五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法
【专利摘要】五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法，包括：步骤1、采用ICP-MS法测定每一来源的五倍子药材的无机元素，得到ICP-MS分析数据，建立五倍子药材无机元素的指纹图谱；步骤2、采用HPLC法测定每一来源的五倍子药材的有机成分，得到HPLC分析数据，建立五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱；步骤3、所述步骤1中无机元素ICP-MS分析数据进行系统聚类分析；步骤4、所述步骤2中有机成分的HPLC分析数据进行系统聚类分析；步骤5、综合分析所述五倍子药材无机元素的指纹图谱及聚类分析与所述五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱及聚类分析，评价五倍子药材的质量。本发明可为全面控制五倍子药材的质量提供依据，有效避免单一分析评价五倍子药材质量的片面性。
【专利说明】五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药药材的质量控制方法，尤其涉及一种五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法。
【背景技术】
[0002]五倍子(Gallachinensis)为漆树科植物盐肤木(TPAw1S chinensis Mill.)、青麸1? {Rhus po tan in i i Maxim.)或红麸杨(TPAw1S pun jabensis Stew.var.sinica (Diels)Rehd.et Wils.)叶上的虫瘦，主要由五倍子虫牙(ife7a/7Ai5.chinensis (Bell) Baker)寄生而形成，其化学成分有五倍子鞣质、没食子酸、脂肪、树脂、蜡质及无机盐等。秋季采摘，置沸水中略煮或蒸至表面呈灰色，杀死蚜虫，取出，干燥；按外形不同，分为“肚倍”和“角倍”。
[0003]中药指纹图谱指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段，中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。
[0004]中药作用的物质基础主要包括两部分，一是有机成分，二是无机元素。无机元素是指存在于人、植物和动物机体中含量极低的，除碳、氢、氧和氮主要以有机化合物形式存在夕卜，其余的元素的总称，统称为无机盐(矿物质或灰分)。虽然无机元素的含量极低，但在有机体内的生命过程中起着特别重要的作用。有机成分和无机元素在人体内起着互相协调、互相制约的作用，并参与体内各种生化反应，促进机体的自身调节，趋于新的阴阳平衡，从而达到治疗的目的。
[0005]目前，广大学者对五倍子的研究主要集中于其有机成分，对其无机元素的研究较少，且单一的从有机成分角度或者无机元素角度评价五倍子药材的质量，这使得五倍子药材的质量控制并不全面。因此，为了给五倍子药材的深入研究提供依据，解决五倍子药材质量控制不全面的问题，对五倍子药材质量的全面控制方法有待于开发建立。
【发明内容】
[0006]针对上述问题，本发明提供一种五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法，可为全面控制五倍子药材的质量提供依据，有效避免了单一分析评价五倍子药材质量的片面性。
[0007]为实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案，具体步骤为。
[0008]步骤1、米用 ICP-MS法(Inductively coupled plasma mass spectrometry,电感耦合等离子体质谱)测定每一来源的五倍子药材的无机元素，得到ICP-MS分析数据，建立五倍子药材无机元素的指纹图谱。
[0009]步骤2、米用 HPLC 法(High Performance Liquid Chromatography,高效液相色谱法)测定每一来源的五倍子药材的有机成分，得到HPLC分析数据，建立五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱。
[0010]步骤3、所述步骤I中五倍子药材无机元素的ICP-MS分析数据进行系统聚类分析。
[0011]步骤4、所述步骤2中五倍子药材有机成分的HPLC分析数据进行系统聚类分析。
[0012]步骤5、综合分析所述五倍子药材无机元素的指纹图谱及聚类分析与所述五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱及聚类分析，评价五倍子药材的质量。
[0013]所述步骤I包括。
[0014](I)样品预备:将每一来源的五倍子药材敲开，去除内部虫卵后，充分粉碎，过80目筛，备用。
[0015](2)微波消解。
[0016]①、取每一来源的五倍子药材粉末样品0.2g，精密称定(精确至0.0OOOlg)，放入微波消解仪中。
[0017]②、按照每Ig五倍子药材样品中加入20_40mL浓硝酸的比例，进行样品消化。
[0018]③、采用压力主控的微波消解方法，确定微波消解条件如下。
【权利要求】
1.五倍子药材的双重指纹图谱质量控制方法，包括: 步骤1、采用ICP-MS法测定每一来源的五倍子药材的无机元素，建立五倍子药材无机元素的指纹图谱，具体步骤为: .(1)样品预备:将每一来源的五倍子药材敲开，去除内部虫卵后，充分粉碎，过80目筛，备用; .(2)微波消解: .①、取每一来源的五倍子药材粉末样品0.2g，精确至0.0OOOlg，放入微波消解仪中； .②、按照每Ig五倍子药材样品中加入20-40浓硝酸的比例，进行样品消化； .③、采用压力主控的微波消解方法，确定微波消解条件如下: 压力0.3 MPa,时间4 min,功率800W ； 压力0.6 MPa,时间4 min,功率800W ； 压力1.0 MPa,时间4 min,功率800W ； 压力1.5 MPa,时间8 min,功率800W ； .④、样品消解完成后，取下冷却至室温，将微波消解仪中的消解液转移至塑料容量瓶中，得到微波消解液样品，待测； .⑤、相同方法处理空白溶剂进行空白试验，即:在未加五倍子药材粉末样品的空白微波消解仪中，按照上述步骤②中相同的浓硝酸用量，进行样品消化，其他步骤同上述步骤③、④，最终定容溶液为空白溶液； .(3)ICP-MS测定每一来源的五倍子药材中的无机元素:依次将单元素标准储备溶液、空白溶液、及上述步骤(2)中的每一来源的五倍子药材的微波消解液样品引入仪器，在线加入内标液，进行无机元素ICP-MS半定量分析测定，得到ICP-MS分析数据； 具体的ICP-MS测定条件为:RF功率1300W，等离子体流速15.0L.mirT1，载气流速1.13L采样深8.2，雾化室温度2度，分析时间/质量0.3 ;所述单元素标准储备溶液为K、Ca、Na、Mg、Fe、Al、Cr、As,该单元素标准储备溶液浓度为1000 μ g?mL_1 ;所述内标液为 L1、Sc、Ge、Y、In、Tb、Bi，该内标液浓度为 10 μ g.mL-1 ； .(4)、五倍子药材无机元素指纹图谱的建立:所述ICP-MS分析数据经归纳整理后，绘制五倍子药材无机元素的指纹图谱； 所述ICP-MS测定的无机元素为16种，分别为:B、Mg、Al、K、Ca、V、Cr、Mn、Fe、Co、Cu、Zn、Ga、Rb、Sr、Ba、Ce、Pb ； 步骤2、采用HPLC法测定每一来源的五倍子药材的有机成分，建立五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱，具体步骤为: .(1)样品预备:将每一来源的五倍子药材敲开，去除内部虫卵后，充分粉碎，过80目筛，备用; .(2)供试品溶液的制备:取五倍子药材粉末0.lg，精确至0.0OOOlg，用1mL甲醇超声提取半小时，放至室温，过滤，滤液置容量瓶中，所述滤液用甲醇稀释并定容至刻度，制成每毫升含5mg五倍子药材的溶液，摇匀，滤过，取续滤液，备用； .(3)对照品溶液的制备:以没食子酸为内参照物，取没食子酸对照品9.7mg，精确至0.0OOOlg,用甲醇溶解稀释，滤过，制成0.097 mg-mr1的对照品溶液； .(4)HPLC法测定每一来源的五倍子药材有机成分: .①、色谱条件:采用色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相A为甲醇-乙腈(r:r=3:l)及 B 为 0.2% 磷酸水溶液，0-16min，1%A-2%A ；16-43min,10%A-11%A43-65min, 18%A ;65_125min，20%A_25%A ;柱温为 27°C ;流速为 0.8mL.mirT1 ;进样量 10 μ L ；检测波长280nm ； .②、测定:取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，得到HPLC分析数据； .(5)五倍子药材有机成分色谱指纹图谱的建立:所述HPLC分析数据经归纳整理后，绘制五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱； 步骤3、采用SPSS软件对所述步骤(I)中五倍子药材无机元素的ICP-MS分析数据进行系统聚类分析，采用链内平均链锁法，利用欧式距离平方为测度； 步骤4、采用SPSS软件对所述步骤(2)中五倍子药材有机成分的HPLC分析数据进行系统聚类分析，采用链内平均链锁法，利用欧式距离平方为测度； 步骤5、综合分析所述五倍子药材无机元素的指纹图谱及聚类分析与所述五倍子药材有机成分的色谱指纹图谱及聚类分析，评价五倍子药材的质量。
【文档编号】G01N27/62GK104198574SQ201410492599
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月24日 优先权日:2014年9月24日
【发明者】郭小瑞, 李里, 孟宪生, 包永睿, 马福敏, 郭乃菲, 徐美玲, 王帅 申请人:辽宁中医药大学