一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用的制作方法

一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用，该构建方法，包括供试品溶液和对照品溶液的制备，采用线性梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为0.05~0.15%(v/v)磷酸水溶液，检测波长为252nm，柱温为25~35℃，流速为1.0mL/min，以高效液相色谱法进行测定，得灵芝皇制剂指纹图谱，以至少14批指纹图谱的共有特征峰作为标准指纹图谱的特征峰；标准指纹图谱共有40个特征峰，归属于灵芝、白术、黄精、菟丝子、五味子、甘草、枸杞子的特征峰分别有20、3、3、5、1、5、2个。本发明方法及标准指纹图谱能全面、准确评价灵芝制剂的整体质量，有利于保证灵芝制剂的质量及药效。
【专利说明】一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析【技术领域】，涉及一种灵芝皇制剂的分析检测方法，具体涉及一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱及其构建方法和应用。
【背景技术】
[0002]药物指纹图谱系指中药原料药材、饮片、中间品、成品等经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其特征的共有峰的图谱。药物指纹图谱能客观地揭示和反映药物内在质量的整体性和特征性，用以评价药物的真实性、有效性、稳定性和一致性。药物的临床疗效并非由单一活性成分的作用或多种活性成分作用的简单相加，复方制剂更是如此。用已知某一个或几个活性成分或有效成分为质量指标，通过定性和定量分析来判断药品质量的优劣，显然是不全面的。药物质量的评价需要综合的、宏观的、非线性的质量评价体系，药物指纹图谱就是能较好地适应这一特点的一种质量评价与控制模式。在国际上，如日本、德国、美国、加拿大、印度等许多国家，对一些传统药、天然药和草药，都把指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。欧共体对草药质量的指南中也称，单靠测定某有效成分考察质量的稳定性是不够的，因为草药及其制剂是以整体为活性物质。世界卫生组织(WHO)在1996年草药评价指导原则中规定:如果草药的活性成分不明，可以提供特征色谱图谱，以证明产品质量的一致。因此指纹图谱是药物现代化和国际化的关键技术之一。
[0003]灵芝皇胶囊是根据传统中医理论，用现代研究成果及实践经验，以灵芝为主要原料，辅与白术、黄精、枸杞子、获茶、麦冬、菟丝子、五味子、薏苡仁、甘草精制而成的保健品，经动物试验证明，本品具有免疫调节、延缓衰老和辅助抑制肿瘤的保健作用。灵芝皇制剂具有增强免疫力的药理作用，不是直接作用于癌症，但能辅助抑制肿瘤。它是通过运用现代高新技术，提取赤灵芝抗肿瘤的有效成分，并根据中医复方理论，选取多种传统中草药科学配伍制成，可以辅助抑制肿瘤，减低癌症高危人群的患癌机会。
[0004]目前灵芝皇制剂尚缺乏全面有效的质量控制方法，质量标准不完善，难以全面监控成品、中间品的质量及生产工艺的稳定性。凌远育等在文献“灵芝皇胶囊中多糖的含量测定”基层中药杂志，1997，11(3):40报道了蒽酮法测定灵芝皇胶囊多糖的含量，但仅局限于个别成分的检测，不能全面反映该产品的特性。

【发明内容】

[0005]为了解决上述问题，本发明建立了一种合理、准确评价灵芝皇制剂整体性质量的标准指纹图谱，以及该指纹图谱的构建方法。
[0006]本发明的目的在于提供一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱。
[0007]本发明的另一目的在于提供灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法。
[0008]本发明的再一目的在于提供灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的应用。
[0009]本发明所采取的技术方案是:
[0010]一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱，该指纹图谱中有40个共有特征峰，分别编号为I至40，以编号16特征峰为参照峰，编号为I至40的特征峰相对保留时间依次分别为:0.095 ?0.099min、0.109 ?0.113min、0.121 ?0.125min、0.165 ?0.169min、0.199 ?0.205min、0.245 ?0.247min、0.368 ?0.372min、0.387 ?0.393min、0.434 ?0.438min、0.549 ?0.551min、0.603 ?0.605min、0.873 ?0.875min、0.889 ?0.891min、0.897 ?
0.899min、0.915 ?0.917min、l.000min、l.065 ?1.067min、l.121 ?1.123min、l.155 ?
1.157min、l.181 ?1.183min、l.361 ?1.363min、l.395 ?1.397min、l.447 ?1.449min、1.458 ?1.460min、l.489 ?1.493min、l.507 ?1.511min、l.576 ?1.580min、l.612 ?1.615min、l.629 ?1.633min、l.682 ?1.686min、l.696 ?1.700min、l.706 ?1.710min、1.764 ?1.768min、l.803 ?1.805min、l.835 ?1.839min、l.853 ?1.857min、l.866 ?1.868min、l.876 ?1.878min、l.886 ?1.890min、l.930 ?1.932min。
[0011]进一步的，上述的编号为I至40的40个共有特征峰中:
[0012]归属于灵芝的特征峰编号为1、2、3、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、40 —共20个，其中31号峰为灵芝酸A ；
[0013]归属于菟丝子的特征峰编号为9、10、14、15、16 —共5个，其中14号峰为金丝桃苷、15号峰为异槲皮苷、16号峰为紫云英苷；
[0014]归属于甘草的特征峰编号为12、13、18、19、36 —共5个，其中12号峰为甘草苷、36
号峰为甘草酸；
[0015]归属于黄精的共有峰编号为4、5、6—共3个；
[0016]归属于白术的特征峰编号为10、17、24—共3个；
[0017]归属于五味子的特征峰编号为39 —共I个,39号峰为五味子醇甲。
[0018]归属于枸杞子的特征峰编号为9、11 一共2个。
[0019]进一步的，上述灵芝皇制剂由灵芝、白术、薏苡仁、黄精、枸杞子、茯苓、麦冬、菟丝子、五味子、甘草10味药材制成。
[0020]一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括以下步骤:
[0021 ] I)制备灵之皇制剂供试品溶液；
[0022]2)制备对照品溶液:精密称取灵芝酸A、甘草苷、甘草酸铵、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、五味子醇甲，加甲醇溶解，分别制成浓度已知的对照品溶液；
[0023]3)灵芝皇制剂的HPLC指纹图谱的建立:分别吸取对照品溶液和供试品溶液，进样，用高效液相色谱仪测定，线性梯度洗脱程序如下表:
【权利要求】
1.一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱，其特征在于:该指纹图谱中有40个共有特征峰，分别编号为I至40，以编号16特征峰为参照峰，编号为I至40的特征峰相对保留时间依次分别为:0.095~0.099 min、0.109~0.113 min、0.121 ~0.125 min、0.165~0.169 min、0.199~0.205 min,0.245~0.247 min,0.368~0.372 min,0.387~0.393 min,0.434~0.438 min、0.549~0.551 min,0.603~0.605 min,0.873~0.875 min,0.889~0.891 min,0.897~0.899min,0.915~0.917 min、l.000 min、l.065~1.067 min、l.121~.123 min、l.155~1.157 min、1.181 ~1.183 min、1.361 ~1.363 min、1.395~1.397 min、1.447~1.449 min、1.458~1.460 min、1.489~1.493 min、l.507~1.511 min、l.576~1.580 min、l.612~1.615 min、l.629~1.633min、1.682^1.686 min、1.696^1.700 min、1.706^1.710 min、1.764^1.768 min、1.803^1.805min、1.835^1.839 min、1.853^1.857 min、1.866^1.868 min、1.876^1.878 min、1.886^1.890min、1.930~1.932 min。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱，其特征在于:所述的编号分别为I至40的40个共有特征峰中: 归属于灵芝的特征峰编号为 1、2、3、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37,38,40 一共20个，其中31号峰为灵芝酸A ；归属于菟丝子的特征峰编号为9、10、14、15、16 —共5个，其中14号峰为金丝桃苷、15号峰为异槲皮苷、16号峰为紫云英苷；归属于甘草的特征峰编号为12、13、18、19、36 —共5个，其中12号峰为甘草苷、36号峰为甘草酸；归属于黄精的共有峰编号为4、5、6 —共3个；归属于白术的特征峰编号为10、17、24 —共3个；归属于五味子的特征峰编号为39 —共I个,39号峰为五味子醇甲；归属于枸杞子的特征峰编号为9、11 一共2个。
3.根据权利要求1或2所述的一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱，其特征在于:所述的灵芝皇制剂由灵芝、白术、黄精、枸杞子、茯苓、麦冬、菟丝子、五味子、薏苡仁、甘草10味药材制成。
4.权利要求1~3中任一所述一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于:包括以下步骤:O制备灵芝皇制剂供试品溶液； . 2)制备对照品溶液:精密称取灵芝酸A、甘草苷、甘草酸铵、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、五味子醇甲，加甲醇溶解，分别制成浓度已知的对照品溶液； . 3)灵芝皇制剂的HPLC指纹图谱的建立:分别吸取对照品溶液和供试品溶液，进样，用高效液相色谱仪测定，线性梯度洗脱程序如下表:
5.根据权利要求4所述的一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于:步骤I)中制备灵芝皇制剂供试品溶液的具体操作为:精密称取灵芝皇胶囊内容物，置于带塞的锥形瓶中，加入甲醇，使灵芝皇制剂的浓度为0.25^1.0g/mL，密塞，称定重量，超声处理4(T60min，静置放冷，再称定重量，用甲醇弥补减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解，并用I~2 mL容量瓶定容，摇匀，滤过，取续滤液，即可。
6.根据权利要求4所述的一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于:步骤3)中所述高效液相色谱仪进行测定时的条件为流动相A为乙腈，流动相B为体积百分数为0.05、.15%的磷酸水溶液，柱温为25~35°C，流速为1.0mL/min,检测波长为252nm。
7.根据权利要求4所述的一种灵芝皇制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于:步骤4)中所述各批次灵芝皇制剂样品的HPLC指纹图谱与灵芝皇制剂HPLC的标准指纹图谱的相似度应大于0.9。
【文档编号】G01N30/02GK104007198SQ201410222356
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年5月23日 优先权日:2014年5月23日
【发明者】高新开, 程敏, 谭丽容, 吴小莉 申请人:无限极（中国）有限公司