专利名称：可重复使用的色谱设备的鉴定的制作方法
可重复使用的色谱设备的鉴定本文报道的方法属于色谱领域，尤其是制备型柱色谱领域。本文报道了根据过程数据直接测定色谱柱的填料质量的方法。利用该方法，可实现节省处理时间和资源，因为其能够省去仅用于柱完整性测定目的的额外的数据采集。
背景技术：
目前几乎所有用于药物的多肽都是通过重组方式制备的。由于严格的管理规范和要求，必须从治疗性多肽制剂中尽可能多地除去副产物。因此，在重组生产后的粗的多肽原料的下游处理中会使用至少一个色谱步骤。由于与发酵方法的产量相关的色谱设备尺寸有限，尤其是色谱柱的分离能力有限，必须处理多个批次才能够提供需要量的纯化的治疗性多肽。为了确保每个批次的纯化的治疗性多肽具有相同的药学作用，每个批次都必须符合一系列的分析参数。如果纯化过程的各步骤操作稳定而有效，则能达到这一点。但是，如果纯化过程的一个步骤工作不正常，所得的产物将很有可能不能通过分析测试，而且在最坏的情况下，该批次将不能使用。因此，需要提供用于确定纯化步骤的性能和功效的方法。Teeters, Μ. Α.和 Quinones-Garcia，I. (J. Chrom. A 1069(2005)53-64)报道了通过使用对来自示踪试验和过程转变的基于电导率的脉冲和阶跃输入的响应、尤其是来自测量的滞留时间分布，评价和监测生产规模的色谱柱的填料性能。Norling等人 (Norling, L.等人，J. Chrom. A 1069 ^00 79-89)报道了阴离子交换色谱介质的多次重复使用对病毒去除的影响。Larson等人报道了使用过程数据来评价生产规模的蛋白纯化柱的色谱性能(Larson，Τ. Μ.等人，Biotechnol. Prog. 19 0003)485-492)。Moscariello， J.等人，J. Chrom. A 908 (2001) 131-141报道了工业规模的柱的性能鉴定。Vink, H., J. Chrom. 69(1972)237-242 报道了色谱的拆分和柱效能。Sarker，Μ.和 Guiochon，G.， J. Chrom. A 702 (1995) 27-44报道了用于制备型色谱的轴向压缩柱的填料性能研究。发明概述使用本文所报道的方法，能够测定可重复使用的色谱柱填料的分离效能和/或填料质量的降低，而不需要在分离粗品多肽溶液前使用和注入另外的示踪化合物来测定柱材料的完整性或者不需要该纯化步骤的历史数据。本文报道的第一方面是测定至少是在多肽纯化的纯化步骤中第二次使用的可重复使用的色谱柱填料是否降低了分离效能的方法，例如与其在同一多肽的相同纯化的相同纯化步骤中首次使用时的分离效能相比是否降低，该方法包括以下步骤a)鉴定和测定通过所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的惰性改变的实验数据，b)通过拟合至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据，确定式I的函数的参数，C)确定至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据与具有步骤b)中确定的参数的式I的函数之间的差异，d)计算步骤C)中确定的差异的最大值和最小值之间的差异，并将所述差异标准化，e)当步骤d)中计算的差异的绝对值超过0. 1时，确定所述可重复使用的色谱柱填料的下降的分离效能，其中式I的函数是
权利要求
1.测定至少是在多肽纯化的纯化步骤中第二次使用的可重复使用的色谱柱填料是否在该多肽的所述纯化的所述纯化步骤中降低了分离效能的方法，其特征在于该方法包括以下步骤a)鉴定和测定通过至少第二次使用的所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的惰性改变的实验数据，b)通过拟合所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据，确定式I的函数的参数，c)确定所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据与具有步骤b)中确定的参数的式I的函数之间的差异，d)计算步骤c)中确定的差异的最大值和最小值之间的差异，并将所述差异标准化，e)当步骤d)中计算的差异的绝对值超过0.1时，确定所述可重复使用的色谱柱填料的下降的分离效能，其中式I的函数是
2.多肽的色谱纯化方法，其中包含至少一个使用可重复使用的色谱柱填料的色谱步骤，其特征在于该方法包括以下步骤a)鉴定和测定通过至少第二次使用的所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的惰性改变的实验数据，b)通过拟合所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据，确定式I的函数的参数，c)确定所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据与具有步骤b)中确定的参数的式I的函数之间的差异，d)计算步骤c)中确定的差异的最大值和最小值之间的差异，并将所述差异标准化，其中式I的函数是
3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于通过所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的所述惰性改变是由流动相中的不与所述可重复使用的柱填料相互作用的物质的浓度变化造成的改变。
4.根据上述权利要求任一项的方法，其特征在于所述惰性改变是电导率或在^Onm的吸收的改变。
5.根据上述权利要求任一项的方法，其特征在于通过所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的所述惰性改变是从含有变性剂的100%溶液到不含有所述变性剂的100%溶液的改变，或者反之亦然。
6.根据权利要求5的方法，其特征在于所述变性剂选自氢氧化钠、胍氯化物、尿素或有机溶剂。
7.根据上述权利要求任一项的方法，其特征在于所述惰性改变是S形的变化。
8.根据上述权利要求任一项的方法，其特征在于所述惰性改变是随时间的改变。
全文摘要
本文报道了测定至少是在多肽纯化的纯化步骤中第二次使用的可重复使用的色谱柱填料是否在该多肽的所述纯化的所述纯化步骤中降低了分离效能的方法。该方法包括以下步骤a)鉴定和测定通过所述可重复使用的色谱柱填料的流动相的至少一种理化参数的惰性改变的实验数据，b)通过拟合所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据，确定式I的函数的参数，c)确定所述至少第二次使用的理化参数的惰性改变的实验数据与具有步骤b)中确定的参数的式I的函数之间的差异，d)计算步骤c)中确定的差异的最大值和最小值之间的差异，并将所述差异标准化，e)当步骤d)中计算的差异的绝对值超过0.1时，确定所述可重复使用的色谱柱填料的下降的分离效能，其中式I的函数具有振幅P1，起始值A0，平均值m，标准偏差s，以及其中erf是误差函数。
文档编号G01N30/86GK102460147SQ201080025101
公开日2012年5月16日 申请日期2010年6月22日 优先权日2009年6月24日
发明者A·别洛乌索夫, B·格瓦特, T·达姆斯 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司