专利名称：：血细胞分析仪用试剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种医疗诊断仪器用试剂，具体涉及一种血细胞分析仪用试剂。
背景技术：
：血细胞分析是临床检验最常用项目，能检测20多项血液项目的病理性变化，对于抗生素的合理应用、各种贫血检查、血液病筛查、过敏疾病筛查等都有很大帮助；采用血细胞分析技术，可及时监测人体的身体状况，减少发病机率或控制病情。血细胞五分类技术是当前该领域最先进的分析技术，其分析系统由仪器和试剂组成。国外目前只有美国雅培、库尔特、法国ABX、日本西森美康等公司生产；国内厂商，仅见有深圳迈瑞公司报道有产品。如美国雅培公司推出的CELL-DYN3000、CELL-DYN3200、CELL-DYN3500和CELL-DYN3700血细胞分析仪在国内就存在较大的市场，但与该仪器配套使用的试剂国内则长期依赖进口，导致试剂价格偏高，不利于国内广大医院，特别是基层医院的推广和应用。为降低试剂的成本，国内已出现有自行研制出的该类试剂，如公开号为CN1424582的中国发明专利，公开了一种雅培3700全自动五分类血细胞分析仪试剂，它包括稀释液、清洗剂、溶血剂和鞘液四种配套试剂，其中稀释液的组成为=NaCllO20g/L、Na2S04515g/L、EDTA-K20.10.5g/L、甲基脲0.51.5g/L,噻唑啉酮0.30.8g/L,哌嗪烷基磺酸14g/L；清洗剂的组成为=NaCllO20g/L、Na2S04518g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.20.7g/L、磷酸钠0.71.4g/L、哌嗪烷基磺酸310g/L、噻唑啉酮0.20.8g/L，溶血剂的组成为季胺盐3070g/L、KCN0.10.5g/L、TritonX-1000.51.5ml/L、乙醇3060ml/L；鞘液的组成为氨基甲烷1.2g/L，聚氧乙烯醚96mg/L，甲基脲4.5g/L，苯醚6g/L，噻唑啉酮8.8g/L。该发明血细胞分析仪试剂较国外进口试剂成本低，具有较好的推广使用价值；但是该试剂中溶血剂中仍含有剧毒化合物氰化钾，不仅危害操作人员的身体健康，同时对环境造成污染。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种成本低廉、试剂性能优越且不含氰化物的适于五分类全自动血细胞分析仪用试剂。为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成，其中所述稀释液的组成及含量为硼酸212g/L、硼砂210g/L、氯化钠515g/L、硫酸钠820g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.10.5g/L、甲基脲0.52.Og/L、盐酸羟胺39g/L、氯化钾0.21.Og/L；所述溶血剂的组成及含量为季铵盐1025g/L、二乙醇胺15ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)0.52ml/L、异丙醇0.31.5ml/L、氯化钠15g/L；所述鞘液的组成及含量为氨基甲烷110g/L、甲基脲0.1lg/L、芳香醇115ml/L、乙醇515ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.5g/L；所述清洗液的组成及含量为硼酸212g/L、硼砂215g/L、氯化钠210g/L、硫酸钠410g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.52g/L、次氯酸钠0.52g/L。上述稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液的组成优选如下稀释液的组成及含量为硼酸8.512g/L、硼砂36g/L、氯化钠510g/L、硫酸钠812g/L、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)0.10.3g/L、甲基脲0.51.Og/L、盐酸羟胺36g/L、氯化钾0.20.8g/L；溶血剂的组成及含量为季铵盐1525g/L、二乙醇胺13ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-IOO)O.5lml/L、异丙醇0.3lml/L、氯化钠35g/L；鞘液的组成及含量为氨基甲烷15g/L、甲基脲0.10.5g/L、芳香醇110ml/L、乙醇510ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.3g/L；清洗液的组成及含量为硼酸712g/L、硼砂26g/L、氯化钠410g/L、硫酸钠48g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5lg/L、次氯酸钠0.51.5g/L。以上配方中，所述的鞘液中的芳香醇选自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一种或两种。鞘液中的聚氧乙烯月桂醚为聚氧乙烯月桂醚35(Brij35)。所述鞘液的渗透压为3580m0sm/kg。所述稀释液的渗透压为280350m0sm/kg。所述稀释液的pH值为6.58.0，具体可用盐酸来调。所述溶血剂的pH值为PH7.59.5，具体可用盐酸来调。所述鞘液的pH值为8.010.0，具体可用盐酸来调。所述清洗液的pH值为6.58.5，具体可用盐酸来调。与现有技术相比，本发明的优点在于1、改变国内五分类全自动血细胞分析仪用试剂长期依赖进口的现状，试剂由国内生产、销售，大大降低了其成本；2、试剂中的溶血剂为无氰溶血剂，不仅大大降低了对生产单位人员和实验操作者身体健康的损害，同时也避免了使用氰化物对环境造成的污染；3、该试剂适用于五分类全自动血细胞分析仪，尤其适用于美国雅培公司的Cell-Dyn3700/3500、Cell_Dyn3000、Cell_Dyn3200五分类全自动血细胞分析仪，本申请试剂的PH、电导率、渗透压等参数均符合进口Cell-Dyn3700/3500五分类全自动血细胞分析仪的测试要求；溶血剂A75tl测试达到ICSH标准；白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等与进口ABB0TTCELL-DYN3700/3500试剂相关系数均大于0.95；白细胞五分类图谱与进口试剂一致；4、该试剂在去除鞘液后也可适用于三分类血细胞分析仪；其中的溶血剂等也可用于其它系列的血液分析仪。图1为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTTCELL-DYN^3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT,CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTTCELL-DYN3700进行测试，所测的WBC项目的测试结果对比相关线性图；图2为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTTCELL-DYN-3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL_DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTTCELL-DYN3700进行测试，所测的RBC项目的测试结果对比相关线性图；图3为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTTCELL-DYN^3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL_DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTTCELL-DYN3700进行测试，所测的HGB项目的测试结果对比相关线性图；图4为本发明实施例2制得的试剂与原装进口的ABBOTTCELL-DYN-3000，3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本上ABBOTTCELL-DYN3700进行测试，所测的PLT项目的测试结果对比相关线性图。具体实施例方式下面以实施例对本发明作进一步说明。以下实施例中用到的试剂均为分析纯试剂。实施例1在常温和常压下，分别按以下表1中指定的各组分以常规方法配制稀释液、溶血齐U、鞘液和清洗液粗品，其中鞘液中的芳香醇为苯甲醇；配制所得的粗品分别用0.2μπι的纤维薄膜过滤，即得本发明所述的血细胞分析仪用试剂。实施例2分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用苯乙醇代替苯甲醇。实施例3分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚代替苯甲醇。实施例4分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯甲醇代替二苯醚。实施例5分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用苯乙醇代替二苯醚。实施例6分别按以下表1中指定的各组分重复实施例3的方法，但用乙二醇苯醚代替二苯醚。实施例7分别按以下表1中指定的各组分重复实施例1的方法，但用二苯醚和乙二醇苯醚代替苯甲醇，其中二苯醚和乙二醇苯醚的体积比为11。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述表2中的数据表明，实施例1、2所制得的血细胞分析仪用试剂的测试结果与原装进口的美国ABBOTTCELL-DYN3000,3500and3700SystemsDILUENT、CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT,CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT、CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂的测试结果一致。对比实验例2将本发明实施例2制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂2)与原装进口的ABBOTTCELL-DYN3000,3500and3700SystemsDILUENT,CELL-DYN3500and3700SystemsDETERGENT、CELL-DYN3500and3700SystemsWIC/HgbLYSEREAGENT,CELL-DYN3000,3500and3700SystemsSHEATH试剂(简称试剂Α)对来自桂林市第二人民医院和桂林市妇女儿童医院的100例临床样本用ABBOTTCELL-DYN3700进行测试，测试结果如下表3所示，其中所测WBC、RBC、HGB和PLT项目的测试结果对比相关线性图分别如图1、2、3和4所示，其相关性R>0.95。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>对比实验例3本发明实施例3制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂3)、实施例4制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂4)、实施例5制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂5)和实施例6制得的血细胞分析仪用试剂(简称试剂6)的差别仅在于芳香醇的种类不同，为测试本发明所选用的四种芳香醇类物质对测试结果的影响，申请人分别用上述试剂3、4、5和6对同一支标本进行平行测试，所得结果如下表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上述测试结果表明，本发明试剂中鞘液所使用的四种芳香醇类物质对测试结果没有影响，都能够良好的反应出标本的实际情况。当然，本发明并不局限于这些实施例，只要是不违背本发明的主题思想，均应属于本发明的保护范围，如可以在试剂中加入本领域技术人员很容易想到的一些不影响本发明所述试剂性能的其它非必要物质，例如在稀释液中加入少量的叠氮钠，在溶血剂中加入少量的氟化钠，在清洗液中加入少量的TritonX-100等，应该视为在本发明的保护范围内。权利要求血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成，其特征在于所述稀释液的组成及含量为硼酸2～12g/L、硼砂2～10g/L、氯化钠5～15g/L、硫酸钠8～20g/L、乙二胺四乙酸二钾0.1～0.5g/L、甲基脲0.5～2.0g/L、盐酸羟胺3～9g/L、氯化钾0.2～1.0g/L；所述溶血剂的组成及含量为季铵盐10～25g/L、二乙醇胺1～5ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5～2ml/L、异丙醇0.3～1.5ml/L、氯化钠1～5g/L；所述鞘液的组成及含量为氨基甲烷1～10g/L、甲基脲0.1～1g/L、芳香醇1～15ml/L、乙醇5～15ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.1～0.5g/L；所述清洗液的组成及含量为硼酸2～12g/L、硼砂2～15g/L、氯化钠2～10g/L、硫酸钠4～10g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5～2g/L、次氯酸钠0.5～2g/L。2.根据权利要求1所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述稀释液的组成及含量为硼酸8.512g/L、硼砂36g/L、氯化钠510g/L、硫酸钠812g/L、乙二胺四乙酸二钾0.10.3g/L、甲基脲0.51.0g/L、盐酸羟胺36g/L、氯化钾0.20.8g/L；所述溶血剂的组成及含量为季铵盐1525g/L、二乙醇胺13ml/L、聚乙二醇辛基苯基醚0.5lml/L、异丙醇0.3lml/L、氯化钠35g/L；所述鞘液的组成及含量为氨基甲烷15g/L、甲基脲0.10.5g/L、芳香醇110ml/L、乙醇510ml/L、聚氧乙烯月桂醚0.10.3g/L；所述清洗液的组成及含量为硼酸712g/L、硼砂26g/L、氯化钠410g/L、硫酸钠48g/L、聚氧乙烯烃基苯乙醚0.5lg/L、次氯酸钠0.51.5g/L。3.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于鞘液中的芳香醇选自二苯醚、苯甲醇、苯乙醇和乙二醇苯醚中的一种或两种。4.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于鞘液中的聚氧乙烯月桂醚为聚氧乙烯月桂醚35。5.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述鞘液的渗透压为3580m0sm/kgo6.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述稀释液的渗透压为280350m0sm/kgo7.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述稀释液的PH值为6.58.0。8.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述溶血剂的PH值为PH7.59.5。9.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述鞘液的PH值为8·O10.O010.根据权利要求1或2所述的血细胞分析仪用试剂，其特征在于所述清洗液的ρΗ值为6.58.5。全文摘要本发明公开了一种血细胞分析仪用试剂，由稀释液、溶血剂、鞘液和清洗液组成。与现有技术相比，本发明的优点在于改变国内血细胞分析仪用试剂长期依赖进口的现状，由国内生产、销售，大大降低了其生产成本；试剂中的溶血剂为无氰溶血剂，不仅大大降低了对生产单位人员和实验操作者身体健康的损害，同时也避免了使用氰化物对环境造成的污染；该试剂尤其适用于美国雅培公司的CD3700/3500、CD3000、CD3200五分类全自动血细胞分析仪溶血剂A750测试达到ICSH标准；白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等与进口ABBOTTCELL-DYN3700/3500试剂相关系数均大于0.95。文档编号G01N33/50GK101819199SQ20101016658公开日2010年9月1日申请日期2010年5月8日优先权日2010年5月8日发明者余颖玫,刘军,陈彦华,陈达辉,黄河清申请人:桂林市朗道诊断用品有限公司