一种p-内酰胺类抗生素检测卡的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种e-内酰胺类抗生素检测卡，它包括样品垫、含e-内酰胺类抗生素捕获单克隆抗体的金标垫、依次含有检测线e-内酰胺类抗生素包被多克隆抗体，质控线兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、吸收垫和衬板；并提供了e-内酰胺类抗生素检测卡的性能检测及质量控制方法，可以准确、简单、快速、适合现场检测的e-内酰胺类抗生素，保证了检测卡检测结果一致性。
【专利说明】一种β-内酰胺类抗生素检测卡
【技术领域】
[0001] 本发明属于检验检疫【技术领域】，具体地说一种β -内酰胺类抗生素检测卡。
【背景技术】
[0002] β -内酰胺类抗生素是历史最悠久的抗微生物药物，同时也是最大和最重要的一 类抗生素，自1941年青霉素首次应用以来，至今已研制出了近百种β_内酰胺类抗生素， 分为青霉素类、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类、氧头孢类、碳头孢烯类、青霉烯类、单环 β_内酰胺类和β_内酰胺酶抑制剂等。主要用于治疗革兰氏阴性菌，如葡萄球菌、肺炎球 菌、链球菌、大肠杆菌、嗜血杆菌、沙门氏菌等引起的各种感染。在动物生产中，β-内酰胺 类抗生素广泛用于控制奶牛的乳房炎，治疗畜禽尿道、胃肠道和呼吸道感染等。但由于使用 方法不当或不遵守休药期规定等原因，均可造成该类抗生素在肉、蛋、奶中的残留，给人类 健康带来严重危害，如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强病原菌耐药性等。其中青 霉素在食品中的残留会对青霉素过敏者产生健康危害，更为重要的是，β_内酰胺类抗生素 被过量食入健康人肠道，会破坏健康人的正常菌群环境，导致免疫力降低。
[0003] 为了保障食品安全，适应WT0的要求，增强国内牛奶及乳制品业的国际竞争力。 2001年和2002年，农业部先后公布了《无公害食品生鲜牛乳》（ΝΥ/Τ5045-2001)、《无公害 食品灭菌乳》（ΝΥ5141-2002)和《无公害食品巴氏杀菌乳》（ΝΥ5140-2002)等行业标准，规 定了"抗生素不得检出"，检验方法采用GB/T5049-85《牛乳的检验方法》中TTC (氯化三苯 四唑）法，但此法的检测限仅为0. 〇4U/mL，和欧美国家检测方法相差一个数量级。
[0004] 目前，针对β -内酰胺类抗生素残留的检测方法有微生物法、薄层色谱法、气相色 谱法、气-质联用法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法和毛细管电泳-质谱法等。 然而，上述方法成本高、耗时长、需要专业人员进行操作，并不适合原料乳质量和其他畜禽 产品的现场快速检测。因此，急需建立一种准确、简单、快速、适合现场检测的技术方法及产 品。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是一种准确、简单、快速、适合现场检测的β -内酰胺类抗生素检测 卡。
[0006] -种β -内酰胺类抗生素检测卡，它包括样品垫、含β -内酰胺类抗生素捕获单克 隆抗体的金标垫、依次含有检测线β_内酰胺类抗生素包被多克隆抗体，质控线兔抗鼠IgG 的硝酸纤维素膜、吸收垫和衬板； 所述的一种β_内酰胺类抗生素检测卡，是经过下述方法检测的： (1)灵敏度验证 空白对照作5平行测试；其他溶液做20个平行测试；记录每个测试目测结果，同时用 读数仪进行判读；计算每种测试液的P0D值，P0D值为检出阳性结果次数占所有检测结果的 比率；
【权利要求】
1. 一种β-内酰胺类抗生素检测卡，它包括样品垫、含β-内酰胺类抗生素捕获单克 隆抗体的金标垫、依次含有检测线β-内酰胺类抗生素包被多克隆抗体，质控线兔抗鼠IgG 的硝酸纤维素膜、吸收垫和衬板。
2. 根据权利要求1所述的一种β-内酰胺类抗生素检测卡，其特征在于，是经过下述方 法检测的： (1) 灵敏度验证 空白对照作5平行测试；其他溶液做20个平行测试；记录每个测试目测结果，同时用 读数仪进行判读；计算每种测试液的POD值，POD值为检出阳性结果次数占所有检测结果的 比率；
?其中X为检出阳性结果次数，N为测定总次数； (2) 特异性验证 选择非β -内酰胺类10种，不含在试剂盒中的其他β -内酰胺类药物3种；选择两个 浓度，作5平行测试； (3) 自然样品验证 50份牛奶自然样品分别用本试剂盒方法和LC-MS-MS方法进行测试，试剂盒每份样品 平行测试2次，参考方法每份样品测定一次，计算相对准确度； (4) 耐变性 测试基质用牛奶，添加浓度为青霉素4 μ g/L，每种测试条件10平行；耐变因素选择，确 定需要评价的变量2个：加样量和孵育温度，每个变量取两个不同的水平； (5) 批间变异 采用含青霉素4 μ g/L水平的牛奶与阴性对照样品进行批间变异实验，取3个不同批号 的测试条产品进行检测，每种测试条件10平行；报出每种条件下检测的POD值。
【文档编号】G01N33/577GK104215766SQ201410468722
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月16日 优先权日:2014年9月16日
【发明者】刘金华, 罗雁非, 牟峻, 薜强, 邹明强 申请人:吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心