专利名称：一种乳癖消制剂hplc指纹图谱的构建方法
技术领域：
本发明涉及一种乳癖消制剂的检测方法，特别涉及通过HPLC指纹图谱对乳癖消 制剂进行检测的方法。本发明还涉及了乳癖消制剂的HPLC标准指纹图谱。
背景技术：
中药指纹图谱是指某种或几种中药材中所共有的，具有特征性的某类成分的色谱 或光谱的图谱。当前，中药指纹图谱质量控制技术作为控制中药质量均一性和稳定性的检 测手段，是中药现代化的关键技术之一，这对有效地控制中药材的质量有重要意义。色谱 指纹图谱质量控制技术是当前中药质量研究的亮点。对于成份复杂的中药，过去那种以单 一有效成分作为其质量控制指标的做法是不全面的，用“盲人摸象”做比喻是再贴切不过的 了。而色谱指纹图谱质量控制模式则以色谱分析为手段，从中获取反映中药内在质量的信 息，通过对指纹特征的分析比较，评价中药内在质量的真实性、一致性和稳定性，这是现阶 段综合评价中药质量的最优技术，国家药品监督管理局已要求中药制剂实施指纹图谱质量 控制。据报道，日本汉方药主要生产企业在于20世纪80年代就已经在企业内部采用液相 指纹图谱控制质量，美国、德国、法国等国家亦对植物草药采用指纹图谱质量控制技术。随 着中医中药的推广应用，指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已为国际所 共识。但目前中药植物的指纹图谱往往采用单一植物，对多种中药材合成的中成药复方制 剂的质量图谱研究仍处于起步阶段。乳癖消制剂是纯中药制剂，由鹿角、昆布、鸡血藤、赤芍、漏芦、玄参、夏枯草、红花、 蒲公英、天花粉、三七、海藻、木香、丹皮、连翘十五味药材制成，具有活血化瘀，软坚散结的 功效，用于治疗气滞血瘀所致乳癖，乳腺小叶增生，卵巢囊肿，子宫肌瘤。在中国专利CN 1360932 A，CN1621047A中都公开了同样配方的乳癖消制剂。2005版中国药典第一部也公 开了一种治疗乳腺疾病的乳癖消片，也是由上述药物制备而成的。中国药典2005年版一部所载的乳癖消片质量标准采用薄层色谱法鉴别三七皂苷 Rl和人参皂苷Rbl及Rgl，没有含量测定项，不利于药品的质量控制。CN101700306A中公开 了一种乳癖消制剂的检测方法，使用薄层色谱法测定三七、芍药和玄参的有效成分，再结合 HPLC法测定乳癖消制剂中三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rbl及Rgl的含量，其不足之处 在于1. CN101700306A采用的检测方法需要既进行薄层色谱法定性，又要采用HPLC定 量，步骤繁琐，而且乳癖消制剂含有十五味药材的有效成分，仅仅测定其中的3个药材不足 以全面对该复方制剂的质量进行控制，没有对其中主要多味药材中的化学成分进行全面、 系统的检测。2.不能全面监控中间体，成品的质量。综上所述，现有技术中对乳癖消制剂的检测方法存在检测方法繁琐，定量、定性的 有效成分少，不能快速、全面地对乳癖消制剂进行检测和鉴定等缺陷。
发明内容
本发明提供一种通过HPLC指纹图谱对乳癖消制剂进行检测的方法，其目的是克 服上述现有技术中的不足之处以达到对乳癖消制剂进行快速、稳定地质量控制。该方法采 用HPLC线性梯度洗脱在一个流动相系统首次同时检出复方中七味药材成分，从色谱峰的 特征和相似度结果判断乳癖消制剂样品的合格与否，从整体上全面反映乳癖消制剂所用药 材内在质量，不仅能全面反映乳癖消制剂成品的质量，还可依据成品、半成品的指纹图谱的 变化来追根溯源寻找工艺操作中的问题。本发明还提供了乳癖消制剂的标准指纹图谱。本发明的通过HPLC指纹图谱对乳癖消制剂进行检测的方法包括如下步骤(1)供试品溶液的制备取乳癖消制剂10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，超声的功率250W、频率33kHz，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸 干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用 氨试液30ml充分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱利的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸 干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、哈巴俄苷、三七皂 苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、连翘苷、熊果酸、去氢木香内酯适量，加甲醇使溶解， 分别制成对照品溶液；各对照品浓度分别为(mg^mL1)羟基红花黄色素A(0. 13)，芍药苷 (0. 125)，哈巴俄苷(0. 12)，熊果酸(0. 06)，人参皂苷Rgl (1.2)，人参皂苷Rbl (0. 8)，三七皂 苷Rl (0. 3)，去氢木香内酯(0. 02)，连翘苷(0. 07)。(3)乳癖消制剂HPLC指纹图谱的测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 70 μ 1，进样，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算 供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得乳癖消制剂HPLC指纹图谱；其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱 柱=AlltimaCw 分析柱(4. 6 X 250_，5 μ m，Al ltech，USA)；流动相乙腈(A)-水(B)，其配 比为乙腈10-95%，水90-5% ；线性梯度洗脱；时间:0-108min ；梯度洗脱程序如下
权利要求
1.一种乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是它包括以下步骤(1)供试品溶液的制备取乳癖消制剂I0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声功率250W，频率33kHz处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇勻，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加水 15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml充 分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲 醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、哈巴俄苷、三七皂苷R1、 人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、连翘苷、熊果酸、去氢木香内酯适量，加甲醇使溶解，分别制成 对照品溶液；各对照品浓度分别为羟基红花黄色素A浓度为0. 13mg · mL—1，芍药苷浓度为 0. 125mg 1171,哈巴俄苷浓度为0. 12mg 1171,熊果酸浓度为0. 06mg 1171,人参皂苷Rgl浓 度为1. ang · πι Λ人参皂苷Rbl浓度为0. 8mg · πι Λ三七皂苷Rl浓度为0. 3mg · mL—1，去氢 木香内酯浓度为0. 02mg · mL—1，连翘苷浓度为0. 07mg · mL-1 ；(3)乳癖消制剂HPLC指纹图谱的测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 70 μ 1，进样，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算 供试品的相对保留时间和相对峰面积，既得乳癖消制剂HPLC指纹图谱。其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为 乙腈水，其配比为乙腈10-95%，水90-5% ；线性梯度洗脱；时间=O-IOSmin ；检测波长 203nm ；柱温:30°C ；流速1. Oml · mirT1 ；其中供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，各 检测波长下的相似度均大于0. 80 ；其中所述乳癖消制剂HPLC指纹图谱在203nm下归属于芍药的指纹图谱具有2个特征 峰；归属于玄参的指纹图谱具有4个特征峰；归属于三七的指纹图谱具有6个特征峰；归属 于夏枯草的指纹图谱具有1个特征峰归属于红花的指纹图谱具有3个特征峰；归属于木 香的指纹图谱具有5个特征峰；归属于连翘的指纹图谱具有2个特征峰；所述图谱的图形 如说明书附图中的
图1、图2和/或图6所示的图谱。
2.根据权利要求1所述的乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其中线性梯度洗脱的 条件为0 6min时，流动相为10%乙腈和90%水； 6 IOmin时，流动相为12%乙腈和88%水； 10 30min时，流动相为29%乙腈和71%水； 30 50min时，流动相为乙腈和66%水； 50 55min时，流动相为42%乙腈和58%水； 55 108min时，流动相为95%乙腈和5%水。
3.根据权利要求1或2所述的乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是其 成分之一的芍药、玄参、三七、夏枯草、红花、木香、连翘七味药材的HPLC指纹图谱的构建方 法，与乳癖消制剂具有相同的检测条件并分别得到各自药材的指纹图谱。
4.根据权利要求1或2所述的乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是在 203nm波长检测下利用各标准品对主要峰进行比较确定2号峰为芍药苷、3号峰为三七皂苷Rl、5号峰为人参皂苷Rgl、6号峰为连翘苷、7号峰 为哈巴俄苷、10号峰为人参皂苷Rbl、16号峰为去氢木香内酯、21号峰为熊果酸。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征 是乳癖消制剂的剂型是任何一种药剂学上所说的剂型。
6.根据权利要求5所述的乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是乳癖消制 剂的剂型是颗粒剂。
全文摘要
本发明涉及一种乳癖消制剂的HPLC指纹图谱的构建方法，包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、各原料药与成品之间的相关性的测定；用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品相对保留时间和相对峰面积，即得到乳癖消制剂HPLC标准指纹图谱。并由此方法所得到的乳癖消制剂HPLC标准指纹图谱在203nm下归属于芍药的指纹图谱具有2个共有峰；归属于玄参的指纹图谱具有4个共有峰；归属于三七的指纹图谱具有6个共有峰；归属于夏枯草的指纹图谱具有1个共有峰；归属于红花的指纹图谱具有3个共有峰；归属于木香的指纹图谱具有5个共有峰；归属于连翘的指纹图谱具有2个共有峰。
文档编号A61P15/00GK102068553SQ201010576579
公开日2011年5月25日 申请日期2010年12月7日 优先权日2010年12月7日
发明者余伯阳, 张剑, 朱丹妮, 董迪, 陈维 申请人:哈尔滨泰华药业股份有限公司