一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法
【专利摘要】本发明涉及一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法。所述提取净化方法包括以下步骤：取组织样品5.0g置于离心管一中，添加5ml的超纯水和10ml提取液，添加0.5~1.0ug内标混合液和0.2~0.5ug的13C12-PCB103溶液，其中提取液的组成为重量百分比：50%的乙腈，30%的二氯甲烷，15%的四氢呋喃，5%α-丙氨酸的D型旋光异构体；然后在离心管一中添加混合盐水溶液10ml和30%磷酸水溶液1~2ml；在离心管二中添加1-2g的氯化镁，将5ml上清液一注入离心管二，振荡20-30s，离心10-15min，取上清液，然后转移到气相色谱分析瓶中，进行仪器分析。本发明有机氯加标回收率多数在90%~110%之间，与传统的方案相比具有10%以上的提高，并且基质干扰少，峰型好，便于气相色谱或气质联用仪进行检查。
【专利说明】一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法。
【背景技术】
[0002]有机氯农药(OCPs)是12种优先控制的有机污染物中的一大类，曾在世界范围内被广泛生产和使用，作为全球性的污染物，OCPs具有长期残留性、生物蓄积性、半挥发性和高毒性，OCPs已经对人类健康和环境构成了严重危害，其在各样品中残留量的测定方法一直是研究的热点。
[0003]中国专利文献CN1563976，公开了一种用于有机氯、有机磷农药分析的同步净化提取方法，具有采用的试剂较少，安全性较高，步骤少却能分析比较多的有机氯和有机磷农药，其中有机氯农药的加标回收率大多能够达到80%以上，有机磷农药的加标回收率大多能达到70%以上。
[0004]但是上述方案并不能直接适用于海洋贝类，因为海洋贝类的组分成分复杂、蛋白较多，特别是含硫蛋白含量相对较高，上述方法中采用的试剂和步骤不能很好的净化样品，导致基质干扰大，加标回收率低等问题。
[0005]另外，国内外已报道的关于海产品中有机氯农药的提取净化方法具有如下的缺占-
^ \\\.
[0006]仪器要求高(GPC净化)、运行成本高、耗时长(GPC净化、索氏提取)、对部分目标化合物结构破坏(浓H2SO4酸洗除脂肪、蛋白)等缺点，不具有很好的应用、推广价值。
【发明内容】
[0007]本发明给出了一种适用于海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，具有操作简单，成本低、安全、基质干扰少、回收率高等的特点。
[0008]本发明的技术方案是:
[0009]一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，其特征在于所述提取净化方法包括以下步骤:
[0010]一、取组织样品5.0g置于离心管一中，添加5ml的超纯水和1ml提取液，添加
0.5 ?1.0ug ISTD 内标混合液和 0.2 ?0.5ug 的 13C12-PCB103 溶液，然后 3000 ?4000rpm匀浆60s;其中提取液的组成为重量百分比:50%的乙腈，30%的二氯甲烷，15%的四氢呋喃，5% α-丙氨酸的D型旋光异构体；
[0011]二、然后在离心管一中添加混合盐1ml和30%磷酸水溶液I?2ml，振荡5-10min, 3000rpm-4000rpm离心6_8min,通过注射器吸取5ml的上清液一，在-22?_26°C冰箱中放置2?3h ;所述混合盐为含4?6g硫酸钾、l_2g醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠；
[0012]三、在离心管二中添加l_2g的氯化镁，将5ml上清液一注入离心管二，振荡20-30s，离心 10-15min，吸取上清液二到含有 100mg-300mg 硫酸镁、300mg-600mg PSA、150mg-300mgC18 的离心管中，振荡 2_3min, 4000rpm-4500rpm 离心 10_15min,取上清液，然后转移到气相色谱分析瓶中，进行仪器分析。
[0013]本方案与现有技术的不同之处有以下几点:
[0014]1、采用与众不同的提取液。传统的提取液具有(基质干扰大、加标回收率低、成本高、对部分有机氯农药有结构破坏等缺点，而本发明的改进在于加入了适量的α-丙氨酸的D型旋光异构体。
[0015]发明人发现，添加过α -丙氨酸的D型旋光异构体的样品，在气相色谱或气质联用检测时，具有基质干扰少，峰型好等的优点，其原理可能是其构象与海洋贝类组织样品中的某种基质干扰组分产生了分子层面上的交联，导致上述现象的发生。而发明人发现，α-丙氨酸的其他旋光异构体没有上述特性。
[0016]2、样品添加到在混合盐水溶液的基础上再添加了 30%磷酸水溶液，发明人发现，添加了 30%磷酸水溶液后，具有含硫化合物净化效果好等特点，其原理可能是磷酸的磷酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根与样品中的某些组分发生了分子层面的交联，使得经过处理的样品有利于改善色谱的峰型。
[0017]本发明有机氯加标回收率多数在90%?110%之间，与传统的方案相比具有10%以上的提高，并且基质干扰少，峰型好，便于气相色谱或气质联用仪进行检查。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是本发明16种有机氯农药标准的选择离子模式(SIM)下的谱图。
[0019]图2是本发明前处理的δ _BHC的选择离子模式(SM)模式棒锥螺样品谱图。
[0020]图3匀浆提取-稀硫酸法处理的δ _BHC的选择离子模式模式棒锥螺样品谱图。
【具体实施方式】
[0021]实施例1
[0022]一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，包括以下步骤:在离心管一中添加5ml的的超纯水和1ml提取液，添加0.5?1.0ug ISTD内标混合液和0.2?
0.5ug的13C12-PCB103溶液；其中提取液的组成为重量百分比:50%的乙腈，30% 二氯甲烷，15%的四氢呋喃，5% α -丙氨酸的D型旋光异构体；组织样品通过3000?4000rpm匀浆60s，然后添加预先称量过的混合盐溶液1ml和30%磷酸水溶液l_2ml，振荡5_10min，3000rpm-4000rpm离心6_8min,通过注射器吸取大约5ml的上清液，在_22?_26°C冰箱中放置2?3h，加入离心管一；所述混合盐为含4?6g硫酸钾、l-2g醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠；同时，在离心管二中添加l_2g的氯化镁，将离心管一得到的液体注入离心管二，振荡20-30s，离心10-15min，吸取上清液到含有100mg-300mg硫酸镁和300mg-600mg PSA与150mg-300mgC18 的离心管中，振荡 2_3min, 4000rpm-4500rpm 离心 10_15min,取上清液，然后转移到气相色谱分析瓶中，进行仪器分析。
[0023]ISTD内标混合液浓度为lOug/mL的磷酸三苯酯、2_溴联苯、十氯联苯混合液。
[0024]色谱条件:HP-5MS毛细管柱(30mX0.25mmX0.25 μ m);载气柱流速 Iml.mirT1 ;进样口温度260°C，柱升温程序:初始温度80°C，以15°C.min—1速率升至200°C，保持2minn。再以10°C.miiT1速率升至250°C，保持min ;最后以20°C.mirT1速率升至290°C，并保持5min;不分流进样，进样量为I μ I。质谱条件:电子轰击(EI)离子源，电子能量70eV，EI源温度230°C，接口温度280 V，溶剂延迟时间5.0min。
[0025]表I不同前处理方法的棒锥螺的有机氯加标回收率)比较表
[0026]
ψ终本方法~勾浆提取-稀索式提取-? *化合物序号保留时间(RT)回收率硫酸法回收浓硫酸法回_(%)率(％)收率(%)
1PCB103 (进柞)1114.899
2TCMX (示踪)2.10.26794,574.2877.21
3a BHC3 11.12689.6丫? 丨、扰66.21
4六氯苯4 11.30591.2472.7473.87
5|3 BHC5 11.752101.389.8681.2.7
7γ—BHC6 11.9103.688.1784.644
8quintozene7 丨 2.014110.3 丨90.9!结构破坏
9δ-BHC8 13.256S7.682.6381.16
10七氯9 13.56698.6有干扰71.28
12环氧七氯11 15.22492.585.5083.62
13反 K/7]-12 15.74399.489.0496.59
14ο,ρ'-DDE13 15.85103..575.3972.32
15顺氯丹14 16.102102.886.3988.94
16ρ,ρ'-DDE15 I6.62S100.278.6871.02
17ο,ρ'-DDD16 16.86895.S77.76105.84
18ρ,ρ'-DDD17 17.85489,484.91108.89
190.p'-DDT18 17.96596.590.40280.14
20p.p'-DDT_19_19.178_882_53.57_( 7 H(
[0027]实施例2
[0028]与实施例1不同的是，本方案的混合盐为含4g硫酸钾、Ig醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠、30%磷酸水溶液2ml的水溶液。
[0029]实施例3
[0030]与实施例1不同的是，本方案的混合盐为含6g硫酸钾、Ig醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠、30%磷酸水溶液Iml的水溶液。
[0031]实施例4
[0032]与实施例1不同的是，本方案的混合盐为含4g硫酸钾、2g醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠、30%磷酸水溶液2ml的水溶液。实验表格如下表所示，其中，实施例4的方案为最佳实施例，其原理可能是30%磷酸水溶液2ml所包含的磷酸根，磷酸二氢根和磷酸氢根对样品中组分发生分子层面的交联，有利于后期分析的峰型效果。
[0033]表2含实施例1-4混合盐的有机氯回收率比较表
[0034]出峰仆A物保《时_ rRT)实施例2实施例3实施例4
顺序化口物序'保田时间(RT)(中间)(最差)(最好)
IPCB103 (进样)1114.899
ITCMX (小丨1?) I10.26794.592.596.5
3a BHC311.12689.686.692.4
4六奴苯411.30591.2488.690.8
5β BHC511.752101.3105.3102.6.7γ BIlC611.9103.6103.6101.9
8quintozene712.014110.31105.4108.3
9δ-BHC813.25687.684.589.8
10Li^i913.56698.692.398.1
12环鉍 Li奴1115.22492.590.191.6
13反奴丹1215.74399.491.297.5
14(xp'-DDH1315.85103.5101.2.104.1
15顺奴乃.1416.102102.892.6101.5
16ρ,ρ'-DDE1516.628100.291.599.5
17ο,ρ'-DDD1616.86895.890.397.6
18ρ,ρ'-DDD1717.85489.487.491.5
19ο,ρ’-DDT1817.96596.590.297.4 ρ,ρ'-DDT_19_19.178_88J_8^9_89^_
【权利要求】
1.一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，其特征在于所述提取净化方法包括以下步骤: 一、取组织样品5.0g置于离心管一中，添加5ml的超纯水和1ml提取液,添加0.5?1.0ug ISTD内标混合液和0.2?0.5ug的13C12-PCB103溶液，然后3000?4000rpm匀浆60s ;其中提取液的组成为重量百分比:50 %的乙腈，30 % 二氯甲烷，15 %的四氢呋喃，5 %α-丙氨酸的D型旋光异构体； 二、然后在离心管一中添加混合盐水溶液1ml和30%磷酸水溶液I?2ml，振荡5-10min, 3000rpm-4000rpm离心6_8min,通过注射器吸取5ml的上清液一，在-22?_26°C冰箱中放置2?3h ;所述混合盐水溶液为含4?6g硫酸钾、l-2g醋酸钠、1.0g柠檬酸二氢钠； 三、在离心管二中添加l_2g的氯化镁，将5ml上清液一注入离心管二，振荡20-30s，离心 10-15min，吸取上清液二到含有 100mg-300mg 硫酸镁、300mg-600mg PSA、150mg-300mgC18 的离心管中，振荡 2_3min, 4000rpm-4500rpm 离心 10_15min,取上清液，然后转移到气相色谱分析瓶中，进行仪器分析。
2.根据权利要求1所述的海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，其特征在于所述注射器的进口端设有一个20um的聚乙烯筛。
3.根据权利要求1所述的海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法，其特征在于所述混合盐水溶液含4g硫酸钾、2g醋酸钠、Ig柠檬酸二氢钠；所述30%磷酸水溶液的添加量为2ml。
【文档编号】G01N30/06GK104165953SQ201410404174
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2014年8月15日 优先权日:2014年8月15日
【发明者】余新威, 胡灏琰, 方力, 王婕妤 申请人:余新威