3-氨基哌啶的hplc分析方法
【专利摘要】本发明属于药物分析【技术领域】，具体涉及一种3-氨基哌啶定量方法及其手性纯度的检测方法。本发明采用苯甲酰氯为衍生化试剂与3-氨基哌啶在低温和大量有机溶剂中进行快速衍生化生成苯甲酰-3-氨基哌啶，然后使用HPLC-UV进行苯甲酰-3-氨基哌啶检测分析。本发明采用普通C18柱进行定性、定量分析，采用手性色谱柱进行对映体过量率测定。该方法操作简单、灵敏度高、准确性强，易于标准化操作。
【专利说明】3-氨基哌啶的HPLC分析方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析【技术领域】，具体涉及3-氨基哌啶定性、定量方法及其手性纯度的高效液相色谱分析方法。
【背景技术】
[0002]3-氨基哌啶是利拉利汀的重要中间体，建立并确定3-氨基哌啶的定性、定量方法以及手性μ值测定方法对3-氨基哌啶的检测和监测具有重要意义。HPLC检测法具有检测灵敏度高、精确度高，检测所需时间少，检测结果重复性高等优点，是当前分析化学中常用检测手段。Meek 等(W02011160037)采用 Crownpak? CR+(150X4.6 mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基哌啶进行检测，其流动相为95:5 (V:V)的HClO4 (pH= I): MeOH，柱温0°C,流速0.6 mL/min, (S) -3-氨基哌唳3.0min出峰，(R) -3-氨基哌唳3.7min出峰。
[0003]Watanabe 等人(Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical C0., Ltd., Japan 2009)采用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150X4.6mm)色谱柱在254nm下对衍生物进行分析，其流动相组成为70:30 (V:V)的水:乙腈，流速 1.0 mL/min, (S)-衍生物 19.1 min 出峰，(R)-衍生物 31.5 min 出峰。Sakarai 等(Tetrahedron:Asymmetry )米用二对甲基苯甲酰L-酒石酸为衍生化试剂对3_氨基哌啶进行衍生化使其在紫外254nm下可见，采用GL Science Inertsil 0DS-2(150X4.6 mm)色谱柱，254nm下对衍生物进行分析，其流动相为50:50 (V:V)的0.03%氨水溶液(醋酸调 pH=4.9): MeOH，柱温 40 °C，流速 1.0 mL/min, (S)-衍生物 39.4min 出峰，(R)-衍生物42.5min出峰，能达到较好的分离效果。但出峰时间较长，完成一次分析至少需要45分钟。
[0004]相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌啶及其手性异构体紫外吸收很弱，因此通常采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，同时采用合适的衍生化试剂和色谱条件，能使检测在很短的时间内完成是定性定量3-氨基哌啶急需解决的基础问题。本发明正是基于这样的目的进行了研究并提供了一种快速的测定方法。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种利用衍生化法和HPLC法对3-氨基哌啶进行定性、定量和对映体过量率分析的方法。
[0006]为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为:
一种3-氨基哌啶的HPLC定性、定量分析和对映体过量率分析方法，具体包括如下步
骤:
步骤一、衍生化
将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在低温条件下，以苯甲酰氯为衍生化试剂，调节3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩尔比，进行衍生化反应生成苯甲酰-3-氨基哌啶，反应式见式I ;
步骤二、HPLC分析采用反相高效液相色谱-紫外光谱检测器对苯甲酰-3-氨基哌啶进行定性、定量分析和对映体过量率分析，进而得到对3-氨基哌啶进行定性、定量分析和对映体过量率分析；
【权利要求】
1.一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:具体包括如下步骤: 步骤一、衍生化 将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在低温条件下，以苯甲酰氯为衍生化试剂，调节3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩尔比，进行衍生化反应生成苯甲酰-3-氨基哌啶，反应式见式I ; 步骤二、HPLC分析 采用反相高效液相色谱-紫外光谱检测器对苯甲酰-3-氨基哌啶进行定性、定量分析和对映体过量率分析，进而得到对3-氨基哌啶进行定性、定量分析和对映体过量率分析；
2.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:有机溶剂选自甲苯、二甲苯、石油醚、四氢呋喃、二氯甲烷和己烷中的一种或两种以上的组合。
3.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述有机溶剂的体积与3-氨基哌啶的体积比为5~1000:1，优选的为5~200:1。
4.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述低温条件下指反应温度范围为-20°C~20°C ;较优的温度范围为_5°C~5°C。
5.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩尔比为1:0.5~1:1。
6.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述的紫外光谱检测器的检测波长为22(T300 nm，优选230_260nm。
7.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:高效液相色谱定性、定量分析所使用的色谱柱是普通反相C18柱，流动相由磷酸盐水溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相总体积的百分比大于0%并小于30%，优选大于0%并小于20%。
8.根据权利要求1所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:高效液相色谱对映体过量率分析所使用的色谱柱是以糖蛋白为填料的手性柱；流动相由缓冲盐溶液和有机溶剂组成溶液，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种，有机溶剂占流动相总体积的百分比大于0%并小于5%，优选大于0%并小于2%。
9.根据权利要求8所述的一种3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:缓冲盐选自醋酸盐或磷酸盐。
【文档编号】G01N30/02GK104034814SQ201410253833
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月10日 优先权日:2014年6月10日
【发明者】孙凤霞, 郝忠翠, 郝飞飞, 王美玲, 张凤娇 申请人:河北科技大学