专利名称：苯乙醇胺a免疫层析快速检测试纸卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试纸卡，特别是涉及一种苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡。
背景技术：
苯乙醇胺A是瘦肉精品种目录中的一种，与其他瘦肉精品种如莱克多巴胺等相t匕，同样可以用于猪肉、牛肉，刺激动物生长，加强蛋白质在动物体内沉积，提高基础代谢水平，使体脂趋于分解，促进生猪长速加快、皮红毛亮、瘦肉率高。而人吃了含这种瘦肉精的猪肉后，可出现恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者危害更大。长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤。农业部发布第1519号公告(以下简称《公告》)，禁止在饲料和动物饮水中使用苯乙醇胺A等11种违禁物质。目前，苯乙醇胺A的测定方法主要方法是液相色谱-串联质谱法和酶联免疫法。液相色谱-串联质谱法灵敏度高，但检测周期长，不利于基层养殖现场的检测，且其仪器昂贵，需要专业的仪器和专人的人员进行操作。酶联免疫法需要酶标仪进行检测，也需要专业实验室和专业人员操作。因此，现有的苯乙醇胺A的测定方法，不适合于基层生产和国家监管部门的现场抽检，因而普及性和适用性不强。
实用新型内容
本实用新型要解决的技术问题是提供一种苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡。该试纸卡应用免疫学原理，通过胶体金的免疫反应再借助免疫层析技术达到检测苯乙醇胺A目的，能快速检测饲料中的苯乙醇胺A。为解决上述技术问题，本实用新型的苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡，包括::PVC底板、样品垫、贴层、金标垫、吸水纸、层析膜；其中，按层析方向，在PVC底板上依次叠合有样品垫、含有pH值调节液的贴层、含金标记抗苯乙醇胺A抗体的玻纤金标垫、层析膜以及吸水纸，并且在层析膜上设有包被苯乙醇胺A偶联抗原的检测线和质控线。进一步地，所述金标垫的一端通过叠合连接贴层，贴层叠合连接样品垫，层析膜的一端通过叠合连接金标垫的另一端，层析膜的另一端通过叠合连接吸水纸。进一步地,所述质控线包被有羊抗兔IgG。进一步地，所述苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡的形状，包括:条状、圆柱状或者多边形。本实用新型是通过以下技术方案和工作原理实现的。抗苯乙醇胺A抗体标记在指示剂颗粒上，标记物附着在玻纤上；将苯乙醇胺A完全抗原包被并固定在层析膜的检测线(T)上，层析膜粘贴在PVC底板上，层析膜的始端粘贴金标垫，末端粘贴吸水纸助层析完成。检测时，由于被测样本中苯乙醇胺A抗原和复溶的金标记抗体发生了免疫反应，此时混合液层析到检测区上时包被抗原无法竞争到标记抗体，检测区内没有出现检测线，即阳性，相反如被测样本没有苯乙醇胺A抗原，则标记的抗体层析到检测区时和包被膜上的抗原结合形成紫红线，即阴性。为了证明试剂有效性和易判读，分别在质控线(C)包被羊抗兔IgG为质控线，所以不管结果怎样质控线C始终出现。与现有技术相比，本实用新型的有益效果在于:用免疫层析法生产苯乙醇胺A快速检测试纸卡，用来检测饲料、猪尿、猪肉中苯乙醇胺A的情况，是现今敏感度、特异性最好的苯乙醇胺A快速筛查方法，而且不需要专门设备，操作简单快速，10分钟可完成检测，其结果显示直观，易判断，适合使用者及国家监管部门现场检查的普及使用。本实用新型具有操作简便、测试快速、反应灵敏、价格低廉、特异性强的特点。
以下结合附图与具体实施方式
对本实用新型作进一步详细的说明:
图1是本实用新型苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡的实施例的结构示意图。图2是本实用新型苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡的实施例的检测结果示意图。图中附图标记说明如下:I 是 PVC 底板，2 是 NC 膜(即层析膜，nitrocellulose filter membrane)、3 是样品垫、4是金标垫、5是检测线、6是质控线、7是吸水纸，8是贴层。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步详细说明。实施例苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡在图1中，将NC膜2黏贴在PVC底板I上，在NC膜2上包被检测线5和质控线6，NC膜2的起始端粘贴金标垫4，NC膜2的末端粘贴吸水纸7。金标垫4的一端通过叠合连接贴层8，贴层8叠合连接样品垫3，NC膜2的一端通过叠合连接金标垫4的另一端，NC膜2的另一端通过叠合连接吸水纸7。即按层析方向，在PVC底板I上依次叠合有样品垫3、贴层8、金标垫4、NC膜2 (检测线5、质控线6)、以及吸水纸7。本实用新型苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡的制备及检测方法，包括如下步骤:1.将一定浓度的苯乙醇胺A偶联结合物(即苯乙醇胺A抗原)和羊抗兔IgG分别包被于层析膜(即NC膜2)上的检测线T (即检测线5)和质控线C (即质控线6)的位置。例如，将苯乙醇胺A单克隆抗体稀释至浓度lmg/ml，将羊抗鼠IgG稀释至浓度2mg/ml，将两种溶液划线于NC膜上的 检测区和质控区，形成检测线T (即检测线5)和质控线C (即质控线6)。2.金标记抗苯乙醇胺A抗体玻纤的制备用柠檬酸三钠还原四氯化金(即氯金酸)制备粒径40 60nm胶体金，调节pH后每毫升胶体金和 ο μ g抗苯乙醇胺A抗体混合进行标记并在340nm下测0D。将OD稀释到3-4，倒于玻纤上直至完全吸收，并烘干，玻纤上即附着金标记抗苯乙醇胺A抗体颗粒。[0026]3.将包被完成的层析膜(NC膜2)、样品垫3、含金标记抗苯乙醇胺A抗体的玻纤(即金标垫4)、吸水纸7 —起依次粘贴在PVC底板I上。并切成3mm的试纸条。4.检测步骤:a.饲料样本:称取一定量的饲料，用稀释液进行溶解，离心取上清液，即得待检样品。猪尿样本:直接取猪尿作为检测样本，若浑浊，则离心取上清液。b.取出试纸条，平放在桌面上。c.用吸管吸取混合均匀的待检样品，滴加2-3滴于样品垫3中，并开始计时。d.在5分钟内读取结果。e.结果判定:图2中，阳性结果为质控线C位置出现红色线条，而检测线T位置不显示红色线条时，说明被检样品中有苯乙醇胺A，判为阳性；阴性结果为质控线C位置出现红色线条，检测线T位置也出现红色线条，说明被检样品中没有苯乙醇胺A存在，判为阴性；如果检测线T位置和质控线C位置均不显示红色线条，则判为检测无效。7.性能指标灵敏度:应用本实施例，苯乙醇胺A浓度在0.lng/ml以上为阳性。使用目的: 本品用于筛查苯乙醇胺A在用于饲料和猪尿的现场快速筛查，保障猪肉安全。
权利要求1.一种苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡，其特征在于，所述试纸卡包括:PVC底板、样品垫、含有PH值调节液的贴层、含金标记抗苯乙醇胺A抗体的玻纤金标垫、层析膜、吸水纸； 其中，按层析方向，在PVC底板上依次叠合有样品垫、贴层、金标垫、层析膜以及吸水纸，并且在层析膜上设有包被苯乙醇胺A偶联抗原的检测线和质控线。
2.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述金标垫的一端通过叠合连接贴层，贴层叠合连接样品垫，层析膜的一端通过叠合连接金标垫的另一端，层析膜的另一端通过叠合连接吸水纸。
3.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述质控线包被有羊抗兔IgG。
4.如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡的形状，包括:条状、圆柱状`或者多边形。
专利摘要本实用新型公开了一种苯乙醇胺A免疫层析快速检测试纸卡，包括PVC底板、样品垫、含有pH值调节液的贴层、含金标记抗苯乙醇胺A抗体的玻纤金标垫、吸水纸、层析膜；其中，按层析方向，在PVC底板上依次叠合有样品垫、贴层、金标垫、层析膜以及吸水纸，并且在层析膜上设有包被苯乙醇胺A偶联抗原的检测线和质控线。该试纸卡应用免疫学原理，通过胶体金的免疫反应再借助免疫层析技术达到检测苯乙醇胺A目的，能快速检测猪尿和饲料中的苯乙醇胺A。
文档编号G01N33/74GK203148956SQ20132009111
公开日2013年8月21日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者周中人, 史小月, 顾琳 申请人:上海快灵生物科技有限公司