一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非甾体抗炎药的筛查方法及其使用的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种检测祛风湿中成药和保健食品中昔康类非甾体抗炎药的方法及其使用的试剂盒，旨在提供一种专属、灵敏、简便、现场可操作性强的快速检验方法；该方法由以下步骤组成：（1）取1份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂3ml，振摇1min，得到供试品粗提液；（2）用有机系微孔滤膜滤过供试品粗提液得到供试液；（3）取供试液1.5ml置盛有15mg香草醛的干燥试管中，使香草醛溶解；（4）向试管中加入浓硫酸2ml，振摇数次；（5）将试管置于微沸水浴中加热约1min，使有机溶剂尽量挥尽，取出放冷至室温；（6）沿试管壁缓缓加入无水乙醇5ml；（7）立即观察1min内液面交界处及乙醇层的颜色变化。
【专利说明】一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法及其使用的试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明公开一种检测方法，具体是一种利用化学试剂检测祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的方法，属于医药检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]风湿及类风湿性关节炎为常见病，是骨关节的一种慢性炎症性和破坏性疾病，属于顽固性疾病，患者需要长期服药以控制病情。传统中药在我国有着几千年的历史，并以毒副作用小、安全性高深受百姓信赖，因此越来越多的人选用中药来治疗此类疾病。但是中药起效慢，止痛效果差，短期疗效不如西药明显，所以，社会上有些不法之徒为了牟取暴利，以中成药、保健食品之名非法添加化学药品。这些化学药品虽疗效迅速，但长期服用不良反应较大。
[0003]具有1，2-苯并噻嗪结构(如图1所示)的非留体抗炎药被称为“昔康类”，该类药物通过抑制炎症介质合成酶(环氧合酶)来抑制前列腺素的合成，从而达到抗炎的作用，代表药物有吡罗昔康、美洛昔康、氯诺昔康、辛诺昔康、安吡昔康、替诺昔康、舒多昔康和伊索昔康。昔康类药物，具有解热镇痛抗炎的作用，也兼有抗风湿的疗效，使用这类药物可能产生恶心、胃痛或胃肠道出血，甚至会引起肝功能异常等不良反应，对于消化道溃疡、肾功能不全、心功能不全、高血压、哮喘以及凝血机制障碍者则会造成更加严重的危害。这类药物若非法掺杂在祛风湿中成药和保健食品中，由于无法准确科学控制药量，极易引起严重不良反应，给广大患者造成危害。
[0004] 申请人:在专项打击非法添加化学药品活动中发现，部分祛风湿中成药中违法添加昔康类非留体抗炎药，且往往以添加吡罗昔康为主。查处在祛风湿类中成药和保健食品中擅自添加昔康类化学药品的违法行为，是一项长期的任务，涉及范围广，检验工作量大。
[0005]目前，检验中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药掺杂的方法主要有FeCl3M色法，薄层色谱法，高效液相色谱法，液相色谱-质谱联用法。其中FeCl3显色法虽简单易行，但该法对昔康类的不同药物显不同的颜色，难以统一标准对一整类药物进行检查，且易受样品本身颜色的影响；薄层色谱法简便经济，但色谱分辨率较低，而中药制剂的干扰因素又多，易产生误判；高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法灵敏度高，结果准确可靠，但不适合流动性大的现场检验，在广大的农村地区和经济欠发达的中小城市开展检验活动有一定的难度。
【发明内容】
[0006]针对上述问题，本发明旨在提供一种克服现有技术存在的缺点，分析成本低，不需要使用贵重分析仪器，专属性强，灵敏度高，现象易于观察，适用于现场检验中成药和保健食品是否掺杂昔康类非留体抗炎药的检验方法。
[0007]本发明的另一目的在于提供上述方法在制备昔康类非留体抗炎药快速检验试剂盒中的应用。
[0008]本发明的另一目的在于提供上述方法在检验祛风湿类中成药和保健食品是否掺杂昔康类非留体抗炎药的筛查中的应用。
[0009]本发明的前一技术方案是这样的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非甾体抗炎药的筛查方法，依次由以下步骤组成:(I)取I份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂3ml，振摇lmin，得到供试品粗提液；(2)用有机系微孔滤膜滤过供试品粗提液得到供试液；(3)取供试液1.5ml置装有15mg香草醛的干燥试管中，使香草醛溶解；(4)向试管中加入浓硫酸2ml，振摇数次；(5)将试管置于微沸水浴中加热约lmin，使有机溶剂尽量挥尽，取出放冷至室温；(6)沿试管壁缓缓加入无水乙醇5ml ;(7)立即观察Imin内液面交界处及乙醇层的的颜色变化。
[0010]所述的I份量供试品为一次服用量的供试品，所述的有机溶剂为二氯甲烷。
[0011]上述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，所述的胶囊和软胶囊取内容物置于具塞试管中，片剂和丸剂先研细，再置于具塞试管中。
[0012]上述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，所述的有机溶剂为二氯甲烷；昔康类非留体抗炎药在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性较好，但二氯甲烷是不可燃低沸点溶剂，加热时易挥尽，且毒性较小，故采用二氯甲烷作为提取溶剂。
[0013]上述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，步骤
(5)所述的微沸水浴约85?95°C，加热时间约lmin，必要时可适当延长加热时间使有机溶剂挥尽。
[0014]上述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，步骤
(7)所述的立即观察Imin内液面交界处及乙醇层的的颜色变化，应是加入无水乙醇后立即观察，只需轻轻晃动试管至可观察到乙醇层的颜色变化即可，不宜过度振摇使两层过分混合，否则颜色较深不利于观察，决定判断结果的现象应是在加入无水乙醇后Imin内观察到的。
[0015]上述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，步骤
(7)所述的颜色变化，其判断标准为:若加入无水乙醇后Imin内交界处的乙醇层颜色先变为紫色，再变为紫堇色或蓝色，可初步断定样品中含有昔康类非留体抗炎药，若不符合此颜色变化规律，或Imin内未观察到此颜色变化现象，则为阴性结果。
[0016]以常见的吡罗昔康、美洛昔康和氯诺昔康为代表考察检测灵敏度，本方法的显色灵敏度可以达到:卩比罗昔康0.50mg,,美洛昔康0.52mg,氯诺昔康0.51mg均低于其相应临床有效剂量的1/20，因此本发明的显色灵敏度足够保证不会漏检祛风湿中成药和保健食品中的昔康类非留体抗炎药。
[0017]本发明的后一技术方案是这样的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非甾体抗炎药的筛查方法所使用的试剂盒，括盒体，盒体内设有至少一个盛有3ml 二氯甲烷的具塞试管，至少一个盛有2ml浓硫酸的试剂瓶,至少一个盛有5ml无水乙醇的试剂瓶,至少一个盛有15mg香草醛的干燥具塞试管，至少一个5ml的一次性注射器，以及有机系微孔滤膜。
[0018]本发明的试验原理如下:
昔康类非留体抗炎药结构中都有1，2-苯并噻嗪的母核，和酰胺结构，由于噻嗪环和羰基的强电负性，使得酰胺-NH-上的H比较活泼，可与香草醛在浓硫酸存在下发生缩合反应，生成较大的共轭系统，显红棕色，加入乙醇后，反应产物转变为具有更大共轭体系的化合物，颜色先变为紫色，再变为紫堇色或蓝色。反应原理如下:
【权利要求】
1.一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，依次包括下述步骤:(1)取I份量供试品置于具塞试管中，加有机溶剂3ml，振摇lmin，得到供试品粗提液；(2)用有机系微孔滤膜滤过供试品粗提液得到供试液；(3)取供试液1.5ml置装有15mg香草醛的干燥试管中，使香草醛溶解；(4)向试管中加入浓硫酸2ml，振摇数次；(5)将试管置于微沸水浴中加热约lmin，使有机溶剂尽量挥尽，取出放冷至室温；(6)沿试管壁缓缓加入无水乙醇5ml ；(7)立即观察Imin内液面交界处及乙醇层的的颜色变化； 所述的I份量供试品为一次服用量的供试品； 所述的有机溶剂为二氯甲烷。
2.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，所述的胶囊和软胶囊取内容物置于具塞试管中，片剂和丸剂先研细，再置于具塞试管中。
3.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，所述的有机溶剂为二氯甲烷；昔康类非留体抗炎药在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性较好，但二氯甲烷是不可燃低沸点溶剂，加热时易挥尽，且毒性较小，故采用二氯甲烷作为提取溶剂。
4.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，步骤(5)所述的微沸水浴约85?95°C，加热时间约lmin，必要时可适当延长加热时间使有机溶剂挥尽。
5.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，步骤(7)所述的立即观察Imin内液面交界处及乙醇层的的颜色变化，应是加入无水乙醇后立即观察，只需轻轻晃动试管至可观察到乙醇层的颜色变化即可，不宜过度振摇使两层过分混合，否则颜色较深不利于观察，决定判断结果的现象应是在加入无水乙醇后Imin内所观察到的。
6.根据权利要求1所述的一种祛风湿中成药和保健食品中昔康类非留体抗炎药的筛查方法，其特征在于，步骤(7)所述的颜色变化，其判断标准为:若加入无水乙醇后Imin内液层交界处的乙醇层颜色先变为紫色，再变为紫堇色或蓝色，可初步断定样品中含有昔康类非留体抗炎药，若不符合此颜色变化规律，或Imin内未观察到此颜色变化现象，则为阴性结果，必要时应平行进行阳性对照试验和空白试验。
7.权利要求1所述的昔康类非留体抗炎药包括:吡罗昔康、美洛昔康、氯诺昔康、辛诺昔康、安吡昔康、替诺昔康、舒多昔康和伊索昔康。
8.权利要求1所述的检测方法在制备昔康类非留体抗炎药快速检验试剂盒中的应用。
9.权利要求6所述的一种昔康类非留体抗炎药快速检验试剂盒，包括盒体，其特征在于，盒体内设有至少一个盛有3ml 二氯甲烷的具塞试管，至少一个盛有2ml浓硫酸的试剂瓶，至少一个盛有5ml无水乙醇的试剂瓶,至少一个盛有15mg香草醒的干燥具塞试管,至少一个5ml的一次性注射器，以及有机系微孔滤膜。
10.权利要求1所述的检测方法在祛风湿中成药和保健食品中是否掺入昔康类非甾体抗炎药的筛选检验中的应用。
【文档编号】G01N21/78GK103616375SQ201310555545
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】宫旭, 芦丽, 冯有龙, 曹玲, 樊夏雷, 孙晶, 张再平, 尚姝, 吴莉 申请人:江苏省食品药品检验所, 中国食品药品检定研究院, 宫旭