专利名称：一种鱼粉中肌胃糜烂素的检测方法
技术领域：
本发明涉及生物领域，具体涉及ー种鱼粉中肌胃糜烂素的检测方法。
背景技术：
肌胃糜烂素是鱼粉在直火加热制作过程中，可能是由于组胺或者是组氨酸与赖氨酸在高温下的反应产物。配合鱼粉饲料中的肌胃糜烂素是导致鸡、鸭、鱼等养殖动物发生肌胃糜烂、食欲不振、产卵率下降、吐黑、死亡等现象的主要原因，而且肌胃糜烂素造成鸡鸭等动物发病率和死亡率均偏高。肌胃糜烂素引起小鸡发病现象在国内也有相应报道，2000年4月，宁波市某鸡场喂食了含有肌胃糜烂素的鱼粉配合饲料，引起小鸡大量死亡的现象。2005年，有两个中型肉鸡养殖场同时爆发肉鸡肌胃糜烂病症。2008年-2009年期间，在辽宁，山东，河南，江苏，安徽等地的鸡养殖场，给小鸡喂食鱼粉配合饲料后，小鸡发生严重的 肌胃层糜烂、吐黑等鸡病理现象。虽然经治疗未造成小鸡大量死亡，但是治疗使用的药剂会给食用此类禽肉的人们带来健康的隐患。所以开发肌胃糜烂素的检测技术是当务之急。作为监测鱼粉肌胃糜烂素的方法也相继被开发。日本东京大学教授伊藤教授开发了肌胃糜烂素的OPA诱导后的荧光检测技木，此方法需要复杂的诱导化的前处理过程，而且需要三步色谱纯化过程。Hsu利用免疫化学方法检测肌胃糜烂素，但是需要特殊的抗体。Marcla开发了放射标记的放射性标记的免疫測定法，但是这些方法都需要特殊的抗体，抗体制作起来比较困难，而且标记实验过程需要特殊的设施来进行实验操作。Manosalva开发了应用单克隆抗体ELISA检测鱼粉中的肌胃糜烂素的方法，但是这方法也需要特殊抗体。到目前为止，国内外没发现有鱼粉中肌胃糜烂素的简易检测方法的相关报道。本发明涉及的鱼粉中的肌胃糜烂素的方法，是通过滤纸电泳层析方法，能有效的达到肌胃糜烂素与干扰物的分离，井能通过待测样品与标准样品面积比进行定量分析，检测浓度最低限值达到lOppm。
发明内容
本发明的目的是提供一种鱼粉加工中产生的有害物质肌胃糜烂素的检测方法。本发明另一目的提供鱼粉中肌胃糜烂素的提取方法。本发明的目的是这样实现的
本发明提供的一种鱼粉中肌胃糜烂素的检测方法，具有以下步骤
1)在鱼粉中加入5倍重量的O.lmol/L HC1，混合搅拌10分钟；
2)通过离心分离，得到含有肌胃糜烂素的上清液；
3)将上清液点到滤纸上，通过电气泳动装置分离肌胃糜烂素及其它干扰物；
4)干燥后，分离后的肌胃糜烂素通过A发色液和B发色液双重发色喷雾，通过发色后所测样品与标准样品的比值对肌胃糜烂素定性定量分析；所述A发色液是20mM ニ甲基对苯ニ胺和200mM亚硝酸钠混合溶液，其体积比是I: I，所述B发色液是10wt%无水碳酸钠溶解到5wt%こ醇溶液的混合溶液。上述步骤2)中经过12000rpm的离心机离心分离10 15分钟。上述步骤3)中在滤纸同时上样7个样品。上述步骤3)中电气泳动装置的电压为800V，工作时间为15分钟。上述步骤3)中干扰物是组胺、组氨酸、2-甲基-咪唑、4-甲基-咪唑。上述步骤4)中干燥是在恒温干燥箱100°C干燥5分钟。上述步骤4)中发色后通过所测样品的面积与标准样品的面积比进行定量分析。本发明的有益效果
本发明通过电气泳动在10-15分钟达到肌胃糜烂素与干扰物的分离，并在30分钟内同时测定7个样品，而且不需要预处理，并且检量限值能达到lOppm，简单迅速的測定技术能应用在鱼粉加工厂，饲料加工厂，鸡鸭养殖场等。本方法能从鱼粉中的组胺，组氨酸等干扰物中有效快速分离肌胃糜烂素，并且通过待测样品与标准样品面积比进行定量分析。
图I是肌胃糜烂素的分离示意图。
具体实施例方式实施例I :鱼粉的制备 材料沙丁鱼(产地日本)
鱼粉的制备
I、沙丁鱼粉碎后放置在25°C 24h,然后121 °C蒸煮15分钟，130°C干燥3h，粉碎。2、肌胃糜烂素的提取
称取200mg鱼粉，加入5倍量O. lmol/L HCl，混合搅拌10分钟。3、离心分离
在12000rpm离心IOmin,取上清液。4、电泳
每ー样品取5 μ 1，吸到滤纸片，设定在电泳用滤纸上，然后在800V电压电泳15分钟。5、干燥
在100°c恒温干燥箱干燥5min。6、发色
分离后的肌胃糜烂素通过A发色液和B发色液双重发色喷雾，A发色液是20mM ニ甲基对苯ニ胺和200mM亚硝酸钠混合溶液，其体积比是I: I，B发色液是10wt%无水碳酸钠溶解到5wt%こ醇溶液的混合溶液。7、画像处理定量分析
通过待测样品与标准样品的面积比进行定量分析。
权利要求
1.一种鱼粉中肌胃糜烂素的检测方法，其特征在于具有以下步骤 1)在鱼粉中加入5倍重量的O.lmol/L HC1，混合搅拌10分钟； 2)通过离心分离，得到含有肌胃糜烂素的上清液； 3)将上清液点到滤纸上，通过电气泳动装置分离肌胃糜烂素及其它干扰物； 4)干燥后，分离后的肌胃糜烂素通过A发色液和B发色液双重发色喷雾，通过发色后所测样品与标准样品的比值对肌胃糜烂素定性定量分析；所述A发色液是20mM ニ甲基对苯ニ胺和200mM亚硝酸钠混合溶液，其体积比是I: I，所述B发色液是10wt%无水碳酸钠溶解到5wt%こ醇溶液的混合溶液。
2.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于上述步骤2)中经过12000rpm的离心机尚心分尚10 15分钟。
3.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于上述步骤3)中在滤纸同时上样7个样品O
4.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于上述步骤3)中电气泳动装置的电压为·800V，工作时间为15分钟。
5.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于上述步骤4)中干燥是在恒温干燥箱·100°C干燥5分钟。
6.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于上述步骤4)中发色后通过所测样品的面积与标准样品的面积比进行定量分析。
全文摘要
本发明公开了一种鱼粉中肌胃糜烂素的检测方法，利用电泳方法从饲料鱼粉中快速分离肌胃糜烂素,并进行定量分析的方法；本发明能从鱼粉中的组胺,组氨酸等干扰物中有效分离肌胃糜烂素,并且通过待测样品与标准样品面积比进行定量分析；在鱼粉加工厂及饲料厂及鸡鸭鱼养殖场在控制肌胃糜烂素方面得到广泛应用。
文档编号G01N21/25GK102692384SQ20121016306
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者张宏梅, 谭竹钧, 陶志华, 韩雅莉 申请人:广东工业大学