专利名称：苯并芘免疫层析快速检测试纸卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试纸卡，尤其涉及一种苯并芘(BaP)免疫层析快速检测试纸卡，应用免疫学原理，通过胶体金的免疫反应再借助免疫层析技术达到检测苯并芘目的，应用于快速检测饲料中的苯并芘。
背景技术：
苯并芘(BaP)是一种具有强致癌作用的有机化合物，是多环芳烃中毒性最大的一种强烈致癌物。它是由一个苯环和一个芘分子结合而成的多环芳烃类化合物。苯并芘存在于煤焦油、各类碳黑和煤、石油等燃烧产生的烟气、香烟烟雾、汽车尾气中，以及焦化、炼油、浙青、塑料等工业污水中。地面水中的苯并芘(BaP)除了工业排污外，主要来自洗刷大气的雨水和储水槽及管道涂层淋溶。吸烟烟雾和经过多次使用的高温植物油、煮焦的食物、油炸过火的食品都会产生苯并芘。研究证明，生活环境中的苯并芘含量每增加1%时，肺癌的死亡率即上升5%。苯并芘(BaP)通过吸入、食入、经皮吸收进入人体，对眼睛、皮肤有刺激作用，是致癌物、致畸原及诱变剂。进入食物链的量决定于烹调方法，不适当的油炸可能使苯并芘(BaP)含量升高，长期生活在含苯 并芘(BaP)的空气环境中会造成慢性中毒。根据国家《食用植物油卫生标准》，食用油苯并芘(BaP)芘含量的最高上限为lOppb。食品中苯并芘(BaP)的常用检测方法是荧光分光光度法和比色法。这两种方法灵敏度较低，并且其仪器昂贵，操作程序较繁琐，因此适用性不强。
实用新型内容本实用新型要解决的技术问题是提供一种苯并芘免疫层析快速检测试纸卡，用来检测食品中苯并芘的残留情况，达到高敏感度和高特异性，而且不需要专门配备仪器和设备，操作方法简单，操作时间短，10分钟可完成检测，适合食品制造的基层生产现场和食品使用者的普及使用，该试纸卡具有操作简便、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点，达到使用意义上的快速检测。为解决上述技术问题，本实用新型提供一种苯并芘免疫层析快速检测试纸卡，所述试纸卡包括样品处理垫、标记有抗苯并芘抗体的聚酯纤维金垫、吸水纸、硝酸纤维素膜和底板；在硝酸纤维素膜的起始端依次叠加样品处理垫、金垫；在硝酸纤维素膜的末端叠加吸水纸。在硝酸纤维素膜的中间包被目标物检测线和质控线；所述硝酸纤维素膜粘贴在底板上。进一步地,所述金垫与样品处理垫的一端叠合。进一步地，所述硝酸纤维素膜与样品处理垫、金垫和吸水纸叠合处覆有具有粘性的材料，将硝酸纤维素膜与样品处理垫、金垫和吸水纸粘合在一起。本实用新型是通过以下技术方案和工作原理实现的。抗苯并芘抗体标记在指示剂颗粒上，标记物再连接到聚酯纤维上，成为金垫；将苯并芘完全抗原包被并固定硝酸纤维素膜的检测线(T)上，硝酸纤维素膜粘贴在底板上，始端粘贴样品处理垫以处理样品，末端粘贴吸水纸助层析完成。检测时，由于被测样本中苯并芘抗原和复溶的金标记抗体发生了免疫反应，此时混合液层析到检测区上时包被抗原无法竞争到标记抗体，检测区内没有出现检测线，即阳性，相反如被测样本没有苯并芘抗原，则标记的抗体层析到检测区时和包被膜上的抗原结合形成紫红线，即阴性。为了证明试剂有效性和易判读，分别在质控线(C)包被羊抗兔IgG为质控线，所以不管结果怎样质控线C始终出现。与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于:本实用新型的苯并芘免疫层析快速检测试纸卡与仪器检测同样具有高灵敏度和高特异性，但不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，检测成本低廉，适合食品加工制造业和食品使用者的普及使用。用免疫层析法生产苯并芘快速检测试纸卡，用来检测食品中苯并芘的残留情况，是现今敏感度、特异性最好的苯并芘添加筛查方法，本方法具有操作简便、测试快速、反应灵敏度高、价格低廉、特异性强、假阳性、假阴性率低的特点，无需特殊仪器及专业技术人员，检测快速，检测结果易于观察，检测费用低廉，贮存和运输方便等优点。十分适合各类检验机构、生产企业和使用者现场快速筛查苯并芘的残留情况。
图1是本实用新型的实施例的结构示意图。图2是本实用新型的实施例的检测结果示意图；其中，图2A代表检测结果为阴性的示意图；图2B代表检测结果为阳性的示意图；图2C代表检测结果为无效的示意图。图中附图标记说明如下: I 是底板，2 是 NC 膜(即硝酸纤维素膜，nitrocellulose filter membrane)、3 是样品处理垫、4是金垫、5是目标物检测线、6是质控线、7是吸水纸。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步详细说明。实施例苯并花免疫层析快速检测试纸卡在图1中，将NC膜2黏贴在底板I上，在NC膜2的中间包被目标物检测线5和质控线6，NC膜2的起始端粘贴样品处理垫3，依次再粘贴金垫4，NC膜2的末端粘贴吸水纸
7。即在NC膜2的起始端至末端依次叠合有样品处理垫3，金垫4，目标物检测线5，质控线6，以及吸水纸7。本实用新型苯并芘免疫层析快速检测试纸卡的制备及检测方法，包括如下步骤:1.将一定浓度的苯并芘偶联结合物(即苯并芘抗原)和羊抗兔IgG分别包被于硝酸纤维素膜(即NC膜2)上的检测线T (即目标物检测线5)和质控线C (即质控线6)的位置。例如，将苯并芘单克隆抗体稀释至浓度lmg/ml，将羊抗鼠IgG稀释至浓度2mg/ml，将两种溶液划线于NC膜上的检测区和质控区，形成检测线T (即目标物检测线5)和质控线C(即质控线6)。2.金垫的制备用柠檬酸三钠还原四氯化金(即氯金酸)制备粒径40 60nm胶体金，调节pH后每毫升胶体金和 ο μ g抗苯并芘抗体混合进行标记并在383nm下测0D。将抗苯并芘抗体标记物进行稀释，OD值稀释到2-3，将聚酯纤维浸泡于抗苯并芘抗体标记物稀释液中，取出并烘干，即为金垫。3.将包被完成的硝酸纤维素膜(NC膜2)、样品处理垫3、金垫4、吸水纸7 —起依次粘贴在底板I上。并切成3mm的试纸条。4.检测步骤:a.食品样本:称取一定量的样本，粉碎，用稀释液进行溶解，离心取上清液，即得待检样品。b.取出试纸条，平放在桌面上。c.用吸管吸取混合均匀的待检样品，滴加2-3滴于样品处理垫3中，并开始计时。d.在5分钟内读取结果。e.结果判定:图2中，阳性结果为质控线C位置出现红色线条，而检测线T位置不显示红色线条时，说明被检样品中有苯并芘，判为阳性(见图2B);阴性结果为质控线C位置出现红色线条，检测线T位置也出现红色线条，说明被检样品中没有苯并芘存在，判为阴性(见图2A);如果检测线T位置和质控线C位置均不显示红色线条，则判为检测无效(见图2C)。7.性能指标灵敏度:应用本实施例，苯并芘浓度在0.lng/ml以上为阳性。使用目的:本品用于 筛查苯并芘在用于食品制造及食品原料等相关现场快速筛查，保障食品安全。
权利要求1.一种苯并芘免疫层析快速检测试纸卡，其特征在于，所述试纸卡包括样品处理垫、标记有抗苯并芘抗体的聚酯纤维金垫、吸水纸、硝酸纤维素膜和底板；在硝酸纤维素膜的起始端依次叠加样品处理垫、金垫，在硝酸纤维素膜的末端叠加吸水纸；在硝酸纤维素膜的中间包被目标物检测线和质控线；所述硝酸纤维素膜粘贴在底板上。
2.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述金垫与样品处理垫的一端叠合。
3.如权利要求1或2所述的试纸卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜与样品处理垫、金垫和吸水纸叠合处覆有具有粘性的材料，将硝酸纤维素膜与样品处理垫、金垫和吸水纸粘合 在一起。
专利摘要本实用新型公开了一种苯并芘免疫层析快速检测试纸卡，所述试纸卡包括样品处理垫、标记有抗苯并芘抗体的聚酯纤维金垫、吸水纸、硝酸纤维素膜和底板；在硝酸纤维素膜的起始端依次叠加样品处理垫、金垫，在硝酸纤维素膜的末端叠加吸水纸；在硝酸纤维素膜的中间包被目标物检测线和质控线；所述硝酸纤维素膜粘贴在底板上。本实用新型不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，适合食品及食品原料行业的普及使用，该试纸卡具有操作简便、测试快速、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点。
文档编号G01N33/02GK203148921SQ201320090858
公开日2013年8月21日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者周中人, 史小月, 顾琳 申请人:上海快灵生物科技有限公司