一种心可舒胶囊的含量测定及鉴别方法
【专利摘要】本发明公开了一种对心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分进行含量测定，对丹参、葛根进行特征图谱鉴别的方法及对粉葛和葛根进行鉴别的方法。本发明方法具有灵敏度高、重现性与稳定性好等特点，大大提高了检验效率，方便快捷，经济环保，可有效控制心可舒胶囊的质量。
【专利说明】一种心可舒胶囊的含量测定及鉴别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种对心可舒胶囊中多种有效成分进行含量测定及特征图谱的鉴别方法，具体地说，是利用超高效液相色谱法(UPLC)法对心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分的含量进行测定及对丹参、葛根进行特征鉴别的一种方法。
【背景技术】
[0002]心可舒胶囊由丹参、葛根、三七、木香和山楂5味药组成，具有活血化瘀、行气止痛的功效。用于气滞血瘀型冠心病引起的胸闷、心绞痛、高血压、头晕、头痛、颈项疼痛及心律失常、高血脂等症。1998年收入《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册。目前，全国共有7家药品生产企业。
[0003]心可舒胶囊现行标准为《卫生部药品标准》中药成方制第十五册(标准号为WS3-B-2856-98)及药典业字发[2004]389号文。本品质量标准主要收载有性状、鉴别与常规检查(详见表1心可舒胶囊现行标准检验项目)，检验项目较少，只有鉴别与检查项，缺少含量测定等项目，且熊果酸为山楂中非专属性成分、原儿茶醛为丹参中的水解成分，以此两种成分对照实行薄层鉴别，专属性差，所以现行标准不能很好控制药品的质量。
[0004]本发明就是为了克服上述缺陷，建立一种快速环保的检测方法来对心可舒胶囊中多种有效成分的含量进行控制，并对君药与臣药丹参、葛根进行了鉴别，从而保证药品质量。
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种心可舒胶囊中丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、葛根素等4种有效成分的含量进行测定及对丹参、葛根进行特征鉴别的一种方法，该方法利用超高效液相色谱法(UPLC)法进行测定，该方法快速、环保，可有效控制药品质量。
[0006]本发明提供一种心可舒胶囊的含量测定方法，该含量测定方法由以下步骤组成:
[0007]A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液；
[0008]B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 % -80%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
[0009]C、液相 色谱条件:C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件为O分钟到2分钟，流动相A的比例为1% -10%，流动相B的比例为99% -90% ；2分钟到 30分钟，流动相A的比例升高至20% _40%，流动相B的比例降低M 80% -60% ;柱温为 20-500C ;流速:0.2-1.0ml/min ;检测波长为 270_310nm ；
[0010]D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各Ι-?ο μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
[0011]含量测定方法优选为:
[0012]A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每Iml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液；
[0013]B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，取出，放冷，再称定重量，50 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
[0014]C、液相色谱条件:C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为I %，流动相B的比例为99 % ;2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至20%，流动相B的比例降低至80% ;柱温为20°C ;流速:0.2ml/min ;检测波长为270nm ；
[0015]D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
[0016]含量测定方法还优选为:
[0017]Α、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每Iml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液；
[0018]B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
[0019]C、液相色谱条件:C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为10 %，流动相B的比例为90 % ;2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至40%，流动相B的比例降低至60% ;柱温为50°C ；流速:1.0ml/min ;检测波长为31Onm ；
[0020]D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
[0021]含量测定方法还优选为:
[0022]Α、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每Iml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液；
[0023]B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
[0024]C、液相色谱条件:色谱柱为Acquity BEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m);以乙腈为流动相A，以0.1 %的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为3%，流动相B的比例为97% ；2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至28%，流动相B的比例降低至72% ;柱温为250C ;流速:0.4ml/min ;检测波长为287nm ；[0025]D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3 μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
[0026]本发明还提供了一种心可舒胶囊中葛根的特征图谱鉴别方法，该鉴别方法由以下步骤组成:
[0027](I)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤Α、步骤B、步骤C ;
[0028](2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根阴性对照溶液；
[0029](3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为葛根对照药材溶液；
[0030](4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各1-10 μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定葛根的特征色谱峰为3、4、5、6、7号峰；
[0031]心可舒胶囊中葛根特征鉴别方法优选为:
[0032](I)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤Α、步骤B、步骤C ;
[0033](2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根阴性对照溶液；
[0034](3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液；
[0035](4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各3 μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定葛根的特征色谱峰为3、4、5、6、7号峰；
[0036]本发明还提供一种心可舒胶囊中丹参的特征图谱鉴别方法，该鉴别方法由以下步骤组成:
[0037](I)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤Α、步骤B、步骤C ;
[0038](2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为丹参阴性对照溶液；
[0039](3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各1-10 μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定丹参的特征色谱峰为1、2、8号峰。
[0040]心可舒胶囊中丹参的特征鉴别方法优选为:
[0041](I)对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤Α、步骤B、步骤C ;
[0042](2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70 %甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，作为丹参阴性对照溶液；
[0043](3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各3 μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定丹参的特征色谱峰为1、2、8号峰。
[0044]本发明还提供了一种葛根药材与粉葛药材的鉴别方法，该方法由以下步骤组成:
[0045](I)液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤步骤C ；
[0046](2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.Ι-lg,置具塞锥形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液；
[0047](3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛对照药材溶液；
[0048](4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根药材溶液；
[0049](5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛药材溶液；
[0050](6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，葛根对照药材和葛根药材均有3、4、5、6、7号峰；粉葛对照药材有4、5、6、7号峰；粉葛药材只有4、7号峰。
[0051]葛根药材与粉葛药材的鉴别方法优选为:
[0052](I)液相色谱条件同心可舒胶囊的含量测定方法中的步骤步骤C ；
[0053](2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液；
[0054](3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛对照药材溶液；
[0055](4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根药材溶液；
[0056](5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛药材溶液；
[0057](6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，葛根对照药材和葛根药材均有3、4、5、6、7号峰；粉葛对照药材有4、5、6、7号峰；粉葛药材只有4、7号峰。
[0058]为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性，对方法进行了以下方法学验证实验，并用该方法对葛根、丹参的特征图谱进行了确认，及用该方法区别葛根和粉葛，并建立区别特征，以确保该含量测定及鉴别方法可以作为心可舒胶囊的质量控制方法。
[0059]一、心可舒胶囊的含量方法学考察
[0060]1、色谱条件与系统适用性试验
[0061]1.1 色谱柱:Acquity BEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m)
[0062]1.2流动相:乙腈为流动相A，0.1 %三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度表见表1。
[0063]表1流动相梯度洗脱表
【权利要求】
1.一种心可舒胶囊的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成: A、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液； B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50% -80%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液； C、液相色谱条件=C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件为O分钟到2分钟，流动相A的比例为1% -10%，流动相B的比例为99% -90% ；2分钟到 30分钟，流动相A的比例升高至20% _40%，流动相B的比例降低至80% -60% ;柱温为 20-500C ;流速:0.2-1.0ml/min ;检测波长为 270_310nm ； D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成: Α、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液； B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，取出，放冷，再称定重量，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液； C、液相色谱条件=C18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为1%，流动相B的比例为99% ；2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至20%，流动相B的比例降低至80% ;柱温为20°C ;流速:0.2ml/min ;检测波长为 270nm ； D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成: Α、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液； B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液； C、液相色谱条件=C 18色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.2%的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为10%，流动相B的比例为90% ；2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至40%，流动相B的比例降低至60% ;柱温为50°C ;流速:.1.0ml/min ;检测波长为 31Onm ；D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述含量测定方法由以下步骤组成: Α、对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、丹酚酸B对照品、葛根素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含丹参素钠50 μ g、原儿茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根 素150 μ g的混合溶液,作为对照品溶液； B、供试品溶液的制备:取装量差异项下的心可舒胶囊内容物，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液； C、液相色谱条件:色谱柱为AcquityBEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m);以乙腈为流动相A，以0.1 %的三氟乙酸溶液为流动相B，梯度洗脱条件:0分钟到2分钟，流动相A的比例为.3%，流动相B的比例为97 % ;2分钟到30分钟，流动相A的比例升高至28 %，流动相B的比例降低至72% ;柱温为250C ;流速:0.4ml/min ;检测波长为287nm ； D、测定:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μ1，注入液相色谱仪，以外标法分别计算各成分含量。
5.一种心可舒胶囊的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法为葛根的特征图谱鉴别方法，该鉴别方法由以下步骤组成: (1)对照品溶液的制备同权利要求1中的步骤Α、供试品溶液的制备同权利要求1中的步骤B、液相色谱条件同权利要求1中的步骤C ； (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根阴性对照溶液； (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为葛根对照药材溶液； (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各1-10 μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定葛根的特征色谱峰为羟基葛根素、葛根素、3’ -甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷。
6.根据权利要求5所述的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成: (1)对照品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤Α、供试品溶液的制备同权利要求.2、3或4中的步骤B、液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤C ； (2)葛根阴性对照溶液的制备:取不含葛根的阴性样品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根阴性对照溶液； (3)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇.50ml，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液； (4)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、葛根阴性对照溶液、葛根对照药材溶液各3μ1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定葛根的特征色谱峰为羟基葛根素、葛根素、3’ -甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷。
7.—种心可舒胶囊的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法为丹参的特征图谱鉴别方法，该鉴别方法由以下步骤组成: (1)对照品溶液的制备同权利要求1中的步骤Α、供试品溶液的制备同权利要求1中的步骤B、液相色谱条件同权利要求1中的步骤C ； (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品，研细，取0.Ι-lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声10-60分钟，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为丹参阴性对照溶液； (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定丹参的特征色谱峰为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B。
8.根据权利要求7所述的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成: (1)对照品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤Α、供试品溶液的制备同权利要求2、3或4中的步骤 B、液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤C ； (2)丹参阴性对照溶液的制备:取不含丹参的阴性样品，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为丹参阴性对照溶液； (3)测定:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、丹参阴性对照溶液各3μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，确定丹参的特征色谱峰为丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B。
9.一种葛根与粉葛的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法由以下步骤组成: (1)液相色谱条件同权利要求1中的步骤步骤C; (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液； (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛对照药材溶液； (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根药材溶液； (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.Ι-lg，置具塞锥形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超声10-60分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛药材溶液； (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，葛根对照药材和葛根药材均有3’ -羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷；粉葛对照药材有葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷；粉葛药材只有葛根素、大豆苷。
10.根据权利要求9所述的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法由以下步骤组成: (1)液相色谱条件同权利要求2、3或4中的步骤步骤C； (2)葛根对照药材溶液的制备:取葛根对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为葛根对照药材溶液； (3)粉葛对照药材溶液的制备:取粉葛对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛对照药材溶液； (4)葛根药材溶液的制备:取葛根药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液,作为葛根药材溶液； (5)粉葛药材溶液的制备:取粉葛药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加70 %甲醇50ml，超声30分钟，摇匀，滤过，取续滤液，作为粉葛药材溶液； (6)测定:精密吸取葛根对照药材、粉葛对照药材、葛根药材、粉葛药材溶液各1-10μ 1，注入液相色谱仪，对比色谱图，葛根对照药材和葛根药材均有3’ -羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷与大豆苷；粉葛对照药材有葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素-7-木 糖苷与大豆苷；粉葛药材只有葛根素、大豆苷。
【文档编号】G01N30/02GK103969372SQ201410215955
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月22日 优先权日:2014年5月22日
【发明者】刘永利, 赵振霞, 王敏, 冯丽, 王钰宁 申请人:河北省食品药品检验院