专利名称：一种疏血通制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂的质量检测方法，具体地说，本发明涉及一种疏血通制剂的质量检测方法。
背景技术：
疏血通是以地龙和水蛭为原料的中药制剂，其剂型通常为注射液，用于治疗急性期脑梗塞，具有抗栓、溶栓、改善血液循环的作用。授权公告号CN1192782C，公告日2005年 3月16日，发明名称“治疗心脑血管疾病的注射剂的制造方法及其产品”的发明专利公开了该中药制剂及其制备方法。目前，疏血通注射液执行的是国家药品标准WS3-548 (Z-084) -2005 (Z)。但是，该标准中对药品成分的检测指标要求相对宽泛与模糊，除中国药典中规定的常规水针注射液所要求的检测项目外，针对具体成分的检测不够具体，如仅对其中的总煻、总多糖、总氨基酸进行了规定，未进一步对单糖、多糖及氨基酸、小分子肽的具体成分进行研究。此外，指纹图谱中仅明确了共有峰的归属(来源)，而未就具体的峰成分进行定性研究及归类。
发明内容
本发明的目的是提供一种疏血通制剂的质量检测方法。为了实现本发明目的，本发明提供一种疏血通制剂的质量检测方法，其特征在于， 该方法包括含量测定及指纹图谱鉴定，其中，含量测定包括氨基酸含量测定和糖含量测定； 指纹图谱鉴定包括氨基酸指纹图谱鉴定、糖指纹图谱鉴定和小分子物质指纹图谱鉴定；所述疏血通制剂用如下方法制得将水蛭和地龙分别用2 4倍体积的生理盐水浸提15 30小时，过滤，以体积百分书计，将33% 84%水蛭生理盐水提取液与16% 67%地龙生理盐水提取液的比例混合。本发明的质量检测方法，其中所述所述氨基酸含量测定包括如下步骤1)对照品溶液的制备分别精密称取IOmg或15mg氨基酸标准品，用0. IN盐酸定容至5ml，制得17种氨基酸储备液；所述氨基酸标准品选自天门冬氨酸标准品、甘氨酸标准品、苏氨酸标准品、丙氨酸标准品、酪氨酸标准品、胱氨酸标准品、苯丙氨酸标准品、异亮氨酸标准品、亮氨酸标准品、脯氨酸标准品、谷氨酸标准品、丝氨酸标准品、组氨酸标准品、精氨酸标准品、缬氨酸标准品、蛋氨酸标准品和赖氨酸标准品；然后分别精密吸取0. 5mL、ImL或2mL上述17种氨基酸储备液，混合后用0. IN盐酸定容至25mL，制得1号混合对照品溶液；2)标准曲线的制备精密量取2mL、3mL、4mL上述1号混合对照品溶液，分别用0. IN盐酸定容至5mL，得 2号、3号、4号混合对照品溶液；取2mL 3号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至5mL，得5 号混合对照品溶液；取2mL 4号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至5mL，得6号混合对照品溶液；取ImL 3号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至IOmL刻度，得7号混合对照品溶液；分别将上述1-7号混合对照品溶液注入液相色谱仪测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱4.6 X 150mm，3. 5μπι Zorbax Eclipse-AAA 柱；流速2mL/min，流动相组成A 相 pH7. 8 的 40mmol/L Na2HP04 溶液、B 相乙腈甲醇水=40 50 40 50 10， 优选为乙腈甲醇水=45 45 10，以A相与B相的体积比为0 100 100 0进行梯度洗脱；检测波长338nm、262nm ；柱温为40°C ；进样量1 μ L ；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于10000 ；3)游离氨基酸含量测定取ImL待测样品，用0. IN盐酸定容至5mL，制得未水解样品；按照步骤2)的色谱条件测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中氨基酸的含量，计算得出；4)总氨基酸含量测定精密量取0. 5mL待测样品，加入2mL含苯酚的6N盐酸，冲氩气10秒后，密封于110°C水解22h后，冷却至室温；然后加入lmL40% NaOH溶液，混勻，用0. IN盐酸定容至 5mL，制得水解样品；按照步骤2)的色谱条件测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中氨基酸的含量，计算得出。具体地，上述色谱条件中所述梯度洗脱的洗脱程序为0 1. 9min :A =100%, B 0 % ；1. 9 ~ 18. Imin :A :100 % 43 %、B :0 % 57 % ；18. 1 18. 6min :A :43 % 0 %、 B :57% 100% ；18. 6 22. 3min :A 0%, B :100% ；22. 3 23. 2min :A 100%、B 100% 0% ；23. 2 26min :A :100%, B :0%。将总氨基酸含量与游离氨基酸含量相减，即得多肽的含量。对于疏血通注射液(规格2mL/支)，以总氨基酸含量高于7. Omg/支、多肽含量高于2. Omg/支、游离氨基酸高于5. Omg/支作为疏血通注射液合格的限量。所述糖含量测定包括如下步骤1)对照品溶液的制备精密称取甘露糖对照品、半乳糖对照品各10mg，分别加水定容至5mL，制得甘露糖对照品溶液和半乳糖对照品溶液，备用；精密称取50mg葡萄糖对照品，加入ImL所述半乳糖对照品溶液和2mL所述甘露糖对照品溶液，然后加水定容至5mL，得1号混合对照品溶液；2)标准曲线的制备分别精密吸取0. 75mL、0. 5mL、0. 2mL、0. 2mL 1号混合对照品溶液，分别精密加入 0. 25mL、0. 5mL、0. 8mL、l. 8mL水，混勻，即得2号、3号、4号、5号混合对照品溶液；取0. 5mL 5号混合对照品溶液，精密加入0. 5mL水，混勻，即得6号混合对照品溶液；取0. 2mL 5号混合对照品溶液，精密加入0. SmL水，混勻，即得7号混合对照品溶液；分别精密吸取100 μ 1上述1-7号混合对照品溶液置于离心管中，加入0. 3Ν NaOH 溶液100 μ L和0. 5mol/L 1-苯基-3-甲基~5~吡唑啉酮的甲醇溶液200 μ L，用0. 3Ν NaOH 溶液调ρΗ至7. 2 8. 5 ；于70°C水浴反应45min，冷却至室温后，加入与上述0. 3N NaOH溶液使用量相当的0. 3N盐酸，混勻；再加入12. 5%的磷酸盐缓冲液，稀释反应溶液至1. OmL,混勻后加入5mL氯仿，涡旋30s，4500rpm离心5min，取上层水层，IOOOOrpm高速离心5min，
取上清液；分别将上述制得的上清液进行HPLC检测注入液相色谱仪测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱4.6 X 250mm, 5 μ m Phenomenex C18 柱；流速1. 2mL/min ；流动相A 相为 20mmol/L醋酸铵、B相为乙腈，以A相与B相的体积比为60 85 15 40进行梯度洗脱； 柱温为25°C ；进样量5μ L ；检测波长245nm ；理论塔板数以葡萄糖峰计算，不低于3000 ；3)游离糖含量测定取100μ 1待测样品，按步骤2~)中的处理方法制得上清液，在步骤2~)的色谱条件下测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中的糖含量，计算得出；4)总糖含量测定精密吸取ImL待测样品，加入2mL 6%的三氟醋酸溶液，充氩气后封口，110°C水解 3h ；然后减压蒸至无三氟醋酸味，加入ImL水溶解残渣，得多糖水解液；精密量取100 μ L多糖水解液，按步骤幻中的处理方法制得上清液，在步骤幻的色谱条件下测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中的糖含量，计算得出。具体地，上述色谱条件中所述梯度洗脱的洗脱程序为0 25min =A :85 % 72. 5%, B 27. 5% ；25 30min，A :72. 5% 60%，B :27. 5% 40%。将总糖含量与游离糖含量相减，即得多元糖的含量。对于疏血通注射液(规格2mL/支)，建议采用总糖含量高于8. Omg/支、游离糖含量高于7. Omg/支、多元糖含量高于0. 5mg/支，作为疏血通注射液合格的限量。本发明中，所述氨基酸指纹图谱用如下方法建立1)精密量取ImL疏血通制剂样品，用0. IN盐酸定容至5mL，制得未水解样品；吸取IyL该未水解样品注入液相色谱仪，制定未水解样品的氨基酸对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与氨基酸含量测定中的相同；2)精密量取0. 5mL疏血通制剂样品，按氨基酸含量测定中步骤4)的方法制得水解样品；取1 μ L该水解样品注入液相色谱仪，制定水解样品的氨基酸对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与氨基酸含量测定中的相同；3)指纹图谱鉴定将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定未水解样品的氨基酸指纹图谱和水解样品的氨基酸指纹图谱，分别与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产品。本发明中，所述糖指纹图谱用如下方法建立1)取100μ 1疏血通制剂样品，按照糖含量测定中步骤幻的处理方法制得上清液， 注入液相色谱仪，制定未水解样品的糖对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与糖含量测定中的相同；2)精密吸取ImL疏血通制剂样品，按照糖含量测定中步骤4)的处理方法制得上清液，注入液相色谱仪，制定水解样品的糖对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与糖含量测定中的相同；3)指纹图谱鉴定
将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定未水解样品的糖指纹图谱和水解样品的糖指纹图谱，分别与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产
P
ΡΠ O本发明中，所述小分子指纹图谱用如下方法建立1)精密量取ImL疏血通制剂样品，过0.45 μ m的微孔滤膜后，注入液相色谱仪，制定小分子对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱3. 5 μ m， 4. 6X 250mm Waters XBridge Amide柱；流速1. OmL/min ；流动相A相为 0. 3% 的冰醋酸乙腈溶液、B相为0. 3%的冰醋酸水溶液，以A相与B相的体积比40 95 5 60进行梯度洗脱；检测波长2Mnm ；进样量5μ L ；柱温30°C ；理论塔板数以次黄嘌呤峰计算，不低于 2000 ；2)指纹图谱鉴定将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定小分子指纹图谱，与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产品。具体地，上述色谱条件中所述梯度洗脱的洗脱程序为0 10min，A :95%，B
10 18min，A :95% 90%，B 10% ；18 26min，A :90%，B ；26 30min，A: 90% 85%，B :10% 15% ；30 56min，A :85% 40%，B :15% 60%。通过小分子指纹图谱，对主要共有峰进行了分析和指认，共指认了 10个共有峰， 分别为胸腺嘧啶(thymine)，尿嘧啶(uracil)，胸腺嘧啶核苷(thymidine)，2，-脱氧尿苷 Q，-deoxyuridine)，次黄嘌呤(hypoxanthine)，黄嘌呤(xanthine)，肌苷(inosine)，鸟嘌呤(guanine)，鸟嘌呤核苷(guanosine)，胞嘧啶核苷(cytidine)。本发明的疏血通制剂的质量检测方法，建立了通过HPLC测定疏血通注射液中氨基酸含量的方法，该方法简便、准确，且能够同时用于疏血通注射液中氨基酸含量的测定及氨基酸指纹图谱分析，适合作为疏血通中游离氨基酸和多肽氨基酸质量控制的方法；建立了柱前PMP衍生化HPLC分析方法测定疏血通注射液中游离糖和多糖含量的方法，该方法简便、准确，且能够同时用于疏血通注射液中游离糖和多糖含量的测定，及糖类指纹图谱分析，可作为疏血通注射液中糖类物质的日常质量控制的方法；建立了疏血通注射液中内源性小分子的HPLC指纹图谱分析方法，能够满足疏血通注射液中内源性小分子的指纹图谱分析的要求，可采用小分子HPLC指纹图谱来控制注射液的质量。另外，通过本发明方法对疏血通制剂的制备工艺进行质量检测，能够明确水蛭和地龙药材提取液、超滤前后、疏血通制剂中氨基酸、糖、内源性小分子这三大类物质有很好的相关性，超滤步骤是工艺中影响产品质量的关键步骤，需要严格控制。本发明的疏血通制剂的质量检测方法在结合国家对中药注射液相关要求的基础上，结合现有研究，进一步明确了注射液所含水溶性小分子成分的物质基础上，对指纹图谱中共有峰的性质进行了更进一步的研究阐述，对未知成分的峰(即目前指纹图中的未知成分，包括糖\腺苷\嘌呤等)的归属有了更进一步的认识。更有助于提高对产品制备工艺过程中的来源及过程控制，提升了产品本身的质量，从而提高临床用药的安全系数，也为进一步研究其作用机理奠定基础。
图1为本发明实施例1中1号混合对照品溶液(a)、未水解疏血通注射液游离氨基酸(b)及水解疏血通注射液总氨基酸(c)的HPLC图谱。图2为实施例2中1号混合对照品溶液(a)、未水解疏血通注射液游离糖(b)及水解疏血通注射液样品总糖(c)的HPLC谱图如图2所示图3为本发明的未水解疏血通注射液氨基酸对照指纹图谱。图4为本发明的水解疏血通注射液氨基酸对照指纹图谱。图5为本发明的未水解疏血通注射液糖对照指纹图谱。图6为本发明的水解疏血通注射液糖对照指纹图谱。图7为本发明的疏血通注射液小分子对照指纹图谱。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。以下实施例中使用的疏血通注射液均购自牡丹江友搏药业有限责任公司，该疏血通注射液的配比及制备方法参见授权公告号CN1192782C的实施例1，共10批次，规格2mL/支；各氨基酸标准品、D-甘露糖(Man)对照品、D-无水葡萄糖(Glc)对照品、半乳糖(Gal)对照品均购自中国药品生物制品检定所；。实施例1疏血通注射液样品中氨基酸含量测定1)对照品溶液的制备分别精密称取天门冬氨酸标准品、甘氨酸标准品、苏氨酸标准品、丙氨酸标准品、 酪氨酸标准品、胱氨酸标准品、苯丙氨酸标准品、异亮氨酸标准品、亮氨酸标准品、脯氨酸标准品各10mg，谷氨酸标准品、丝氨酸标准品、组氨酸标准品、精氨酸标准品、缬氨酸标准品、 蛋氨酸标准品和赖氨酸标准品各15mg，分别用0. IN盐酸定容至5ml，制得17种氨基酸储备液；按表1中的体积分别精密吸取上述制得的氨基酸储备液，混合后用0. IN盐酸定容至25mL，制得1号混合对照品溶液；表11号混合对照品溶液的配置
权利要求
1.一种疏血通制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括含量测定及指纹图谱鉴定，其中，含量测定包括氨基酸含量测定和糖含量测定；指纹图谱鉴定包括氨基酸指纹图谱鉴定、糖指纹图谱鉴定和小分子物质指纹图谱鉴定；所述疏血通制剂用如下方法制得将水蛭和地龙分别用2 4倍体积的生理盐水浸提 15 30小时，过滤，以体积百分数计，将33% 84%水蛭生理盐水提取液与16% 67%地龙生理盐水提取液的比例混合。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述氨基酸含量测定包括如下步骤1)对照品溶液的制备分别精密称取IOmg或15mg氨基酸标准品，用0. IN盐酸定容至5ml，制得17种氨基酸储备液；所述氨基酸标准品选自天门冬氨酸标准品、甘氨酸标准品、苏氨酸标准品、丙氨酸标准品、酪氨酸标准品、胱氨酸标准品、苯丙氨酸标准品、异亮氨酸标准品、亮氨酸标准品、脯氨酸标准品、谷氨酸标准品、丝氨酸标准品、组氨酸标准品、精氨酸标准品、缬氨酸标准品、 蛋氨酸标准品和赖氨酸标准品；然后分别精密吸取0. 5mL、ImL或2mL上述17种氨基酸储备液，混合后用0. IN盐酸定容至25mL，制得1号混合对照品溶液；2)标准曲线的制备精密量取2mL、3mL、4mL上述1号混合对照品溶液，分别用0. IN盐酸定容至5mL，得2号、 3号、4号混合对照品溶液；取2mL 3号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至5mL，得5号混合对照品溶液；取2mL4号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至5mL，得6号混合对照品溶液；取ImL 3号混合对照品溶液，用0. IN盐酸定容至IOmL刻度，得7号混合对照品溶液；分别将上述1-7号混合对照品溶液注入液相色谱仪测定峰面积，以峰面积为纵坐标， 浓度为横坐标，绘制标准曲线；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱4. 6 X 150mm, 3. 5 μ m Zorbax Eclipse-AAA 柱；流速:2mL/min，流动相组成=A 相pH7. 8的40mmol/L Na2HPO4溶液、B相乙腈甲醇水=40 50 40 50 10，以A 相与B相的体积比为0 100 100 0进行梯度洗脱；检测波长338nm、262nm ；柱温为 400C ；进样量1 μ L ；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于10000 ；3)游离氨基酸含量测定取ImL待测样品，用0. IN盐酸定容至5mL，制得未水解样品；按照步骤2)的色谱条件测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中氨基酸的含量，计算得出；4)总氨基酸含量测定精密量取0. 5mL待测样品，加入2mL含1 %苯酚的6N盐酸，冲氩气10秒后，密封于 110°C水解22h后，冷却至室温；然后加入ImL 40% NaOH溶液，混勻，用0. IN盐酸定容至 5mL，制得水解样品；按照步骤2)的色谱条件测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中氨基酸的含量，计算得出。
3.根据权利要求2所述的质量检测方法，其特征在于，色谱条件中所述梯度洗脱的洗脱程序为0 1. 9min :A 100 %、B :0 % ； 1. 9 18. Imin :A 100% -43%, B 0% -57% ； 18. 1 18. 6min :A :43% 0%、B :57% 100%;18· 6 22. 3min :Α :0%、Β :100%;22· 3 23. 2min :A :0% 100%、B :100% 0% ；23. 2 26min :A :100%, B :0%。
4.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述糖含量测定包括如下步骤1)对照品溶液的制备精密称取甘露糖对照品、半乳糖对照品各10mg，分别加水定容至5mL，制得甘露糖对照品溶液和半乳糖对照品溶液，备用；精密称取50mg葡萄糖对照品，加入ImL所述半乳糖对照品溶液和2mL所述甘露糖对照品溶液，然后加水定容至5mL，得1号混合对照品溶液；2)标准曲线的制备精密吸取0. 75mL、0. 5mL、0. 2mL、0. 2mL 1号混合对照品溶液，分别精密加入0. 25mL、 0. 5mL、0. 8mL、1. 8mL水，混勻，即得2号、3号、4号、5号混合对照品溶液；取0. 5mL 5号混合对照品溶液，精密加入0. 5mL水，混勻，即得6号混合对照品溶液；取0. 2mL 5号混合对照品溶液，精密加入0. SmL水，混勻，即得7号混合对照品溶液；精密吸取100 μ 1上述1-7号混合对照品溶液，分别加入0. 3NNaOH溶液100 μ L和 0. 5mol/L 1-苯基-3-甲基_5_吡唑啉酮的甲醇溶液200 μ L，用0. 3NNaOH溶液调ρΗ至 7. 2 8. 5 ；于70°C水浴反应45min，冷却至室温后，加入与上述0. 3NNaOH溶液使用量相当的0. 3N盐酸，混勻；再加入12. 5 %的磷酸盐缓冲液稀释反应溶液至1. OmL,混勻后加入5mL 氯仿，涡旋30s，4500rpm离心5min，取上层水层，IOOOOrpm高速离心5min，取上清液；分别将上述制得的上清液进行HPLC检测注入液相色谱仪测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱4. 6 X 250mm, 5 μ m Phenomenex C18 柱；流速1. 2mL/min ；流动相A 相为 20mmol/L醋酸铵、B相为乙腈，以A相与B相的体积比为60 85 15 40进行梯度洗脱； 柱温为25°C ；进样量5μ L ；检测波长245nm ；理论塔板数以葡萄糖峰计算，不低于3000 ；3)游离糖含量测定取ΙΟΟμΙ待测样品，按步骤幻中的处理方法制得上清液，在步骤幻的色谱条件下测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中的糖含量，计算得出；4)总糖含量测定精密吸取ImL待测样品，加入2mL 6%的三氟醋酸溶液，充氩气后封口，110°C水解池； 然后减压蒸至无三氟醋酸味，加入ImL水溶解残渣，得多糖水解液；精密量取100 μ L多糖水解液，按步骤幻中的处理方法制得上清液，在步骤幻的色谱条件下测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中的糖含量，计算得出。
5.根据权利要求4所述的质量检测方法，其特征在于，色谱条件中所述梯度洗脱的洗脱程序为0 25min :A :85% 72. 5%,B :15% 27. 5%；25 30min，A :72. 5% 60%， B 27. 5% 40%。
6.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述氨基酸指纹图谱用如下方法建立1)精密量取ImL疏血通制剂样品，用0.IN盐酸定容至5mL，制得未水解样品；取1 μ L 该未水解样品注入液相色谱仪，制定未水解样品的氨基酸对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与权利要求2相同；2)精密量取0.5mL疏血通制剂样品，按权利要求2步骤4)的方法制得水解样品；取 ι μ L该水解样品注入液相色谱仪，制定水解样品的氨基酸对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与权利要求2相同； 3)指纹图谱鉴定将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定未水解样品的氨基酸指纹图谱和水解样品的氨基酸指纹图谱，分别与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产品。
7.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述糖指纹图谱用如下方法建立1)取ΙΟΟμ1疏血通制剂样品，按照权利要求4步骤幻的处理方法制得上清液，注入液相色谱仪，制定未水解样品的糖对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与权利要求4相同；2)精密吸取ImL疏血通制剂样品，按照权利要求4步骤4)的处理方法制得上清液，注入液相色谱仪，制定水解样品的糖对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验与权利要求4相同；3)指纹图谱鉴定将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定未水解样品的糖指纹图谱和水解样品的糖指纹图谱，分别与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产品。
8.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述小分子指纹图谱用如下方法建立1)精密量取ImL疏血通制剂样品，过0.45 μ m的微孔滤膜后，注入液相色谱仪，制定小分子对照指纹图谱；其中，色谱条件与系统适用性试验为色谱柱3. 5 μ m，4. 6X250mm Waters XBridge Amide柱；流速1. OmL/min ；流动相A相为0. 3%的冰醋酸乙腈溶液、B相为0. 3%的冰醋酸水溶液，以A相与B相的体积比40 95 5 60进行梯度洗脱；检测波长2Mnm ；进样量5μ L ；柱温30°C ；理论塔板数以次黄嘌呤峰计算，不低于2000 ；2)指纹图谱鉴定将疏血通制剂产品在相同处理方法及色谱条件下测定小分子指纹图谱，与上述对照指纹图谱相比较，相似度大于0. 90的为合格产品。
9.根据权利要求8所述的质量检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序为 0 lOmin，A 95%, B 5% ；10 18min，A :95% 90%，B 10% ；18 26min，A 90%, B 10% ；26 30min，A :90% 85%，B 15% ；30 56min，A :85% 40%， B 60%。
全文摘要
本发明提供了一种疏血通制剂的质量检测方法，其特征在于，该方法包括含量测定及指纹图谱鉴定，其中，含量测定包括氨基酸含量测定和糖含量测定；指纹图谱鉴定包括氨基酸指纹图谱鉴定、糖指纹图谱鉴定和小分子物质指纹图谱鉴定；所述疏血通制剂用如下方法制得将水蛭和地龙分别用2～4倍生理盐水浸提15～30小时，过滤，以33％～84％水蛭生理盐水提取液与16％～67％地龙生理盐水提取液的比例混合。本发明方法更有助于提高对产品制备工艺过程中的来源及过程控制，提升了产品本身的质量，从而提高临床用药的安全系数，也为进一步研究其作用机理奠定基础。
文档编号G01N30/06GK102507792SQ20111036605
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者李振国 申请人:牡丹江友搏药业有限责任公司