专利名称：一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法
技术领域：
本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种检测牛组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪)中氟佐隆残留量的方法。
背景技术：
氟佐隆作为一种昆虫发育抑制剂，在农业中应用较广，现在兽医行业也作为杀虫剂用于牛羊体外寄生虫感染的防治。目前国外关于动物组织中氟佐隆检测的方法主要有放射测定法和高效液相色谱法，但多是未公开发表。国内有关动物性组织中氟佐隆测定的方法未见报道
发明内容
为了能检测牛组织中氟佐隆残留量，本发明提供了一种检测牛组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪)中氟佐隆残留量的方法，能检测牛组织中氟佐隆的残留水平。本发明所采用的技术方案是一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，是将牛组织样品经过提取、净化后，以乙腈-水为流动相，高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UVD)检测；液相色谱条件为色谱柱，Agilent C18, 5 u m, 150mmX4. 6mm i. d.;流动相，乙腈-水(68/32，V/V);流速:1. 2mL min—1 ;检测波长260nm ;柱温25°C ;进样体积20 u L。本发明中牛组织样品中氟佐隆的提取和净化推荐使用乙腈超声波提取，Florisil固相萃取柱净化。具体操作是将牛组织绞碎后称量，加乙腈IOmL匀浆并用乙腈洗涤匀浆机刀片。乙腈勻衆液超声波提取IOmin后4000rpm离心IOmin,上清液经氮吹仪浓缩至干，加入乙腈2. OmL漩涡振荡溶解残渣。Florisil小柱加入乙腈5mL活化、平衡后，溶解残渣的乙腈溶液加至Florisil小柱柱头，收集自然流出液后，加乙腈I. OmL洗涤，收集并合并流出液，经氮气吹干。残渣用乙腈I. OmL溶解后，过0. 22 m有机滤膜，供HPLC检测用。本发明方法所测得牛组织中氟佐隆的LOD为0. 005mg kg—1 ；L0Q脂肪为0. Olmg kg'其他组织为0. 02mg kg'能够满足关于动物性食品中氟佐隆药物残留分析的要求。
图I是Img I/1氟佐隆标准溶液色谱图。图2是肌肉组织添加氟佐隆色谱图；&空白肌肉；b为添加0.5mg kg—1的肌肉组织。图3是肾脏添加氟佐隆色谱图；c空白肾脏；d为添加0. 5mg kg—1的肾脏。图4是肝脏添加氟佐隆色谱图；e空白肝脏；f为添加0. 5mg k^1的肝脏。图5是脂肪添加氟佐隆色谱图；g空白脂肪；h为添加0. 5mg k^1的脂肪。
具体实施例方式在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。本发明中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为体积百分浓度。I.实验用牛的饲养和样品采集选取干奶期荷斯坦奶牛2头，连续7d饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，自由饮水。奶牛于第8d处死，分别采集肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织作为空白对照样品，-20°C保 存。2.样品处理本发明提取、净化步骤⑴牛组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪)自然解冻后绞碎，准确称取2.0±0.05g于50mL离心管中，加乙腈IOmL匀衆，并用乙腈5mL洗涤刀片，超声波提取IOmin后4000rpm离心 IOmin ；⑵上清液氮吹仪浓缩至干，加入乙腈2. OmL涡旋振荡溶解残渣；(3) Florisil小柱加入乙腈5mL活化，自然流出；⑷溶解残渣的乙腈溶液加至Florisil小柱柱头，自然流出，收集流出液后，加乙腈I. OmL洗脱，收集并合并流出液，氮吹仪浓缩至干；(5)加乙腈I. OmL涡旋振荡溶解残渣，过0. 22 y m有机滤膜后，供HPLC检测用。3.色谱条件及色谱分离行为色谱柱AgilentC18, 5 ii m, 150mmX 4. 6mm i. d.;流动相，乙腈-水(68/32，V/V);流速1. 2mL min—1 ;检测波长260nm ;柱温25°C ;进样体积20 u L。在本发明条件下，牛组织中氟佐隆与共存物质能够完全分离，空白样品及空白添加样品色谱分离图见图I和图2 — 5。4.标准曲线的绘制准确称取空白样品2. 0±0. 05g，置50mL聚丙烯离心管中，添加不同浓度的标准工作液各IOOii L，使在空白牛组织样品中添加浓度分别为10. 0,5. 0,2. 0,1. 0,0. 5,0. 2和O.OZmg.kg-1，经上述样品提取与净化后，取20yL进行HPLC检测。每个浓度重复5次。以氟佐隆添加浓度为自变量，氟佐隆平均峰面积为因变量，绘制标准曲线。线性回归方程为y=(71. 011±0. 31) X+ (I. 9317±0. 46)，相关系数 0. 9999，线性范围为 0. 02 10. Omg kg'在本发明条件下，在标准品浓度为0. 02 10. Omg kg—1范围内氟佐隆峰面积(y)与其浓度(X)呈线性相关，且线性关系良好。5.回收率及精密度的测定准确称取样品2. 0±0. 05g置50mL聚丙烯离心管中，添加不同浓度的标准工作液各100 u L，使在空白牛组织中添加浓度分别为10. 0，I. 0,0. 2和0. 02mg kg'每个浓度设置6个平行。经上述样品提取与净化后，取20 UL进行检测。根据氟佐隆实际测定量与理论添加量的比值计算添加回收率。在同日内不同时间用同一条标准曲线及同一台HPLC分析，重复6次测定，求得日内(批内)精密度。在一周内不同日以不同的标准曲线及同一台HPLC分析，重复6次测定，求得日间(批间)精密度。本发明方法中测定牛组织中氟佐隆的添加回收率及精密度的结果见表I。在0. 02 10. Omg kg—1范围内，肌肉样品回收率在81. 25% 95. 13% ;肝脏样品回收率在81. 00% 95. 51% ;肾脏样品回收率在80. 76% 95. 39% ;脂肪样品回收率在80. 84% 95. 86%。批内精密度在I. 37% 5. 77%之间，批间精密度在2. 58% 6. 24%之间。表明该方法准确、稳定可靠，完全能满足牛组织中氟佐隆药物残留分析方法的要求。表I牛组织中氟佐隆测定的添加回收率及精密度(n=6)
权利要求
1.一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，是将牛组织样品经过提取、净化后，以乙臆_水为流动相，闻效液相色谱_紫外检测法检测； 液相色谱条件为色谱柱，Agilent C18, 5 u m, 150mmX4. 6mm i. d.;流动相，体积比为68/32的乙腈-水；流速:1. 2 mL min—1 ;检测波长:260 nm ;柱温25°C ;进样体积:20mL。
2.根据权利要求I所述的检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，其特征在于牛组织样品中氟佐隆的提取和净化使用乙腈超声波提取，Florisil固相萃取柱净化。
3.根据权利要求2所述的检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，其特征在于所述牛组织样品中氟佐隆的提取和净化具体操作是将牛组织绞碎后称量，加乙腈10 mL匀浆并用乙腈洗漆勻衆机刀片，乙腈勻衆液超声波提取10 min后4000 rpm离心10 min,上清液经氮吹仪浓缩至干，加入乙腈2. 0 mL镟润振荡溶解残洛；Florisil小柱加入乙腈5 mL活化、平衡后，溶解残渣的乙腈溶液加至Florisil小柱柱头，收集自然流出液后，加乙腈1.0 mL洗涤，收集并合并流出液，经氮气吹干；残渣用乙腈1.0 mL溶解后，过0.22 Pm有机滤膜，供HPLC检测用。
全文摘要
本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种检测牛组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪)中氟佐隆残留量的方法。该方法是将牛组织样品经过提取、净化后，以乙腈-水为流动相,高效液相色谱-紫外检测法检测；液相色谱条件为色谱柱，AgilentC18，5μm，150mm×4.6mmi.d.；流动相，体积比为68/32的乙腈-水；流速1.2mL·min-1；检测波长260nm；柱温25℃；进样体积20mL。本发明方法所测得牛组织中氟佐隆的LOD为0.005mg·kg-1；LOQ脂肪为0.01mg·kg-1，其他组织为0.02mg·kg-1，能够满足关于动物性食品中氟佐隆药物残留分析的要求。
文档编号G01N30/02GK102645495SQ20121013729
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月6日 优先权日2012年5月6日
发明者刘学, 周明荣, 崔卫波, 张雨梅, 殷俊, 胡成云, 鹿欣仑 申请人:扬州大学