专利名称：一种快速判断人参是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法
一种快速判断人参是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法
技术领域：
本发明属于中药材及饮片真伪优劣鉴定领域，尤其是使用特征化学成分判定中药材及饮片质量优劣的鉴别方法。
背景技术：
硫磺熏蒸作为一种传统的中药材养护方法，具有增白、防虫、防腐和防霉变等作用，在中药材及饮片的加工贮藏过程中应用普遍。然而近年来的研究发现，中药材及饮片经硫磺熏蒸后会残留毒性二氧化硫，且固有生物活性成分会发生量或质的改变，造成药材和饮片质量改变，药理功效下降，甚至毒性增大。国家食品药品监督管理局在2004年已将硫磺熏蒸后的药材视为劣药。2005年版《中国药典》(一部)取消了山药、葛根等中药材的硫熏工艺。在2010版《中国药典》附录中增加了二氧化硫残留量的检测方法。这表明，国家对于中药材及饮片的加工贮藏已不再允许使用硫磺熏蒸的方法。人参是一种临床常用贵重中药材，部分不法商贩为降低生产成本，达到增白、防虫、防腐和防霉变的目的，在人参药材初加工时，仍会采用硫磺熏蒸的方法。因此，建立人参是否为硫磺熏蒸品的检测方法不但是确保人参疗效和临床用药安全的需要，也是打击不法商贩的重要技术手段。目前人们判断人参是否经过硫磺熏蒸的方法主要靠观察外观颜色，品尝气味，主观性强，缺乏客观依据。2010版《中国药典》附录IXU 二氧化硫残留量测定法中采用滴定法测定，灵敏度低，样品取样数量也较大(10克)。另外，人参药材经硫磺熏蒸后，随着存放时间的延长，气体挥散后有可能检测不到二氧化硫成分，出现假阴性结果。
发明内容本发明所要解决的技术问题是运用现代分析检测技术，使用特定的鉴别方法，判断人参是否经过硫磺熏蒸。本发明基本原理我们对经硫磺熏蒸前后的人参样品进行对比研究发现，人参经硫磺熏蒸后，会产生两个新的化学成分，这两个新成分在反相液相色谱上表现出比原人参皂苷类成分更短的保留时间，见图1-1、图1-2。质谱数据显示，这两个新成分的去质子准分子离子质荷比分别为897和1043，见图 2-1、图 2-2。
本发明即是通过测定这两个特征化学成分，判定人参是否经过硫磺熏蒸。本发明技术方案采用50 %甲醇超声波提取人参样品，提取液用聚四氟乙烯微孔滤膜过滤，滤液采用反相液相色谱-质谱联用分析技术测定，记录色谱图和质谱图，其特征为通过观察人参样品色谱图中是否存在去质子准分子离子质荷比为897和1043的两个色谱峰来判断人参是否采用硫磺熏蒸。如存在此两种去质子准分子离子的色谱峰，说明该人参样品已经硫磺熏蒸；如未出现，则可判断该人参未经硫磺熏蒸。本发明与现有的判断人参药材是否经过硫磺熏蒸的检测方法相比较，具有取样量小(0.1克)、专属性强、样品处理简单和结果准确度高等优点，是一种灵敏和专属的鉴别方法。
图1-1未经硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱图
图1-2硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱图，其中1，2为两个新产生的特征成分色谱峰
图2-1新产生的特征成分1质谱2-2新产生的特征成分2质谱图
图3-1实施例1中未经硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱3-2实施例1中硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (_)-MS色谱图，其中的特征成分色谱峰
图4-1实施例2中未经硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱4-2实施例2中硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱图，其中的特征成分色谱峰
图5-1实施例3中未经硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱5-2实施例3中硫磺熏蒸人参样品HPLC-ESI (-)-MS色谱图，其中的特征成分色谱峰具体实施方式实施例一1.色谱系统Waters ACQUITY UPLC-PDA 系统。色谱柱=Waters ACQUITY HSS T3 (2. IXlOOmm, 1.8μπι)。流动相组成为0. 甲酸水与0. 甲酸乙腈。梯度洗脱见表1。洗脱流速为 0. 6ml/min。柱温箱及样品室温度分别为35°C及10°C。样品进样量均为2 μ 1。表1梯度洗脱表
1，2为两个新产生 1，2为两个新产生 1，2为两个新产生2 3-245%95 2.质谱条件Waters Q-TOF Premier质谱仪；ESF离子源；喷雾气流速设为700I/h，温度 300°C。锥孔气流设为ΙΟΙ/h ；毛细管电压与锥孔电压分别设为3500V及45V。Q-TOF扫描速度为0.2s，扫描延迟间隔时间为0.02s;碰撞气体(氩气)压力为7.066X10_3!^。碰撞 (CID)能量分别设为5、4kV。3.人参样品测定溶液制备及检测人参样品0. lg，加50%甲醇5ml，室温超声提取60min，提取液经0. 2 μ m聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。4.色谱图见图3-1、图3-2，未经硫磺熏蒸人参样品色谱峰中不存在去质子准分子离子质荷比为897和1043的两个色谱峰，而经硫磺熏蒸人参样品色谱峰中存在这两个色谱峰。实施例二1.色谱系统Waters ACQUITY UPLC-PDA 系统。色谱柱Waters ACQUITY BEHC18(2. IX 100mm, 1.7μπι)。流动相组成为0.2%甲酸水与0.2%甲酸乙腈。梯度洗脱见表2。洗脱流速为 0. 6ml/min。柱温箱及样品室温度分别为35°C及10°C。样品进样量均为2 μ 1。表2梯度洗脱表
2.质谱条件Waters Q-TOF Premier质谱仪；ESF离子源；喷雾气流速设为700I/h，温度 300°C。锥孔气流设为ΙΟΙ/h ；毛细管电压与锥孔电压分别设为3500V及45V。Q-TOF扫描速度为0.2s，扫描延迟间隔时间为0.02s;碰撞气体(氩气)压力为7.066X10_3!^。碰撞 (CID)能量分别设为5、4kV。3.人参样品测定溶液制备及检测人参样品0. lg，加50%甲醇5ml，室温超声提取60min，提取液经0. 2 μ m聚四氟乙烯膜过滤，进样，记录色谱图。4.谱图见图4-1、图4-2，未经硫磺熏蒸人参样品色谱峰中不存在去质子准分子离子质荷比为897和1043的两个色谱峰，而经硫磺熏蒸人参样品色谱峰中存在这两个色谱峰。实施例三1.色谱系统Waters ACQUITY UPLC-PDA 系统。色谱柱Waters ACQUITY BEHC8 (2. 1 X 100mm, 1. 7 μ m)。流动相组成为水与甲醇。梯度洗脱见表3。洗脱流速为0. 6ml/min。柱温箱及样品室温度分别为35°C及10°C。样品进样量均为2 μ 1。表3梯度洗脱表
权利要求
1.一种快速判断人参是否经过硫磺熏蒸的鉴定方法，采用50%甲醇超声波提取人参样品，提取液用聚四氟乙烯微孔滤膜过滤，滤液采用反相液相色谱-质谱联用分析技术测定，记录色谱图和质谱图，其特征为通过观察人参样品色谱图中是否存在去质子准分子离子质荷比为897和1043的两个色谱峰来判断人参是否采用硫磺熏蒸。
2.如权利要求1所述的一种快速判断人参是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱方法的色谱柱填料为碳十八或碳八键合硅胶。
3.如权利要求1所述的一种快速判断人参是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱流动相为水相与乙腈有机相，或水相与甲醇有机相。
4.如权利要求3所述的一种快速判断人参是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱流动相中含有0-1 %的甲酸或乙酸。
5.如权利要求3所述的一种快速判断人参是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为反相液相色谱流动相水相和有机相进行梯度洗脱，方法为水相的变化范围为95% -5%。
6.如权利要求1所述的一种快速判断人参是否采用硫磺熏蒸的鉴定方法，其特征为质谱离子化方式为电喷雾，扫描模式为负离子扫描。
全文摘要
本发明属于中药材及饮片真伪优劣鉴定领域，尤其是使用特征化学成分判定中药材及饮片质量优劣的鉴别方法。硫磺熏蒸人参的不法行为时有发生，急需快速的鉴定方法。本发明基于人参经过硫磺熏蒸后产生两个新的分子量分别为898和1044的特征成分，采用50％甲醇超声波提取人参样品，采用反相液相色谱-质谱联用分析技术进行测定，通过观察人参样品色谱图中是否存在去质子准分子离子质荷比为897和1043的两个色谱峰来判断人参是否采用硫磺熏蒸。本发明可以快速判断人参是否经过硫磺熏蒸，保证临床用药的安全和有效。
文档编号G01N30/89GK102323370SQ20111013140
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月20日 优先权日2011年5月20日
发明者朱玲英, 李松林, 沈红, 贾晓斌 申请人:江苏省中医药研究院