专利名称：：三分类全血质控物模拟物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种三分类全血质控物模拟物及其制备方法。
背景技术：
：全血质控物是临床检验领域用于实验内和实验室间质量评价的重要试剂之一，国外质控物性能稳定，目前国内相关产品主要依靠进口，通过对国内外相关文献和专利检索，国外主要采用鸟类有核红细胞、胶乳、花粉、微生物颗粒和蹄科动物红细胞或裸核等模拟白细胞和血小板，采用人血红细胞模拟质控物的红细胞。由于国内对血源的特殊政策，血源问题急待解决。由于地域不同，相同物种的血液学特性有所偏差，就地取材将节约巨大的成本，而且现有质控物也存在一些缺陷，猪血小板模拟人血小板制备困难，容易聚集；羊红细胞固定后添加容易出现假白细胞干扰；人红细胞在加工处理过程遭受一定的打击，效期不长。本着来源易获，快捷价廉，效果优良的原则，寻找一条更加优化的制备方案迫在眉睫。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种三分类全血质控物模拟物及其制备方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是三分类全血质控物模拟物的制备方法，该方法包括红细胞模拟物的制备、白细胞和血小板模拟物的制备(1)、红细胞模拟物的制备a、收集家畜或浆站废弃血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-N&50150g/L，柠檬酸钠2040g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂血=1:1020进行抗凝处理；b、采用洗涤液洗涤步骤a处理后的家畜或浆站废弃血，通过离心法去除血浆和白细胞层制备红细胞，所制备红细胞的纯度为99100%;c、将步骤b制备的红细胞采用半固定液半固定后用红细胞保存液保存即为红细胞模拟物；(2)白细胞和血小板模拟物的制备d、抽取鱼类的血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-Na250150g/L，柠檬酸钠2040g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂血=1:1020进行抗凝处理；e、将步骤d抽取的鱼类血液与洗涤液混合离心洗涤去除血浆；f、将步骤e洗涤后的血液置入固定液中固定；g、将步骤f固定后血液体置于红细胞保存液中保存即为白细胞和血小板模拟物；h、将红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物分别混悬于细胞悬液中调节其浓度作单项质控物使用，或将红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物组合混悬于细胞悬液中调节其浓度作全血质控物使用。本发明用鱼类血液模拟人白细胞和血小板，家畜红细胞和浆站废弃血红细胞模拟人血红细胞，模拟人血样本实际的直方图分布，采用本发明的细胞悬液配方保存期限更长，在实验过程中发现采用鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼等红细胞都可进行模拟操作，通过固定剂处理可达到良好的质控效果；该方法抗凝剂的高压消毒灭菌按照常规试验的高压消毒灭菌即可。步骤a所述家畜血和步骤d所述鱼类血是通过心脏穿刺取得的新鲜血液，步骤a所述浆站废弃血是浆站采浆后废弃管道内的新鲜血。步骤b所述洗涤液是渗透压为01000m0sm/kg的枸橼酸缓冲液，该枸橼酸缓冲液的成份为(/L):枸橼酸0.llg/L，枸橼酸钠0.33g/L，磷酸二氢钠0.l3g/L，氯化钠0.320g/L;所述步骤b采用上述成分配制枸橼酸缓冲液，调节PH为6.08.0，高压消毒灭菌，按血枸橼酸缓冲=1:320的体积配比，离心洗涤。步骤b所述红细胞纯度为99.97100%。步骤c所述半固定液是含醛类、醇类的复合物，该复合物成分为醛类终浓度为0.0010.03%，醇类终浓度为0.0050.1%，土温-20或土温-80，终浓度为0.001%0.05%;所述醛类选自戊二醛、甲醛、多聚甲醛的一种或多种，醇类选自乙醇、山梨醇的一种或多种。步骤c所述红细胞保养液的渗透压为200400m0sm/kg，其成份为(/U:枸橼酸0.1lg/L，枸橼酸钠0.33g/L，磷酸二氢钠0.l3g/L，氯化钠0.320g/L，葡萄糖2.010g/L，腺嘌呤0.3lg/L，甘露醇10.020.0g/L，庆大霉素1001000X，青霉素1001000X;红细胞保养液按上述成分配制红细胞保养液，过滤灭菌。步骤f所述固定液是醛类的复合物，其终浓度为0.11.0%，醛类选自戊二醛、甲醛、多聚甲醛的一种或多种。步骤h所述细胞悬液的成份为枸橼酸1.05.0g/L，枸橼酸钠10.030.Og/L，磷酸二氢钠1.05.Og/L，葡萄糖1050g/L，腺嘌呤O.1lg/L，庆大霉素1001000X，青霉素1001000X;细胞悬液按上述成分配制，过滤灭菌，细胞悬液与步骤g制备的白细胞和血小板模拟物的体积比为3:530。所述鱼类选自鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼的一种或多种。一种按照上述三分类全血质控物模拟物的制备方法制备的三分类全血质控物，白细胞和血小板模拟物由鱼类的血液固定后获得，其中血液中红细胞体积在10500fl;红细胞模拟物由家畜和浆站废弃血半固定后获得，家畜和人血液红细胞体积分别为4862fl、84103fl。综上，本发明的有益效果是本发明用鱼类血液模拟人白细胞和血小板，家畜红细胞和桨站废弃血红细胞模拟人血红细胞，模拟人血样本实际的直方图分布，采用本发明的细胞悬液配方保存期限更长，在实验过程中发现采用鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼等红细胞都可进行模拟操作，通过固定剂处理可达到良好的质控效果。图1为本发明全血质控物模拟物的制备方法的流程图。具体实施例方式如图1所示，本发明的三分类全血质控物模拟物的制备方法包括红细胞模拟物的制备、白细胞和血小板模拟物的制备(1)、红细胞模拟物的制备a、收集家畜或浆站废弃血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-Na250150g/L，柠檬酸钠2040g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂血二1:1020进行抗凝处理；b、采用洗涤液洗涤步骤a处理后的家畜或浆站废弃血，通过离心法去除血浆和白细胞层制备红细胞，所制备红细胞的纯度为99100%;C、将步骤b制备的红细胞采用半固定液半固定后用红细胞保存液保存即为红细胞模拟物；(2)白细胞和血小板模拟物的制备d、抽取鱼类的血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-Na250150g/L，柠檬酸钠2040g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂血=1:1020进行抗凝处理；e、将步骤d抽取的鱼类血液与洗涤液混合离心洗涤去除血浆；f、将步骤e洗涤后的血液置入固定液中固定；g、将步骤f固定后血液体置于红细胞保存液中保存即为白细胞和血小板模拟物；h、将红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物分别混悬于细胞悬液中调节其浓度作单项质控物使用，或将红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物组合混悬于细胞悬液中调节其浓度作全血质控物使用。步骤a、d所述鱼类和家畜血是通过心脏穿刺获取的新鲜血液，而浆站废弃血是浆站采浆后废弃管道内的新鲜血。最佳实例中，所用抗凝剂为8gEDTA-Na2、3g柠檬酸钠溶解于100ml纯化水中制成，按抗凝剂血=1:10抗凝处理。步骤b所述洗涤液为不同渗透压的枸橼酸缓冲液或其他液体，洗涤时按血洗涤液=13:510的比例混合后，置于离心机离心洗涤35次。最佳实例中，所用洗涤液体为0.5g枸橼酸、2g枸橼酸钠、1.5g磷酸二氢钠、6g氯化钠溶解于100ml纯化水配制而成，洗涤时按血洗涤液=1:5的比例混合后，置于离心机离心洗涤3次。歩骤C所述半固定为在08"C半固定保存，室温放置会加速其破坏。半固定剂终浓度为戊二醛0.001%0.03%;乙醇0.005%0.1%;土温-200.001%0.05%。最佳实例中，在4。C半固定保存，所用半固定剂终浓度为戊二醛O.01%、乙醇0.005%、土温-200.01%。红细胞保养液为0.5g枸橼酸、2g枸櫞酸钠、lg磷酸二氢钠、10g葡萄糖、0.lg腺嘌呤、5g氯化钠、20g甘露醇、IOOOX庆大霉素、1000X青霉素溶解于1000ml纯化水配制而成，按血液细胞悬液为l:5混合制备。步骤f所述固定为在室温25度，固定3小时，随固定温度不同，固定时间也有所改变，一般随温度降低，时间延长。固定剂终浓度为0.1%1.0%戊二醛。固定后，用细胞保存液或磷酸缓冲液洗涤35次。最佳实例中，所用固定剂终浓度为0.35%戊二醛。步骤h所述根据要求用细胞悬液调节各血液有形成份浓度。最佳实例中，细胞悬液成份为3g枸橼酸、20g枸橼酸钠、2g磷酸二氢钠、30g葡萄糖、0.lg腺嘌呤、IOOOX庆大霉素、IOOOX青霉素溶解于1000ml纯化水配制而成，按血液细胞悬液为1:10混合制备。按上述实例采集健康动物血，与上述液体混合，混匀分装，以SYSMEXF-820血球仪为例评价其开瓶稳定性，具体结果如下表l:开瓶稳定性观察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以上数据显示15天开瓶稳定性变异度较小，符合美国CLIA'88要求。本发明还通过以下技术方案进一步实现。制备一种三分类全血质控物模拟物，模拟物由鱼类、家畜，废弃血处理后组合而成。所述的各种鱼血红细胞的体积大小覆盖白细胞三分类范围，抽取血液，去除血浆和白细胞层，经多次洗涤，于细胞保存液中保存，同时采集纯化猪血红细胞和浆站废弃血红细胞半固定处理，保存。根据需要进行浓度调节和组合制备单项质控物和或全血质控物。与现有技术相比，本发明用一些特定的鱼类血液模拟人白细胞和血小板，猪血红细胞和浆站废弃血红细胞模拟人血红细胞，模拟人血样本实际的直方图分布，采用特殊的细胞悬液保存期限更长，在实验过程中发现采用鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼等红细胞都可进行模拟操作，通过固定剂处理可达到良好的质控效果。权利要求1.三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，该方法包括红细胞模拟物的制备、白细胞和血小板模拟物的制备(1)、红细胞模拟物的制备a、收集家畜或浆站废弃血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-Na250～150g/L，柠檬酸钠20～40g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂∶血＝1∶10～20进行抗凝处理；b、采用洗涤液洗涤步骤a处理后的家畜或浆站废弃血，通过离心法去除血浆和白细胞层制备红细胞，所制备红细胞的纯度为99～100％；c、将步骤b制备的红细胞采用半固定液半固定后用红细胞保存液保存即为红细胞模拟物；(2)白细胞和血小板模拟物的制备d、抽取鱼类的血并采用抗凝剂处理，所述抗凝剂组分为EDTA-Na250～150g/L，柠檬酸钠20～40g/L，抗凝剂按上述组分配制后高压消毒灭菌，体积比按抗凝剂∶血＝1∶10～20进行抗凝处理；e、将步骤d抽取的鱼类血液与洗涤液混合离心洗涤去除血浆；f、将步骤e洗涤后的血液置入固定液中固定；g、将步骤f固定后血液体置于红细胞保存液中保存即为白细胞和血小板模拟物；h、分别调节红细胞模拟物浓度、将白细胞和血小板模拟物分别混悬于细胞悬液中调节其浓度可作单项质控物使用，或将红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物组合作全血质控物使用。2、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤a所述家畜血和步骤d所述鱼类血是通过心脏穿刺取得的新鲜血液，步骤a所述浆站废弃血是浆站采浆后废弃管道内的新鲜血。3、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤b所述洗涤液是渗透压为01000m0sm/kg的枸橼酸缓冲液，该枸橼酸缓冲液的成份为(/U:枸橼酸0.1lg/L，枸橼酸钠O.33g/L，磷酸二氢钠O.13g/L，氯化钠0.320g/L;所述步骤b采用上述成分配制枸橼酸缓冲液，调节PH为6.08.0，高压消毒灭菌，按血枸橼酸缓冲=1:320的体积配比，离心洗涤。4、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤b所述红细胞纯度为99.97100X。5、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤c所述半固定液是含醛类、醇类的复合物，该复合物成分为醛类终浓度为0.0010.03%，醇类终浓度为0.0050.1%，土温-20或土温-80，终浓度为0.001%0.05%;所述醛类选自戊二醛、甲醛、多聚甲醛的一种或多种，醇类选自乙醇、山梨醇的一种或多种。6、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤c所述红细胞保养液的渗透压为200400m0sm/kg，其成份为(/L):枸橼酸0.1lg/L，枸橡酸钠0.33g/L，磷酸二氢钠0.13g/L，氯化钠0.320g/L，葡萄糖2.010g/L，腺嘌呤0.31g/L，甘露醇10.020.0g/L，庆大霉素1001000X，青霉素1001000X;红细胞保养液按上述成分配制红细胞保养液，过滤灭菌。7、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于步骤f所述固定液是醛类的复合物，其终浓度为O.l1.0%，醛类选自戊二醛、甲醛、多聚甲醛的一种或多种。8、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，步骤h所述细胞悬液的成份为枸橼酸1.05.0g/L，枸橼酸钠10.030.Og/L，磷酸二氢钠1.05.0g/L，葡萄糖1050g/L，腺嘌呤0.1lg/L，庆大霉素1001000X，青霉素1001000X;细胞悬液按上述成分配制，过滤灭菌，细胞悬液与步骤g制备的白细胞和血小板模拟物的体积比为3:530。9、根据权利要求1所述的三分类全血质控物模拟物的制备方法，其特征在于，所述鱼类选自鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼的一种或多种。10、按照权利要求1所述三分类全血质控物模拟物的制备方法制备的三分类全血质控物，其特征在于，白细胞和血小板模拟物由鱼类的血液固定后获得，其中血液中红细胞体积在10500fl;红细胞模拟物由家畜和浆站废弃血半固定后获得，家畜和人血液红细胞体积分别为4862fl、84103fl。全文摘要本发明涉及一种三分类全血质控物模拟物的制备方法及其制得的血型检测试剂盒。本发明方法包括红细胞模拟物的制备及白细胞和血小板模拟物的制备，制备的红细胞模拟物、白细胞和血小板模拟物调节浓度将细胞颗粒混悬于细胞悬液中作单项质控物使用，组合成全血质控物使用。本发明目的在于解决各种细胞的来源问题并提出三分类全血质控物的制备方法，本发明用鱼类血液模拟人白细胞和血小板，家畜红细胞和浆站废弃血红细胞模拟人血红细胞，模拟人血样本实际的直方图分布，采用本发明的细胞悬液配方保存期限更长，在实验过程中发现采用鲢鱼、草鱼、鲤鱼、鳄鱼等红细胞都可进行模拟操作，通过固定剂处理可达到良好的质控效果。文档编号G01N33/96GK101285841SQ20081004429公开日2008年10月15日申请日期2008年4月25日优先权日2008年4月25日发明者恒李,慧杨,杨卫平,俊王,王保宁申请人:四川省迈克科技有限责任公司