经历经皮冠状动脉介入术的患者中再狭窄的诊断的制作方法

专利名称：经历经皮冠状动脉介入术的患者中再狭窄的诊断的制作方法
技术领域：
本发明的技术领域总体上涉及用于确定和/或预测和/或诊断经历经皮冠状动脉介入术的患者中再狭窄的化合物、组合物、方法和/或试剂盒。
背景技术：
晚期糖基化终产物(AGE)作用于AGE的细胞受体(RAGE)。有三种形式的RAGE (2，3) AGE (sRAGE)的全长、N-截短的和C-截短的可溶性受体。 全长RAGE和AGE的相互作用导致促炎介质的表达增加、活化核转录因子KB(NF-KB)和诱导氧化应激。该相互作用导致包括可溶性血管细胞粘附分子-l(sVCAM-l)在内的粘附分子和包括肿瘤坏死因子-a (TNF-α )在内的细胞因子的表达增加(2，4，5,6)。AGE与RAGE的相互作用导致NF- κ B活化(4)，其又导致粘附分子和细胞因子的促炎基因的表达增加(2)。该相互作用也生成氧自由基(7)。N-截短的RAGE的功能了解地很少。sRAGE缺乏跨膜结构域，并且在血浆中循环(8)。sRAGE起RAGE配体诱铒的作用，并且通过螯合循环的RAGE配体或通过与全长RAGE竞争与配体结合进行(9)。其通过防止全长RAGE活化而具有保护作用，否则全长RAGE活化可导致增强的氧化应激和NF- κ B、细胞因子和粘附分子的活化，导致组织损伤和动脉粥样硬化的形成。再狭窄是经皮冠状动脉介入术(PCI)例如血管成形术和支架术之后持续长期成功的主要问题(10)。在PCI之后的再狭窄与血管内膜增生有关。颈动脉中的球囊损伤和动物模型中的动脉内皮剥脱增加动脉壁中RAGE和AGE的水平，并且产生血管内膜增生(11，12)。RAGE和AGE的相互作用导致细胞粘附分子、细胞因子、NF-κ B、基质金属蛋白酶-9(ΜΜΡ-9)的表达增加以及组织因子和氧化应激的水平增加(2)。这些物质参与形成动脉粥样硬化、血块形成和斑块不稳定性。当前，鉴定患有冠状动脉病的患者的可用技术包括i)心电图学；ii)运动耐受性实验；iii)冠状动脉血管造影术；iv)多检测器CT血管造影术；和V)放射性核素(radionucleide)成像。然而,这些技术是耗时且昂贵的。现在，没有可用于在经历血管成形术和支架植入的患者中预测再狭窄的技术。因此，期望提供用于预测/诊断在经历包括支架植入在内的PCI的患者中再狭窄的化合物、组合物、方法和/或试剂盒。提供该背景资料的目的是使申请人相信与本发明可能相关的信息为公众所知。但是并不必然是打算承认，也不应该理解为任何在先的信息构成本发明的现有技术。

发明内容
本发明的一个目标是提供用于确定和/或预测和/或诊断经历经皮冠状动脉介入术的患者中再狭窄的化合物、组合物、方法和/或试剂盒。根据本发明的一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从受试者获得血清样品；b)将该样品与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量；和d)确定在受试者中形成急性冠状动脉综合征(ACS)，其中通过样品中sRAGE的水平指示形成ACS。在一个具体的方面，使用具有检测器的仪器以测定样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的所述sRAGE之间形成的复合体。在另一具体方面，所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。在一方面，所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。 根据本发明的另一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)将该样品与所述样品中的生物标记的抗体接触以在抗体和所述生物标记之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定所述样品中所述生物标记的量；和(1)确定形成PCI后再狭窄，其中通过所述样品中所述生物标记的量指示形成再狭窄。在一个具体的方面，使用具有检测器的仪器以测定样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的生物标记之间形成的复合体。在另一具体方面，所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。在另一具体方面，所述抗体是sRAGE、TNF_a、SVCAM_1或AGE的抗体。形成的复合体的测量值确定样品中sRAGE、TNF-a、SVCAM_1或AGE的量。在一个具体的方面，所述受试者是人。在另一具体方面，所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。根据本发明的另一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的AGE之间形成复合体；d)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量和样品中AGE的量；和e)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE/sRAGE的比率指示形成再狭窄。在一个方面，使用具有检测器的仪器以测定样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的生物标记之间形成的复合体。在另一具体方面，所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。在另一方面，所述受试者是人。在另一方面，所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。根据本发明的另一个方面，提供一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的sRAGE和/或药剂以治疗再狭窄，所述药剂⑴增加受试者中的sRAGE的量，和/或(ii)减少受试者中的AGE的量，所述再狭窄由患者血清样品中存在的低水平sRAGE或高AGE/sRAGE比指示。在一个方面,增加受试者中的sRAGE量的所述药剂选自雷米普利(ramipriil)、阿伐他汀(atorvastation)或甲氨喋呤(methotrexate)。在一个方面，减少受试者中的AGE量的药剂是替米沙坦(teImisartan)、阿伐他汀(atorvastatin)、氨基狐(amino-guanidine)、批多胺(pyridoxamine)或匹马吉定(pimagedine)。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，其包括a)测定ACS患者血清中存在的sRAGE和AGE的量的说明书；b)测量sRAGE和AGE的血清浓度值的试剂；和其中再狭窄由样品中AGE/sRAGE的比率指示。在一个方面，所述试剂是sRAGE和AGE抗体。在一个方面，AGE/sRAGE的比率通过下述步骤测定a)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；b)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的AGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量和样品中AGE的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE/sRAGE的比率指示形成再狭窄。
在一方面，其中使用具有检测器的仪器以测定样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的生物标记之间形成的复合体。在另一方面，所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。在另一方面，所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。根据本发明的一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从受试者获得血清样品；b)将该样品与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量；和d)确定在受试者中形成ACS，其中通过样品中sRAGE的水平指示形成ACS。根据本发明的一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从经历PCI的患有急性冠状动脉综合征(ACS)的受试者获得血清样品；b)将该样品与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量；和d)确定在受试者中形成PCI后再狭窄，其中通过样品中sRAGE的水平指示形成再狭窄。根据本发明的另一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)使用机器分析样品和对照，其中所述机器是分光光度计、荧光分光光度计和/或光学/电化学设备，其具有检测器以获得样品中的总sRAGE量，所述检测器被设定以检测sRAGE的抗体和样品之间形成的复合体；和c)确定在受试者中形成PCI后再狭窄，其中通过样品中sRAGE的水平指示形成再狭窄。在本发明的另一方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的AGE之间形成复合体；d)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量和样品中AGE的量；和d)确定在受试者中形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE/sRAGE的比率的水平指示形成再狭窄。根据本发明的另一个方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)使用具有检测器的分光光度计、荧光分光光度计和/或光学/电化学设备分析样品和对照，所述检测器被设定以检测(i)sRAGE的抗体和样品之间形成的复合体以获得样品中总sRAGE的量；和(ii)AGE的抗体和样品之间形成的复合体以获得样品中总AGE的量；和c)确定在受试者中形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE/sRAGE的比率的水平指示形成再狭窄。
在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。根据本发明的一个具体方面，所述机器是Biotek(ELSOS)平板读出器。在本发明的另一方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；和b)分析样品以鉴定sRAGE和AGE的水平，其中通过样品中AGE/sRAGE的比率指示在受试者中形成PCI后再狭窄。在本发明的另一方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；和b)分析样品以鉴定sRAGE的水平，其中通过样品中sRAGE的水平指示在受试者中形成PCI后再狭窄。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞
(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的sRAGE和/或药剂以治疗再狭窄，所述药剂(i)增加受试者中的sRAGE的量，和/或(ii)减少受试者中的AGE的量，所述再狭窄由患者血清样品中存在低水平sRAGE指示。在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的sRAGE和/或药剂以治疗再狭窄，所述药剂(i)增加受试者中的sRAGE的量，和/或(ii)减少受试者中的AGE的量，所述再狭窄由患者血清样品中存在AGE/sRAGE的量的高比率指示。在本发明的另一方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；和b)将该样品与sRAGE的抗体接触以鉴定该抗体与样品中存在的sRAGE形成的复合体，其中sRAGE的水平指示是否需要替代的和/或另外的治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以鉴定抗体和样品中存在的sRAGE形成的复合体；和(3)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以鉴定抗体和样品中存在的AGE形成的复合体，其中AGE/sRAGE的比率指示受试者是否需要替代的和/或另外的治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予患有ACS的受试者以sRAGE和/或药剂，所述药剂Q)增加受试者中的sRAGE的量,和/或(ii)减少受试者中的AGE的量，其中已知受试者的血清含有低水平sRAGE。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予患有ACS的受试者以sRAGE和/或药剂，所述药剂Q)增加受试者中的sRAGE的量,和/或(ii)减少受试者中的AGE的量，其中已知受试者的血清含有高水平的AGE/sRAGE。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS 是 NSTEMI。在本发明的另一方面，提供确定用PCI治疗的效力的方法，包括鉴定抗体和来自患有ACS的受试者的样品中存在的sRAGE形成的复合体，其中高水平的sRAGE指示有效治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供确定用PCI治疗的效力的方法，包括鉴定(i)抗体和来自患有ACS的受试者的样品中存在的sRAGE形成的复合体，和(ii)抗体和来自患有ACS的受试者的样品中存在的AGE形成的复合体，其中低比率的AGE/sRAGE指示有效治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供鉴定患有ACS的人类受试者的方法，该方法包括检测测试样品中sRAGE的表达水平，其中测试样品源自血清；和将测试样品中sRAGE的表达水平与对照非ACS样品中sRAGE的表达水平进行比较；其中相对于对照中sRAGE的表达水平，测试样品中的sRAGE的高表达水平指示该受试者患有ACS。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS 是 NSTEMI。 在本发明的另一方面，提供评估患有ACS的人类受试者预后的方法，该方法包括检测⑴测试样品中sRAGE的表达水平和(ii)测试样品中AGE的水平，其中测试样品源自血清；和将测试样品中AGE/sRAGE的表达比率与对照非ACS样品中AGE/sRAGE的表达水平进行比较；其中相对于对照中sRAGE的表达水平，测试样品中的高水平AGE/sRAGE指示该受试者差的预后。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供用于诊断PCI后再狭窄的试剂盒，其包括a)测定ACS患者血清中存在的sRAGE的量的说明书；b)测量sRAGE的血清浓度值的试剂；和其中所述诊断由样品中sRAGE的水平指示。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供用于诊断PCI后再狭窄的试剂盒，其包括a)测定ACS患者血清中存在的sRAGE和AGE的量的说明书；b)测量sRAGE和AGE的血清浓度值的试剂；和其中所述诊断由样品中AGE/sRAGE的水平指示。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是 NSTEMI。在本发明的另一方面，提供sRAGE的抗体检测来自患有ACS的患者的血清样品中sRAGE-抗体复合体的量的应用，其中sRAGE的水平指示该受试者是否需要替代的和/或另外的治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。在本发明的另一方面，提供sRAGE和AGE的抗体检测来自患有ACS的患者的血清样品中sRAGE-抗体复合体和AGE-抗体复合体的量的应用，其中AGE/sRAGE的比率指示该受试者是否需要替代的和/或另外的治疗。在本发明的一个方面，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在又另一个方面，ACS是NSTEMI。


现在仅仅作为实例参考附图，描述本发明的实施方式，其中图I描述对照和非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)受试者中晚期糖基化终产物的可溶性受体(sRAGE)、肿瘤坏死因子-a (TNF- α )、可溶性血管细胞粘附分子-I (sVCAM-Ι)和晚期糖基化终产物(AGE)的血清水平。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，对照相对于NSTEMI ；图2描述对照和非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)受试者中AGE/sRAGE的比率。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，对照相对于NSTEMI ；图3描述对照受试者和具有1VD、2VD和3或更多VD的NSTEMI患者中sRAGE、TNF-α、SVACM-1和AGE的血清水平。结果表示为平均值土SE。sRAGE、TNF_ a、SVCAM_1和AGE的注释与图I相似。1VD，一个血管病；2VD，两个血管病；3VD，三个血管病。*p < O. 05，对照相对于 1VD、2VD 或 3VD。tP<0.05, IVD 相对于 2VD 或 3VD。a p < O. 05,2VD 相对于 3VD。图4描述对照受试者和具有1VD、2VD和3或更多VD的NSTEMI患者中AGE/sRAGE的比率。结果表示为平均值土SE。AGE，晚期糖基化终产物；SRAGE，AGE的可溶性受体；1VD，一个血管病；2VD，两个血管病；3VD，三个血管病。*p < O. 05，对照相对于1VD、2VD或3VD ；卞p<0.05, IVD 相对于 2VD 或 3VD ；图5 描述 NSTEMI 受试者中 sRAGE 和 sVCAM-1、AGE、TNF_ a 和 AGE/sRAGE 之间的关系;图6描述具有或不具有再狭窄的NSTEMI患者中血清sRAGE、TNF_ a和sVCAM_l的PCI前水平。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，再狭窄相对于非再狭窄；图7描述具有或不具有再狭窄的患者中AGE和AGE/sRAGE比率的PCI前水平。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，再狭窄相对于非再狭窄。图8描述具有或不具有再狭窄的NSTEMI患者中血清sRAGE、TNF_ a和sVCAM-1的PCI后水平。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，再狭窄相对于非再狭窄；图9描述具有再狭窄的患者中血清sRAGE、TNF- a和sVCAM_l的PCI前和PCI后水平。结果表示为平均值土SE。*p < O. 05，PCI前相对于PCI后六个月；图10描述不具有再狭窄的NSTEMI患者中sRAGE和TNF- a的PCI前水平之间以及sRAGE和TNF- a的PCI后水平之间的相关性；图11描述不具有再狭窄的NSTEMI患者中sRAGE和sVCAM_l的PCI前水平之间以及sRAGE和sVCAM-Ι的PCI后水平之间的相关性；图12是描绘对于NSTEMI患者，sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、预测值和准确度的表；和图13是描绘对于NSTEMI患者中的PCI后再狭窄，sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、预测值和准确度的表。
具体实施例方式如在下面将更详细描述的，本发明涉及用于人类患者中的急性冠状动脉综合征(ACS)、外周血管疾病和脑血管疾病的诊断和/或预后和/或治疗性监测的化合物、组合物、方法和试剂盒。在一个实施方式中，ACS是非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)、ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或不稳定心绞痛。在一个具体的实例中，ACS是NSTEMI。在一个实例中，血清样品从患有ACS的受试者获得。在一个具体的实例中，血清样品从患有NSTEMI的受试者获得。用于血清收集的方法是技术人员公知的。如本文使用的术语“受试者”指受益于治疗和/或诊断的任何人或动物。受试者的非限定性实例包括人、非人哺乳动物、伴侣动物、家畜等。生化标记(或生物标记)被用于分析和/或评估从(一个或多个)受试者收集的血清。在一个实例中，使用抗体检测从(一个或多个)受试者收集的血清中的生化标记。本发明的抗体对感兴趣蛋白是免疫反应性的或免疫特异性的，并因此与感兴趣蛋白特异性和选择性地结合，所述感兴趣蛋白包括例如人sRAGE、TNF-a、SVCAM_1和/或AGE 蛋白。对人sRAGE、TNF- a、sVCAM-Ι和/或AGE蛋白免疫反应性的和免疫特异性的抗体是优选的。人sRAGE、TNF- a、sVCAM-Ι和/或AGE蛋白的抗体优选是免疫特异性的——即，基本上不与相关物质交叉反应。术语“抗体”包括所有类型的抗体(例如，单克隆的和多克隆的)。如本文使用的术语“特异性结合”是指抗体与特异性多肽的高亲和力和/或高亲和性结合，所述特异性多肽例如sRAGE、TNF- a、SVCAM_1和/或AGE蛋白的表位。抗体与此特异性多肽上其表位的结合比同一抗体与任何其他表位的结合更强，所述其他表位特别是与感兴趣的特异性多肽相关的分子或在与感兴趣的特异性多肽相同的样品中存在的那些。与感兴趣多肽特异性结合的抗体可以能够以弱的但是仍可检测的水平与其他多肽结合。这种弱的结合或背景结合容易与特异性抗体与感兴趣化合物或多肽的结合相区分，例如通过使用适当的对照，如本领域技术人员公知的。在一个具体的实例中，使用酶联免疫吸附测定(ELISA测定)，进行收集血清中的(一个或多个)生化标记的检测和/或测量。技术人员明白定性或定量测定的其他免疫测定可在本发明中使用。在本发明的一个实例中，使用市售酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(R&DSystems, Inc. , Minneapolis, MN)测量 sRAGE 和 TNF-α ,使用 ELISA 试剂盒(Abeam, Inc.,Cambridge,MA, USA)测量 sVCAM-1。使用人 AGE ELISA 试剂盒(BIOPCR，Bei jing ZhonghaoShidai Co.，Ltd.，Beijing, China)测量 AGE 水平。在另一实例中，使用来自BioVendor Research and DiagnosticProducts (Candler, NC, USA)的市售ELISA试剂盒，测量sRAGE。在另一实例中，使用来自 Abnova(Walnut, CA 91789 USA)、 BD Biosciences, Cayman Chemicals(CaymanChemical Company,1180 East Ellsworth road, Ann Arbor, Michigan 48108)、AntigenixAmerica(Huntington Station, NY 11746)或 BioVendor Research and DiagnosticProducts (Candler, NC, USA)的市售 ELISA 试剂盒测量 TNF- α。在另一实例中，使用来自Cell Sciences、Diaclone 或 Invitrogens 的市售 ELISA试剂盒测量VCAM-I。使用多种机器和/或仪器检测和/或测量血清样品中的生化标记。适当的机器和/或仪器包括分光光度计、荧光分光光度计和/或光学/电化学设备。
根据本发明的具体实例，sRAGE、AGE、sVCAM-1和/或TNF- α的检测使用Biotek(EL808)平板读出器进行。在另一实例中，使用EIA分析器。检测血清样品中的sRAGE、AGE、sVCAM-1和/或TNF-α对本领域技术人员是公知的。在一个实例中，根据制造商的说明书使用ELISA试剂盒。在一个实例中，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将该样品与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中sRAGE的水平指示形成再狭窄。在一个具体的实例中，受试者是患有NSTEMI、STEMI或急性心绞痛的人。在具体的实施方式中,血清样品来自患有NSTCMI的受试者，并且形成的复合体的测量值确定样品中sRAGE的量。在另一实例中，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将该样品与TNF-α的抗体接触以在抗体和样品中存在的TNF-α之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中TNF-α的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中·TNF-α的水平指示形成再狭窄。在一个具体的实例中，受试者是患有NSTEMI、STEMI或急性心绞痛的人。在具体的实施方式中，血清样品来自患有NSTCMI的受试者，并且形成的复合体的测量值确定样品中TNF-α的量。在另一实例中，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将该样品与sVCAM-Ι的抗体接触以在抗体和样品中存在的sVCAM-Ι之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中sVCAM-Ι的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中sVCAM-Ι的水平指示形成再狭窄。在一个具体的实例中，受试者是患有NSTEMI、STEMI或急性心绞痛的人。在具体的实施方式中，血清样品来自患有NSTEMI的受试者，并且形成的复合体的测量值确定样品中sVCAM-Ι的量。在另一实例中，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将该样品与AGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的AGE之间形成复合体；c)测量形成的复合体以确定样品中AGE的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE的水平指示形成再狭窄。在一个具体的实例中，受试者是患有NSTEMI、STEMI或急性心绞痛的人。在具体的实施方式中,血清样品来自患有NSTCMI的受试者，并且形成的复合体的测量值确定样品中AGE的量。在又另一实例中，提供包括下列步骤的方法a)从患有ACS的受试者获得血清样品山)将该样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)将该样品的第二部分与AGE的抗体接触以在抗体和样品中存在的AGE之间形成复合体；d)测量形成的复合体以确定样品中sRAGE的量和样品中AGE的量；和e)确定形成PCI后再狭窄，其中通过样品中AGE/sRAGE的水平指示形成再狭窄。在一个具体的实例中，受试者是患有NSTEMI、STEMI或急性心绞痛的人。在具体的实施方式中，血清样品来自患有NSTEMI的受试者，并且形成的复合体的测量值确定样品中sRAGE和AGE的量。使用具有检测器的分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备分析测试样品以及对照样品(如果存在的话)以获得样品中复合体的量，所述检测器被设定以检测在抗体(例如sRAGE、AGE、TNF-α、sVCAM-1)和样品之间形成的复合体。在一个具体的实例中，使用Biotek(EL808)平板读出器。
对照等试者相对于患有ASC (NSTEMI)的患者在一个实例中，患有ACS的患者中血清sRAGE的水平明显低于对照受试者中的血清sRAGE的水平。在另一实例中，ACS患者中血清TNF-α的水平明显高于对照受试者中的血清TNF-a的水平。在另一实例中，患有ACS的患者中血清sVCAM-Ι的水平明显高于对照受试者中的血清sVCAM-Ι的水平。在另一实例中，ACS患者中血清AGE的水平明显高于对照受试者中的血清AGE的水平。在另一实例中，血清sRAGE的水平与患病血管的数量负相关，而血清AGE、AGE/sRAGE、TNF-a和sVCAM_l的水平与患病血管的数量正相关。 在另一实例中，患者中血清AGE/sRAGE的比率明显高于对照受试者中的血清AGE/sRAGE的比率。在另一实例中，在对照受试者和患有NSTEMI的患者中，在血清sRAGE和AGE、血清sRAGE和AGE/sRAGE、血清sRAGE和TNF- a以及血清sRAGE和sVCAM-Ι之间都存在逆相关。在又另一实验中，在鉴定患有ACS(NSTEMI)的患者中，sRAGE试验的灵敏性、特异性、阴性预测值、阳性预测值和准确度分别为59%、100%、100%、100%和74%。在鉴定患有ACS (NSTEMI)的患者中，AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阴性预测值、阳性预测值和准确度分别为 85%、91%、67%、97%和 86%。具有或不具有PCI后再狭窄的NSTEMI患者在一个实例中，具有再狭窄的NSTEMI患者与不具有再狭窄的患者相比，具有更低的sRAGE的PCI前水平和更高的AGE、AGE/sRAGE、TNF- a和sVCAM-1水平。在另一实例中，在NSTEMI患者中，与不具有再狭窄的患者相比，在具有再狭窄的患者中，血清sRAGE的PCI后水平更低，并且sVCAM-Ι和TNF- a的PCI后水平更高。在一个具体的实例中，在形成再狭窄的患者中，与PCI前水平相比，sRAGE的PCI后水平较低、TNF-a较高和sVCAM-Ι未改变。sRAGE、TNF-a和sVACM-1的PCI前和PCI后水平在不具有再狭窄的患者中相似。在另一实例中，sRAGE的血清水平与TNF-a和sVCAM_l的血清水平负相关，无论PCI前和PCI状况或患者具有或不具有再狭窄。在一个具体的实例中，在PCI后检测的情况下，在鉴定具有PCI后再狭窄的患者中，PCI前SRAGE试验的灵敏性和阴性预测值为100%，而特异性、阳性预测值和准确度分别为83%、85%和91%。PCI前AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为81%、94%、93%、84%和88%。对形成PCI后再狭窄的患者的治疗选择是技术人员已知的。技术人员明白对使用本申请的方法确定形成PCI后再狭窄的患者，那些治疗选择也适合使用。在一个实例中，确定形成PCI后再狭窄的受试者用增加受试者中血清sRAGE水平的药剂治疗。在一个实施方式中，受试者用sRAGE治疗，和/或用增加血清sRAGE水平的(一种或多种)药剂治疗。治疗PCI后再狭窄以增加血清sRAGE的药剂包括但不限于雷米普利(ACE抑制剂)、阿伐他汀(降脂剂)或甲氨喋呤。在一个实例中，确定形成PCI后再狭窄的受试者用减少AGE水平的药剂治疗。治疗PCI后再狭窄的另外药剂包括但不限于替米沙坦、阿伐他汀、氨基胍、吡多胺和/或匹马吉定，其降低血清AGE。可选地或另外地，受试者的治疗包括减少生成和/或促进AGE形成的(一种或多种)食物(例如糖类)的摄取。这类食物是技术人员已知的。可选地或另外地，受试者的治疗包括给予“AGE-破坏剂(breakers) ”以减少AGE诱导的交联的量，这是技术人员已知的。在一个实例中，使用增加血清sRAGE的药剂和减少AGE水平以及减少生成和/或促进AGE形成的(一种或多种)食物的摄取的药剂。
在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的sRAGE和/或sRAGE诱导剂和/或AGE减少剂和/或AGE-破坏剂以治疗和/或预防再狭窄，所述再狭窄由患者的血清样品中低水平sRAGE的存在指示。在本发明的另一方面，提供一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的SRAGE和/或sRAGE诱导剂和/或AGE减少剂和/或AGE-破坏剂以治疗和/或预防再狭窄，所述再狭窄由患者的血清样品中AGE/sRAGE的量的比率指示。如本文使用的，术语“治疗”或“减轻严重度”，在一个实施方式中可包括增加存活率，或在另一个实施方式中停止疾病进展，或在另一个实施方式中延迟疾病进展，或在另一个实施方式中减少疼痛，或在另一个实施方式中延迟疾病蔓延到另外的部位、器官或系统，或任何临床益处。本发明的(一个或多个)方法可被自动化将数据发送至计算机，该计算机分析样品中抗体复合体的量，并且鉴定经历PCI的患者的预后。本发明的方法通过以试剂盒的形式提供在这类方法中使用的(一种或多种)化合物和/或(一种或多种)组合物便利地实施。这类试剂盒优选地包含其使用说明书。为了获得对本文描述的发明的更好理解，提供下列实施例。应该理解这些实施例仅仅用于说明目的。因此，它们不应以任何方式限定本发明的范围。实施例方法招募总共46名相继经历裸金属支架植入(bare metal stent implantation)的男性患者和28名年龄匹配的健康男性受试者(63. 8±11岁对58. 5±22岁SD)。患者的纳入标准如下i)患有非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)的ACS患者；ii)在单个或多个血管(至多3个血管)中不连续的重新定位的病变；iii)基准冠状动脉直径> 2. 5mm ；iv)裸金属支架植入；V)非糖尿病患者。剔除标准如下i) 5天内的急性心肌梗塞；ii)主动脉冠状动脉搭桥手术；
iii) >3个支架植入；iv)炎性疾病；v)瓣膜性心脏病；vi)阿尔茨海默病；vii)当前吸烟者；viii)肾功能不全。将裸金属支架植入至经历经皮冠状动脉介入术(PCI)的患者。所述患者用阿司匹林(IOOmg/天)和氯吡格雷(75mg/天)以及降脂剂(他汀类药物)进行联合抗血小板治疗。
建议所有的患者在指示(index)的冠状动脉介入术之后6个月返回重复进行冠状动脉血管造影术。收集血样用于测量PCI前和PCI后6个月的sRAGE、AGE、TNF- α和sVCAM-1。从所有患者得到知情同意书。从萨斯卡川大学和萨斯卡通卫生部(University of SaskatchewanEthics Committee and Saskatoon Health Region)(皇家大学医院(Royal UniversityHospital))获得该项目批准。测量sRAGE、TNF- α、sVCAM-1 和 AGE为了获得血清,从每个患者收集17mL血液，并将其转移入8. 5mL Vacutainer血清分离管中。使血样凝块，然后立刻在IOOOrpm下离心15分钟，进行血清分离。将血清转移到标记的管中，然后在_80°C下储存，直到进行测定。使用市售酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(R&D Systems, Inc. , Minneapolis,MN)，根据制造商的方案，测量sRAGE和TNF-α的血清水平。使用ELISA试剂盒(Abcam，Inc.，Cambridge, MA, USA)，测量 sVCAM-1。使用人 AGE ELISA 试剂盒(BIOPCR, BeijingZhonghao Shidai Co.，Ltd.，Beijing, China)，测量 AGE 水平。使用Biotek(EL808)平板读出器，获得ELISA分析的结果。血管造影分析进行血管造影术，并且由对患者临床特征不了解的两个心脏病学家分析血管造影照片。使用半自动边缘计数检测计算机分析系统(semi-automated edge counterdetection computer analysis system)(QCACMS Version 4, Medis Medical ImagingSystems Inc.，Lein, The Netherlands)测量基准直径、最小腔直径、狭窄的百分数和病变长度。冠状动脉血管造影术示出16名患者具有一个血管病(IVD)，15个患者具有两个血管病(2VD)和15个患者具有3个或更多个血管病(3VD)。统计分析使用具有95%效力(power)和5% α水平的双侧Satterthwaite t_检验计算样品大小。数据表示为平均值土SE。使用2-尾非配对t-检验，比较两组之间的数据。进行单一线性单变量相关(Single linear univariate correlations) (Spearman 相关系数)以评估循环的sRAGE水平和TNF- α之间、sRAGE和sVCAM_l之间、sRAGE和AGE之间、以及sRAGE 和 AGE/sRAGE 之间的关系。将 1VD、2VD 和 3VD 中 sRAGE、AGE、AGE/sRAGE、TNF- α 和sVCAM-1的血清水平与对照比较。考虑P值< O. 05为显著的。如Glas等(14)所描述的，计算sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确度。结果A.对照受试者相对于患有ACS (NSTEMI)的患者
I. sRAGE、TNF- α、sVCAM-1、AGE 和 AGE/sRAGE 的血清水平在图I和图2中总结了对照受试者和ACS(NSTEMI)患者中的血清sRAGE、TNF_a、sVCAM-K AGE和AGE/sRAGE的水平。对照受试者中的sRAGE的血清水平的范围为1009到1635pg/ml，其中平均值 + SE 为 1287. 0±41. 5pg/ml。ACS (NSTEMI)患者中的 sRAGE 的血清水平的范围为480到1538pg/ml，其中平均值土SE为892. 65±50. 62pg/ml。患有ACS的患者中血清sRAGE的水平显著(P < O. 001)低于对照受试者中血清sRAGE的水平。对照受试者中的TNF-a的血清水平的范围为I. 8-15. 83pg/ml，其中平均值土SE为10. 3±0. 8pg/ml，而在患有ACS的患者中，TNF-a的血清水平的范围为6. 8-58. 0，其中平均值土SE为23. I±2. 3pg/ml。ACS患者中血清TNF-a的水平显著(p < O. 002)高于对照受试者中血清TNF-a的水平。对照受试者中的sVCAM-Ι的血清水平的范围为212_989ng/ml，其中平均值土SE为651. 0±35. 5ng/ml，而在患有ACS的患者中，sVCAM-Ι的血清水平的范围为261-1963，其中平均值土SE为1059. 6±70. 8ng/ml。患有ACS的患者中sVCAM-Ι的水平显著(p < O. 003) 高于对照受试者中sVCAM-Ι的水平。ACS患者中AGE的血清水平与对照受试者相比更高(1192. 5±82. 6相对于669. 4±47. 9ng/ml)。ACS患者中AGE/sRAGE的比率为I. 72 ±O. 14，对照受试者中为O. 54±0. 06，并且这些值彼此之间显著不同。这些数据表明与对照受试者相比，在ACS患者中，sRAGE的血清水平较低，并且TNF- a、sVCAM-K AGE 和 AGE/sRAGE 的血清水平较高。2. sRAGE、AGE、AGE/sRAGE、TNF- a 和 sVCAM-1 与患病血管数量的关系在图3中总结sRAGE、TNF-a和sVCAM_l水平和患病血管数量的关系，而AGE和AGE/sRAGE水平和患病血管数量的关系在图4中总结。随着患病血管数量增加，血清sRAGE的水平进行性减少，而血清AGE、AGE/sRAGE、TNF-a和SVCAM-1的水平进行性增加。这些结果表明血清sRAGE的水平与患病血管数量负相关，而血清AGE、AGE/sRAGE、TNF-a和sVCAM-1的水平与患病血管数量正相关。3. sRAGE 与 AGE、AGE/sRAGE、TNF- a 和 sVCAM-1 的相关性患有ACS的患者的血清sRAGE和AGE、血清sRAGE和AGE/sRAGE、血清sRAGE和TNF- a、以及血清sRAGE和sVCAM_l之间的相关性在图5中示出。在血清sRAGE和AGE、血清sRAGE和AGE/sRAGE、血清sRAGE和TNF- a、以及血清sRAGE和sVCAM-Ι之间存在逆相关性，其中P值< O. 001。在对照受试者中观测到相似的sRAGE和TNF- a之间以及sRAGE和sVCAM-Ι之间的逆相关性(数据未示出)。结果表明在对照受试者和患有NSTEMI的受试者中，在sRAGE和AGE、sRAGE和AGE/sRAGE、sRAGE和TNF- a、以及sRAGE和sVCAM-Ι之间，都存在逆相关性。4.对于ACS患者，sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、预测值和准确度对于患有NSTEMI的患者的诊断，sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阴性预测值、阳性预测值和准确度的数据在图12中给出。在鉴定患有ACS(NSTEMI)的患者中，sRAGE试验的灵敏性、特异性、阴性预测值、阳性预测值和准确度分别为59%、100%、100%、100%和74%。在鉴定患有ACS(NSTEMI)的患者中，AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阴性预测值、阳性预测值和准确度分别为85%、91%、67%、97%和86%。
这些数据表明sRAGE和AGE/sRAGE试验两者都用作鉴定患有ACS (NSTEMI)的患者的生物标记/预测因子(predictor)。在鉴定患有ACS (NSTEMI)的患者中，AGE/sRAGE的灵敏性高于sRAGE的灵敏性，而sRAGE的阴性预测值大于AGE/sRAGE的阴性预测值。B.具有或不具有PCI后再狭窄的NSTEMI患者在形成PCI后再狭窄的22名ACS (NSTEMI)患者中，和未形成PCI后再狭窄的24名NSTEMI 患者中，测量 sRAGE、AGE、AGE/sRAGE、TNF-α 和 sVCAM-1 的 PCI 前和 PCI 后水平。在本研究中，植入支架的50%或更多变窄被认为是再狭窄。具有小于50%支架变窄的患者被认为是不具有再狭窄的患者。腔直径测量值变窄被认为是再狭窄。I. sRAGE、TNF- α、sVCAM-1、AGE 和 AGE/sRAGE 的 PCI 前血清水平
在再狭窄和非-再狭窄组中，sRAGE、TNF- α和sVCAM_l的PCI前血清水平在图6中总结；在再狭窄和非-再狭窄组中，AGE和AGE/sRAGE的PCI前血清水平在图7中总结。在狭窄组中sRAGE的水平与非再狭窄组相比显著较低￠26. 0±26. O相对于1104. O±58. Opg/ml)。然而，在狭窄组中TNF-α和sVCAM-Ι的血清水平比非再狭窄组更高(TNF-a ,34. O±2. 9相对于 11. 63±O. 62pg/ml ；sVCAM-1,1290±89相对于827. 6±43. 3ng/ml)。在具有再狭窄的患者中AGE的PCI前血清水平与不具有再狭窄的患者相比显著更高(1512. 06±84. 53 相对于 891. 71 ±92. 24ng/ml)。在具有再狭窄的患者中 AGE/sRAGE 的 PCI前比率为不具有再狭窄的患者的2. 32倍高(2. 39 + 0. 20相对于I. 03 + 0. 17)。这些结果表明具有再狭窄的患者与不具有再狭窄的患者相比，具有较低的PCI前sRAGE 水平和较高的 AGE、AGE/sRAGE、TNF- a 和 sVCAM-1 水平。2. sRAGE、TNF- a 和 sVCAM-1 的 PCI 后血清水平在具有或不具有再狭窄的患者中的sRAGE、TNF- a和sVCAM_l的PCI后水平在图8中总结。具有再狭窄的患者中的sRAGE水平显著低于不具有再狭窄的患者中的sRAGE水平(477. 0±18. 6相对于1106. 7±41.9pg/ml)。然而，具有再狭窄的患者中的TNF-a和sVCAM-Ι的水平与不具有再狭窄的患者相比较高(TNF-a ,48. 4 ± I. 4相对于12. 5±0. 4pg/ml ；sVCAM-1,1381. 8±63. 5相对于767. 2±26. 4ng/ml)。在具有再狭窄的患者中，与PCI前水平相比，sRAGE的PCI后血清水平较低，TNF-a较高和sVCAM-Ι保持未改变(图9)。在另一方面，sRAGE、TNF-a和SVACM_1的PCI前和PCI后血清水平在不具有再狭窄的患者中相似(数据未示出)。这些结果表明具有再狭窄的患者与不具有再狭窄的患者相比，sRAGE的PCI后血清水平较低，sVCAM-Ι和TNF- a的PCI后血清水平较高。这些结果也表明在形成再狭窄的患者中，与PCI前水平相比，sRAGE的PCI后水平较低，TNF- a较高和sVCAM-Ι未改变。在未形成再狭窄的患者中sRAGE、TNF-a和SVACM_1的PCI前和PCI后水平相似。3. sRAGE 与 TNF- a 和 sVCAM-Ι 的相关性在未形成再狭窄的患者中，sRAGE和TNF- a的PCI前和PCI后血清水平之间的相关性在图10中示出。在未形成再狭窄的患者中，sRAGE的PCI前和PCI后血清水平与TNF- a的PCI前和PCI后血清水平负相关。在未形成再狭窄的患者中，sRAGE的PCI前和PCI后血清水平与sVCAM-Ι的PCI前和PCI后血清水平负相关(图11)。在形成PCI后再狭窄的患者中，在sRAGE的PCI前和PCI后水平与TNF- a和sVCAM-Ι的PCI前和PCI后水平之间观测到相似的关系(数据为示出)。这些相关性是显著的。
这些数据表明sRAGE的血清水平与TNF-α和sVCAM_l的血清水平负相关，无论PCI前和PCI状况或患者具有或不具有再狭窄。4.在鉴定将形成PCI后再狭窄的患者中，sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、预测值和准确度对于在ACS (NSTEMI)患者中PCI后再狭窄的诊断，PCI前血清sRAGE和AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、预测值和准确度的数据在图13中示出。在鉴定具有PCI后再狭窄的患者中，sRAGE试验的灵敏性和阴性预测值为100%，而特异性、阳性预测值和准确度分别为83%、85%和91 %。AGE/sRAGE试验的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为81%、94%、93%、84%和88%。一般而言，两个试验对PCI后再狭窄都具有预测价值，然而，在预测PCI后再狭窄中，sRAGE试验比AGE/sRAGE试验具有更高的灵敏性和阴性预测值。这些结果表明sRAGE和AGE/sRAGE试验都是在经历PCI操作后ACS (NSTEMI)患者 中PCI后再狭窄的预测因子/生物标记。与AGE/sRAGE试验相比，sRAGE试验具有更高的灵敏性和阴性预测值。讨论该研究的结果示出具有ACS的患者与对照受试者相比，具有较低水平的sRAGE和较高血清水平的TNF-a和sVCAM-Ι。该研究也证明在PCI后形成再狭窄的ACS患者与在PCI后不形成再狭窄的ACS患者相比，具有较低血清水平的sRAGE和较高血清水平的TNF- a和sVCAM-Ιο该问题源自为什么具有低sRAGE的受试者形成ACS和在PCI后形成再狭窄。如在结果中所示的，在血清sRAGE和TNF-a之间以及血清sRAGE和sVCAM-Ι之间存在逆相关。尽管不希望被理论所束缚，低sRAGE可经由血清TNF- a和sVCAM_l的水平增加诱导形成动脉粥样硬化(狭窄)。已知TNF-a活化粒细胞以生成活性氧物种(ROS) (15-17)。TNF-a也刺激内皮细胞中的NADPH-氧化酶生成ROS (18，19) AOS参与形成高胆固醇血的动脉粥样硬化(20-24)。活性氧物种增加了包括VCAM-I在内的粘附分子的表达(25-29)。粘附分子的循环浓度在动脉粥样硬化中升高(30)。粘附分子介导单核细胞与内皮细胞的粘附，并且它们迁移到血管壁(31)。单核细胞与内皮细胞的相互作用和粘附已被认为是动脉粥样硬化的形成和进展中的重要步骤(32)。在它们粘附于血管壁的内皮细胞衬层之后，单核细胞迁移到内膜，在那里它们被转化为活化的巨噬细胞，并且聚集脂质成为泡沫细胞，其为脂纹的主要成分(33)再一次，尽管不希望被理论所束缚，sRAGE水平的减少可使更多游离的RAGE与AGE相互作用。在小鼠平滑肌细胞(SMC)中AGE与RAGE相互作用可导致转化生长因子-β (TGF-β)的分泌，导致SMC迁移和细胞外基质形成，并因此调节动脉粥样硬化(34)。本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请表示本发明所属领域的技术人员的技术水平，并且通过引用并入本文，其程度如同每个单独的公开专利或专利申请特定地和单独地被指定通过弓I用并入。因此被描述的本发明，显而易见地可以以多种方式改变。这种变化不应被认为背离本发明的精神和范围，并且对本领域技术人员显而易见的是所有这类改变都意在包括在下列权利要求的范围内。
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权利要求
1.一种方法，其包括a)从受试者获得血清样品；b)将所述样品与SRAGE的抗体接触以在所述抗体和所述样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)测量形成的所述复合体以确定所述样品中sRAGE的量；和d)确定在所述受试者中形成急性冠状动脉综合征(ACS)，其中通过所述样品中sRAGE的水平指示形成ACS。
2.权利要求I所述的方法，使用具有检测器的仪器以测定所述样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的所述sRAGE之间形成的复合体。
3.权利要求2所述的方法，其中所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。
4.权利要求I到3任一项所述的方法，其中所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。
5.一种方法，其包括a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将所述样品与所述样品中的生物标记的抗体接触以在所述抗体和所述生物标记之间形成复合体；c)测量形成的所述复合体以确定所述样品中所述生物标记的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过所述样品中所述生物标记的量指示形成再狭窄。
6.权利要求5所述的方法，其中使用具有检测器的仪器以测定所述样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的所述生物标记之间形成的复合体。
7.权利要求6所述的方法，其中所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。
8.权利要求5到7任一项所述的方法，其中所述抗体是sRAGE、TNF-a ,sVCAM-1或AGE的抗体。
9.权利要求8所述的方法，其中形成的所述复合体的测量值确定所述样品中sRAGE、TNF- α、sVCAM-1 或 AGE 的量。
10.权利要求5到9任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
11.权利要求5到10任一项所述的方法，其中所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。
12.一种方法，其包括a)从患有ACS的受试者获得血清样品；b)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在所述抗体和所述样品中存在的sRAGE之间形成复合体；c)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以在所述抗体和所述样品中存在的AGE之间形成复合体；d)测量形成的所述复合体以确定所述样品中sRAGE的量和所述样品中AGE的量；和e)确定形成PCI后再狭窄，其中通过所述样品中AGE/sRAGE的比率指示形成再狭窄。
13.权利要求12所述的方法，其中使用具有检测器的仪器以测定所述样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的生物标记之间形成的复合体。
14.权利要求13所述的方法，其中所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。
15.权利要求12到14任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
16.权利要求12到15任一项所述的方法，其中所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。
17.一种方法，其包括给予受试者有效治疗量的sRAGE和/或药剂以治疗再狭窄，所述药剂Q)增加所述受试者中的sRAGE的量,和/或(ii)减少所述受试者中的AGE的量,所述再狭窄由患者血清样品中存在的低水平sRAGE或高AGE/sRAGE比指示。
18.权利要求17所述的方法，其中增加所述受试者中的sRAGE量的所述药剂选自雷米普利、阿伐他汀或甲氨喋呤。
19.权利要求18所述的方法，其中减少所述受试者中的AGE量的所述药剂是替米沙坦、阿伐他汀、氨基胍、吡多胺或匹马吉定。
20.一种试剂盒，其包括a)测定ACS患者血清中存在的sRAGE和AGE的量的说明书；b)测量sRAGE和AGE的血清浓度值的试剂；和其中再狭窄由所述样品中AGE/sRAGE的比率指示。
21.权利要求20所述的试剂盒，其中所述试剂是sRAGE和AGE的抗体。
22.权利要求21所述的试剂盒，其中AGE/sRAGE的比率通过下述步骤测定a)将所述样品的第一部分与sRAGE的抗体接触以在所述抗体和所述样品中存在的sRAGE之间形成复合体山)将所述样品的第二部分与AGE的抗体接触以在所述抗体和所述样品中存在的AGE之间形成复合体；c)测量形成的所述复合体以确定所述样品中sRAGE的量和所述样品中AGE的量；和d)确定形成PCI后再狭窄，其中通过所述样品中AGE/sRAGE的比率指示形成再狭窄。
23.权利要求22所述的试剂盒，其中使用具有检测器的仪器以确定所述样品中的复合体的量，所述检测器被设定以检测在所述抗体和所述样品中的生物标记之间形成的复合体。
24.权利要求23所述的试剂盒，其中所述仪器是分光光度计、荧光分光光度计或光学/电化学设备。
25.权利要求12到24任一项所述的试剂盒，其中所述ACS是NSTEMI、STEMI或急性心绞痛。
全文摘要
本发明涉及用于确定和/或预测和/或治疗患者中再狭窄的化合物、方法和/或试剂盒。所述患者是患有急性冠状动脉综合征(ACS)的受试者。用于诊断或预测受试者中再狭窄的化合物、方法和试剂盒涉及来自所述受试者的血清样品中sRAGE、TGF-α、sVCAM-1或AGE的水平。治疗涉及施用增加受试者中sRAGE的量和/或减少受试者中AGE的量的药剂，所述受试者具有基于血清测量的低水平sRAGE或高AGE/sRAGE比。
文档编号G01N33/566GK102821780SQ201080034244
公开日2012年12月12日 申请日期2010年6月2日 优先权日2009年6月3日
发明者凯拉什·普拉萨德 申请人:萨斯喀彻温大学