钟，静置，取上清液，即得；(4)测定方法取对照液和供试液各Iy 1，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试液中 防腐剂的保留时间应分别与对照液中防腐剂的保留时间一致。
4.根据权利要求3所述的一种异维A酸软胶丸中防腐剂的测试方法，其特征在于其中 所述的防腐剂为山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯或苯甲酸钠。
全文摘要
本发明提供了异维A酸软胶丸的溶出度和其中的抗氧剂、防腐剂的鉴别测试方法。通过本发明方法提高了异维A酸软胶丸的质量标准，有利于监控产品起始期和有效贮藏期内异维A酸软胶丸的稳定性，具有较大的应用价值。
文档编号G01N21/31GK101846659SQ20091020511
公开日2010年9月29日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者朱海芒 申请人:上海信谊万象药业股份有限公司