专利名称：一种丹灯通脑药物制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明属于中药制备质量控制技术领域，具体涉及一种丹灯通脑药物制剂的质量控制方法。
背景技术：
丹灯通脑胶囊与软胶囊是申请人开发的产品，主要由丹参、灯盏细辛、川芎和粉葛或葛根经提取而成的纯中药(彝药)复方制剂，具有活血化淤、祛风通络作用，临床上用于淤血阻络所致的中风、中经络证。后又开发了丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊，并成为国药准字号药品，其国家药品标准编号分别为WS-10751 (ZD-0751 )-2002和WS-10721(ZD-0721)-2002。2009年，国家食品药品监督管理局批准国内3家企业申报的丹灯通脑片改剂型品种上市，标准编号分别为YBZ06112009、YBZ04332009和YBZ06512009。现有技术对丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊、丹灯通脑片的质量控制标准含量测定项下均为“葛根素”的测定，未对组方中主要活性成分野黄芩苷进行定量控制，无法体现药品质量可控的原则。究其原因之所以之测定葛根素，是基于彝族医药理论实施定量控制的。按彝族八卦进行辩解可分为三组，第一组灯盏细辛，具有舒筋活血、散瘀消肿、散寒的功用；第二组川芎、丹参具有化瘀生新、祛风还阳的作用；第三组粉葛或葛根，具有升阳解表、解肌生津的作用。因此，根据彝药理论及对此处方的论述，丹灯通脑口服制剂的药物组成中，灯盏细辛的作用最为重要，所以野黄芩苷作为质量控制的标准指标最为科学。而事实上，灯盏细辛，又名灯盏花，为菊科多年生草本植物，其味甘、温。野黄芩苷(化学名4’，5，6-三羟基黄酮-7-0-葡萄糖醛酸甙)是从灯盏细辛中提取的活性成分。药理研究表明，野黄芩苷具有改善脑血循环，增加脑血流量，降低血管阻力和抗血小板凝聚的作用，在丹灯通脑药物制剂中为主要活性成分，对其疗效发挥至关重要的作用。虽然现有技术中也涉及野黄芩苷含量检测方法，但主要集中在药材以及以灯盏细辛为主要原料的药物制剂中的野黄芩苷含量测定。比如药材的测定，2010年版《中华人民共和国药典》中，记载了灯盏细辛(灯盏花)和半枝莲中野黄芩苷含量的测定方法。提取物测定，灯盏花素提取物中野黄芩苷含量的测定方法。还有灯盏细辛注射液、注射用灯盏花素中野黄芩苷含量的测定方法。主要原理均是照高效液相色谱法测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以一定溶液为流动相，波长335nm条件下检测，经过一系列的检测步骤实现了对野黄芩苷的测定，但是，该方法直接用于含有野黄芩苷的丹灯通脑复方药物制剂中野黄芩苷的定量测定存在许多问题，比如背底不干净，干扰大，定性困难，定量不准确的问题。因此，开发一种针对丹灯通脑组方中活性成分野黄芩苷的精确测定对控制这类药品的质量就显得非常必要。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术丹灯通脑口服制剂活性成分定量控制的缺陷，提供一种工艺简便，测量准确，稳定可靠的野黄芩苷HPLC测定方法。
本发明的目的是这样实现的，所述的丹灯通脑药物制剂由丹参50(Γ600重量份、灯盏细辛50(Γ600重量份、川芎50(Γ600重量份、葛根80(Γ900重量份和适宜辅料组成，其质量控制方法包括葛根素的检测和野黄芩苷的检测，所述的葛根素的检测参照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法标准进行检测；所述的野黄芩苷的检测方法包括
Α、色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
B、对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 05、· 15mg的溶液；
C、供试品溶液的制备取制剂中的内容物O.Γ0. 2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，力口四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，超声处理15min，用微孔滤膜滤过，取滤液为供试品溶液；
D、测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 10μ 1，注入液相色谱仪， 测定，计算得到供试品中野黄芩苷的含量。丹灯通脑口服制剂是由丹参、灯盏细辛、川芎和粉葛或葛根经提取，加适宜辅料制成的复方口服制剂。根据彝药理论对此处方的论述，组方中，灯盏细辛为君药，对该类制剂药效的发挥至关重要。而野黄芩苷为灯盏细辛的主要有效成分，建立准确、稳定、可靠的含量测定方法，对全面控制该类制剂质量意义重大。本发明将HPLC技术应用于丹灯通脑药物制剂中野黄芩苷的检测，通过样品前处理、色谱条件及系统适用性深度研究，有效避开处方中其他活性成分及添加辅料的干扰，建立了丹灯通脑药物制剂准确、稳定、可靠的野黄芩苷测定方法，在丹灯通脑口服制剂中葛根素含量测定的现有技术基础上，增加了一种利用HPLC对丹灯通脑口服制剂中野黄芩苷含量进行测定的方法，从而更加全面、有效地控制样品中占主导地位的活性成分的内在质量，为该类中药制剂全面质量控制提供良好基础。本发明的适用范围丹灯通脑组方+适宜辅料制成的口服制剂，包括颗粒、胶囊、软胶囊、片、丸等剂型的质量控制。经试验研究，本发明测定方法准确度试验、精密度试验、专属性试验、线性试验、耐用性试验均符合国家药典相关规定要求，提高了丹灯通脑口服制剂的质量控制标准，从而确保了该制剂的临床疗效。
图I为本发明线性试验之线性图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。本发明丹灯通脑药物制剂的质量控制方法，所述的丹灯通脑药物制剂由丹参500^600重量份、灯盏细辛50(Γ600重量份、川芎50(Γ600重量份、葛根80(Γ900重量份和适宜辅料组成，其质量控制方法包括葛根素的检测和野黄芩苷的检测，所述的葛根素的检测参照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法标准进行检测；所述的野黄芩苷的检测方法包括
Α、色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
B、对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 05、· 15mg的溶液；
C、供试品溶液的制备取制剂中的内容物O.Γ0. 2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，力口四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，超声处理15min，用微孔滤膜滤过，取滤液为供试品溶液；
D、测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 10μ 1，注入液相色谱仪，测定，计算得到供试品中野黄芩苷的含量。所述的质量控制方法，还包括准确度试验，取相当于野黄芩苷Img的测试品，分别精密称取适量9份，按加样回收率测定法标准，按规范加入适量野黄芩苷标准品，稀释后用刻度吸管滴加，按上述方法测定，计算。所述超声处理功率为200 300 W、频率为35 45 KHz。优选的处理功率为230 270W、频率为38 42KHz。所述微孔滤膜的过滤孔径为O. 40 0· 50 μ m。所述的四氢呋喃-甲醇混合液的比例为I :0.5 1.5，所述的甲醇浓度为99. (Γ99. 9% ;优选的四氢呋喃-甲醇混合液的比例为I :1，所述的甲醇浓度为99. (Γ99. 9%。所述的流动相甲醇一磷酸溶液混合液比例为O. 3^0. 5 :0. 5^0. 7。优选的流动相甲醇一磷酸溶液混合液比例为O. 4 :0. 6。所述的质量控制方法适用于丹灯通脑的片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂。
所述的葛根为粉葛或野葛或其他类别葛根，不受产地、品种的限制。实施例I
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为O. 3 :0. 7的甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 05mg的溶液；
供试品溶液的制备取片剂研细的内容物O. 15g，精密称定为O. 14998g,置于25ml容量瓶中，加体积比为I :0. 5的四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，在功率为200W、频率为35KHz下超声处理15min，用孔径为O. 4μ m的微孔滤膜滤过，取滤液，得测试品；
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪，测定结果为 5. 13mg/g。实施例2
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为O. 4 : 0.6的甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品适量，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 15mg的溶液；
供试品溶液的制备取散剂内容物O. 10g，精密称定为O. 1003 g，置于25ml容量瓶中，加体积比为I :1的四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，在功率为230W、频率为38KHz下超声处理15min，用孔径为O. 5μπι的微孔滤膜滤过，取滤液，得测试品；
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定结果为 6. 09mg/kgo
实施例3
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为O. 5: O. 5的甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. Img的溶液；
供试品溶液的制备取颗粒剂内容物O. 2g，精密称定为O. 1999g，置于25ml容量瓶中，加体积比为I :1. 5的四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，在功率为270W、频率为42KHz下超声处理15min，用孔径为O. 5 μ m的微孔滤膜滤过，取滤液，得测试品；
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8 μ 1，注入液相色谱仪，测定结果为 6. 21mg/g。实施例4·
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为O. 3 :0. 7的甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 09mg的溶液；
供试品溶液的制备取胶囊剂中的内容物O. 15g，精密称定为O. 14997 g，置于25ml容量瓶中，加体积比为I :1的四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，在功率为300W、频率为45KHz下超声处理15min，用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜滤过，取滤液，得测试品；
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各7 μ 1，注入液相色谱仪，测定结果为 6. 17mg/g。实施例5
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为O. 4 :0. 6的甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ；
对照品溶液的制备精密称野黄芩苷对照品适量，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 12mg的溶液；
供试品溶液的制备取丸剂的内容物O. 2g，精密称定为O. 2004 g，置于25ml容量瓶中，加体积比为I :1的四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，在功率为280W、频率为40KHz下超声处理15min，用孔径为O. 5 μ m的微孔滤膜滤过，取滤液，得测试品；
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6 μ 1，注入液相色谱仪，测定结果为 5. 58mg/g。实验例I
本发明方法对丹灯通脑药物制剂中野黄芩苷含量测定之准确度试验
I、主要材料与仪器
I.I丹灯通脑胶囊样品云南施普瑞生物工程有限公司，批号C1111001 C1811001C1711002。I. 2野黄芩苷标准品中国药品生物制品检定所提供，批号110842-200504
I.3甲醇等所用试剂均为色谱纯。I. 4高效液相色谱仪美国Agilent公司，Agilent 1100型。I. 5电子天平美国METTLER公司，AES260型(十万分之一)。
2、测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一 O. 1%磷酸溶液(40 60)为流动相；检测波长为335nm。理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加I :1的四氢呋喃-甲醇溶液制成每Iml含野黄芩苷O. Img的溶液。供试品溶液的制备取胶囊剂中的内容物、片剂、丸剂或颗粒适量，精密称定，置于25ml容量瓶中，加I :1四氢呋喃-甲醇溶液至刻度，超声处理(功率250W，频率40kHz)15min,滤过,取续滤液。
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10 μ 1，注入液相色谱仪，按常规程序测量。表I准确度试验结果
权利要求
1.一种丹灯通脑药物制剂的质量控制方法，所述的丹灯通脑药物制剂由丹参500飞00重量份、灯盏细辛50(Γ600重量份、川芎50(Γ600重量份、葛根80(Γ900重量份和适宜辅料组成，其质量控制方法包括葛根素的检测和野黄芩苷的检测，所述的葛根素的检测参照高效液相色谱法标准进行检测；其特征在于所述的野黄芩苷的检测方法包括 Α、色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一磷酸溶液为流动相，检测波长为335nm，理论踏板素按野黄芩苷峰计算应不低于5000 ； B、对照品溶液的制备精密称定野黄芩苷对照品，加四氢呋喃-甲醇制成每Iml含野黄芩苷O. 05、· 15mg的溶液； C、供试品溶液的制备取制剂中的内容物O.Γ0. 2g，精密称定，置于25ml容量瓶中，力口四氢呋喃-甲醇混合液至刻度，超声处理15min，用微孔滤膜滤过，取滤液为供试品溶液； D、测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 10μ 1，注入液相色谱仪，测定，计算得到供试品中野黄芩苷的含量。
2.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征在于所述的质量控制方法，还包括准确度试验，取相当于野黄芩苷Img的测试品，分别精密称取适量9份，按加样回收率测定法标准，按规范加入适量野黄芩苷标准品，稀释后用刻度吸管滴加，按上述方法测定，计算。
3.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述超声处理功率为200 300 W、频率为35 45 KHz0
4.根据权利要求I或3所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述的超声处理功率为23(T270W、频率为38 42KHz。
5.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述微孔滤膜的过滤孔径为O. 4(Γ0. 50 μ m。
6.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述的四氢呋喃-甲醇混合液的比例为I :0. 5^1. 5，所述的甲醇浓度为99. (Γ99. 9%。
7.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述的四氢呋喃-甲醇混合液的比例为I :1，所述的甲醇浓度为99. (Γ99. 9%。
8.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述的流动相甲醇一磷酸溶液混合液比例为O. 3^0. 5 :0. 5^0. 7。
9.根据权利要求8所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征是所述的流动相甲醇一磷酸溶液混合液比例为O. 4 :0. 6。
10.根据权利要求I所述的丹灯通脑中活性成分野黄芩苷的质量控制方法，其特征在于所述的质量控制方法适用于丹灯通脑片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂或丸剂。
全文摘要
本发明公开了一种丹灯通脑药物制剂的质量控制方法，所述的丹灯通脑药物制剂由丹参500~600重量份、灯盏细辛500~600重量份、川芎500~600重量份、葛根800~900重量份和适宜辅料组成，其质量控制方法包括葛根素的检测和野黄芩苷的检测，所述的葛根素的检测参照中国药典2000年版一部附录ⅥD高效液相色谱法标准进行检测；所述的野黄芩苷的检测方法为色谱条件及系统适用性试验；制备对照品溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪测定，计算得到野黄芩苷含量。本发明质量控制方法在原有标准的基础上，对主要活性成分野黄芩苷进行了定量测定。本发明具有可操作性、简单易行、能有效控制丹灯通脑药物制剂质量。
文档编号G01N30/02GK102841153SQ201210340298
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月14日 优先权日2012年9月14日
发明者龙祥, 杨瑜, 张迎春, 王朝军, 胡志祥, 何应心 申请人:云南施普瑞生物工程有限公司