专利名称：梨果实加工能力评价的生理标记方法
技术领域：
本发明提供了梨果实加工能力评价的生理标记，属于食品加工、果树育种学领域， 此标记可以用于选育抗褐变、适加工梨品种亲本的选择、后代评价筛选及在对梨防褐变技 术的开发。
背景技术：
梨果实含有多种维生素、矿物质、有机酸、糖类等物质，营养丰富，风味甘美，是深 受消费者喜爱的鲜食水果。近年来随着国内、国际市场的变化，消费者对各式各样梨果加工 品如梨果汁、梨干等的消费需求也呈现出越来越旺盛的态势。此外，由于梨果实含有一定的 酚类等活性物质，兼具有一定的保健功能，自古以来梨也常作为功能性食品被用来预防和 治疗人体咳嗽等引起的炎症反应等。但对于加工用途的梨果来说，酚类含量过高并不十分 有利，果实中多种酚类物质的酶促褐变常常导致梨果加工过程中果肉及果汁的褐变，严重 降低梨果加工性能、加工品品质及经济效益。因此，对于梨果实酶促褐变机理的研究将有助 于为抗褐变适加工品种的选育以及相应的防褐变技术开发提供理论依据。目前，对于梨果实加工过程中酶促褐变的研究都是从多酚氧化酶(PPO)这一方面 来考虑，常常采用高温灭杀等技术措施使PPO失活，这样虽可以在一定程度上减轻果实加 工前期的褐变程度，但由于PPO活性的残存，以及褐变底物一酚类物质的大量存在，在后 期加工过程中梨果的褐变仍然不可避免。而从酚类物质的含量和种类角度来进行抗褐变研 究并未得到重视。最近，本课题组应用灰色关联分析，通过相关的统计方法理清酶促褐变系 统中各因素间的主次关系，从酚类物质这一角度找出影响梨果褐变的主导因素一总酚含 量及绿原酸含量，使得能够通过对这两个生理指标的快速分析，在抗褐变、适加工梨品种选 育工作中有效地选择亲本组合，后代评价筛选及梨果加工过程中防褐变技术的开发成为可 能。
发明内容
技术问题本发明的目的是为抗褐变、适加工梨品种选育工作中亲本的选择、后代的评价筛 选及梨果防褐变技术的开发提供有效的生理标记，通过快速检测不同品种梨果实中总酚及 绿原酸含量的差异，确定所选品种的抗褐变和适加工能力，并为梨果防褐变技术的开发提 供理论依据。技术方案梨果实加工能力的一种生理标记方法，其特征在于1) FC法测定果实总酚含量称取果肉5g，用80mL蒸馏水转入IOOmL容量瓶中，至100°C沸水浴中保温30min， 取出，冷却，定容，过滤，滤液为备用提取液；吸取1. OmL样品提取液和浓度为10、20、30、40、50 μ g/mL的没食子酸标准溶液各1.OmL,分别加入5. OmL水、ImLFC显色剂和3mL质量比7. 5%的碳酸钠溶液，摇勻，显色2h， 在765nm波长下测定吸光度，得到不同浓度的没食子酸标准曲线，根据没食子酸标准曲线 求出样品溶液中的用没食子酸定量的总酚含量(yg/mL)；其中FC显色剂制备方法为，称取5. Og钨酸钠和1.25g钼酸钠，用35mL蒸馏水溶 于IOOmL回流瓶中，加入2. 5mL磷酸和5. OmL盐酸，混勻，微沸回流2h，加入7. 5g硫酸锂、
2.5mL蒸馏水和数滴溴水，开口沸腾约15min，冷却，定容至50mL，过滤，置棕色瓶中保存备 用，使用时加入1倍蒸馏水稀释；没食子酸标准溶液制备方法为，称取0. Ig没食子酸，用蒸馏水加热溶解，定容至 IOOmL,此溶液质量浓度为1.0g/L ；分别吸取此溶液l、2、3、4、5mL至IOOmL容量瓶中，用蒸 馏水定容至刻度，所得标准溶液的质量浓度分别为10、20、30、40、50μ g/mL ；2)绿原酸含量的HPLC测定取果肉100g，加入70%丙酮打浆，勻浆超声提取30min后真空抽滤提取清液，35°C 下旋转蒸发去除丙酮，用lmol/L的NaOH调pH至7.0，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取 3次，每次50mL,分离出酯相；剩下的水相用lmol/L的HCL调pH至2. 0，再分别用50mL的 乙酸乙酯萃取3次，合并酯相，酯相35°C下旋转蒸发，残渣溶于2ml甲醇中备用；绿原酸标准样品购于Sigma公司，用甲醇配制成25、50、100、200、400、800 μ g/mL 浓度标准液备用；高效液相色谱分析色谱柱C18柱150mmX4. 6mm, Φ 5 μ m ；流动相A 水，用磷酸 调 ρΗ3· 20 ；流动相 B 甲醇；柱温:30°C ；流速0. 6mL/min ；样品液或 25、50、100、200、400、 800 μ g/ml浓度绿原酸标准液经0. 45 μ m微孔过滤膜过滤后进色谱柱，进样量5 μ L ；检测 波长280nm ；线性梯度淋洗程序为时间min/流动相B的体积百分含量=0/2,3/2,4/25, 11/50，16/80，26/80，30/2，35/2 ；根据吸收峰面积和标准液的浓度计算得到不同浓度绿原 酸标准曲线，并根据待测样品中酚类组分在柱中的保留时间与绿原酸标准样品的保留时间 相符合，确定组分为绿原酸，通过绿原酸标准曲线算得待测样品液中绿原酸含量(μ g/mL)。3)结果判定用以下公式对所测得总酚含量和绿原酸含量分别进行换算，得到梨果实中总酚和 绿原酸的含量
权利要求
1.梨果实加工能力的一种生理标记方法，其特征在于1)FC法测定果实总酚含量称取果肉5g，用80mL蒸馏水转入100mL容量瓶中，至100°C沸水浴中保温30min，取出， 冷却，定容，过滤，滤液为备用提取液；吸取l.OmL样品提取液和浓度为10、20、30、40、50iig/mL的没食子酸标准溶液各 1. OmL，分别加入5. OmL水、lmLFC显色剂和3mL质量比7. 5%的碳酸钠溶液，摇勻，显色2h， 在765nm波长下测定吸光度，得到不同浓度的没食子酸标准曲线，根据没食子酸标准曲线 求出样品溶液中的用没食子酸定量的总酚含量Pg/mL;其中FC显色剂制备方法为，称取5. 0g钨酸钠和1. 25g钼酸钠，用35mL蒸馏水溶于 100mL回流瓶中，加入2. 5mL磷酸和5. OmL盐酸，混勻，微沸回流2h，加入7. 5g硫酸锂、2. 5mL 蒸馏水和数滴溴水，开口沸腾约15min，冷却，定容至50mL，过滤，置棕色瓶中保存备用，使 用时加入1倍蒸馏水稀释；没食子酸标准溶液制备方法为，称取0. lg没食子酸，用蒸馏水加热溶解，定容至 100mL，此溶液质量浓度为1.0g/L ；分别吸取此溶液l、2、3、4、5mL至100mL容量瓶中，用蒸 馏水定容至刻度，所得标准溶液的质量浓度分别为10、20、30、40、50ii g/mL ；2)绿原酸含量的HPLC测定取果肉100g，加入70 %丙酮打浆，勻浆超声提取30min后真空抽滤得提取清液，35°C下 旋转蒸发去除丙酮，用lmol/L的NaOH调pH至7. 0，转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3 次，每次50mL,分离出酯相；剩下的水相用lmol/L的HCL调pH至2. 0，再分别用50mL的乙 酸乙酯萃取3次，合并酯相，酯相35°C下旋转蒸发，残渣溶于2ml甲醇中备用；绿原酸标准样品购于Sigma公司，用甲醇配制成25、50、100、200、400、800ii g/mL浓度 标准液备用；高效液相色谱分析色谱柱C18柱150mmX4. 6mm, 05um ；流动相A 水，用磷酸调 pH3. 20 ；流动相 B 甲醇；柱温:30°C ；流速0. 6mL/min ；样品液或 25、50、100、200、400、 800 u g/ml浓度绿原酸标准液经0. 45 y m微孔过滤膜过滤后进色谱柱，进样量5 u L ；检测 波长:280nm ；线性梯度淋洗程序为时间min/流动相B的体积百分含量=0/2,3/2,4/25, 11/50，16/80，26/80，30/2，35/2 ；根据吸收峰面积和标准液的浓度计算得到不同浓度绿原 酸标准曲线，并根据待测样品中酚类组分在柱中的保留时间与绿原酸标准样品的保留时间 相符合，确定组分为绿原酸，通过绿原酸标准曲线算得待测样品液中绿原酸含量P g/mL ；3)结果判定用以下公式对所测得总酚含量和绿原酸含量分别进行换算，得到梨果实中总酚和绿原 酸的含量mg/kg:
全文摘要
本发明提供了一种有效评价梨果实加工能力的生理标记，属于食品加工、果树育种学领域。通过对不同品种梨鲜榨汁褐变程度、总酚含量、酚类物质成分及其含量、多酚氧化酶亲和底物的分析，找出这几种因素之间的关联性，发现梨果实几种含量较高的主要酚类物质中，绿原酸含量与褐变度的灰色关联系数最高，且绿原酸与多酚氧化酶的亲和力最高。明确了总酚含量及绿原酸含量在梨果实酶促褐变中的主导作用，通过对梨果实中总酚及绿原酸含量的综合分析可以有效评价梨果实抗褐变、适加工能力，并为选育抗褐变、适加工梨品种亲本的选择、后代评价筛选及在对梨防褐变技术的开发提供相应的理论依据，具有广泛的应用价值。
文档编号G01N21/78GK101995403SQ201010256219
公开日2011年3月30日 申请日期2010年8月18日 优先权日2010年8月18日
发明者吴俊 , 吴华清, 张绍铃, 袁江, 陶书田, 齐开杰 申请人:南京农业大学