利用卤虫对毒物毒性的监测方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用卤虫对毒物毒性的监测方法，属于环境样品检测方法领域。所述的利用卤虫对毒物毒性的监测方法，包括以下步骤：（1）卤虫的制备：将卤虫卵在适合的条件下孵化，制备出II-III期无节幼虫，为测试生物。（2）中毒界限值测定：通过观察计数卤虫在10秒钟内泳动次数少于正常中毒界限值时的浓度即为中毒界限值。（3）LC50-24测定：通过观察计算卤虫在24小时内死亡率超过50%以上的浓度即为LC50-24浓度。本发明所述的监测方法，以II-III期卤虫为测试生物，可监测毒物或测试溶液对卤虫的中毒阀值和LC50-24浓度，从而定义该毒物或测试溶液的生物毒性。该方法具有操作简便、快速、覆盖面宽、技术易掌握、所需设备不复杂就能监测方的毒物毒性等特点。
【专利说明】利用卤虫对毒物毒性的监测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用卤虫对毒物毒性的监测方法，属于环境样品检测方法领域。
【背景技术】
[0002] 卤虫又名丰年虫、鳃足虫，为节肢动物门甲壳纲生物，应用卤虫进行LC50-96K LC50-24h等的实验已经经过国际会议确定并标准化，目前国外的一些研究已将以卤虫、阿 半巴虫、大型水蚤等作为受试生物的检测方法，应用于工厂排水的毒性测试，实验类型有 急性毒性试验、阻碍生长试验、繁殖试验等，采用的指标有LC50、IC25，L0EC等，我国目前 在环境科学与工程领域关于毒物毒性的生物检测研究尚处于起步阶段，已有的为数不多 的研究也没有进行较多应用，而且远远不能覆盖日益增多的毒物类别与种类。
[0003] 因此研究一种操作简便、快速、覆盖面宽、技术易掌握、所需设备不复杂的毒物毒 性的监测方法很有必要。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在提供一种操作简便、快速、覆盖面宽、技术易掌握、所需设备不复杂的 毒物毒性的监测方法。
[0005] 本发明所述的利用卤虫对毒物毒性的监测方法，包括以下步骤： (1)卤虫的制备：将卤虫卵在适合的条件下孵化，制备出II-III期无节幼虫，为测试生 物。
[0006] (2)中毒界限值测定：通过观察计数卤虫在10秒钟内泳动次数少于正常中毒界限 值时的浓度即为中毒界限值。
[0007] (3) LC50-24测定：通过观察计算卤虫在24小时内死亡率超过50%以上的浓度即 为LC50-24浓度。
[0008] 优选的，本发明所述的卤虫制备方法为将卤虫卵放入100ml大试管中，每个大试 管放入50mg卤虫与90ml人造海水，置于27°C的水浴内，光照孵化。同时用一小充气 泵缓缓充气，以满足氧的需要和使其卵在孵化过程中一直悬浮，孵化时间为48h，分两阶 段：第一阶段经36h后将试管取出，吸弃掉上浮而未孵化的虫卵，倾入另一放有80mL人造 海水的大试管中，第二阶段继续在相同条件下孵化12小时，48h后该虫体即为本实验所用 II-III期卤虫。
[0009] 本发明所述的中毒界限值测定的具体方法为取点滴反应板，向点滴反应板每孔内 加入仅含1支卤虫的一滴人工海水溶液，每十个孔为一组，在实验显微镜下观察10秒钟内 泳动次数，求出其均值及标准差，确定X-3SD为中毒界限值。如果试验组卤虫在10秒钟内 泳动的次数小于中毒界限值即认为该卤虫发生了中毒，如果卤虫死亡、运动明显迟缓，也认 为发生了中毒。测试时，向点滴反应板每孔内加入仅含1支卤虫的一滴人工海水溶液，每十 个孔为一组，再将同测试液分别滴入4滴，此为实验组，同时以人工海水为对照组，2h后， 在实验显微镜下观察卤虫泳动频率，即10秒钟内泳动次数，求出其均值X及标准差SD以及 X-3SD值，实验组凡是低于这个中毒限值的即为中毒，记录实验组中毒数及中毒率，50%卤 虫发生中毒则认为此组卤虫发生了中毒,此剂量为中毒阀值。
[0010] 本发明所述的LC50-24测定方法为取点滴反应板，每孔内加入仅含1支卤虫的一 滴人造海水溶液，每6个孔为一种浓度实验组，将某一浓度的毒物或测试溶液分别向孔中 滴入5滴，24h后，在实验显微镜下观察，即卤虫24h死亡一半的毒物或测试浓度为该化学 毒物的LC50-24h浓度。
[0011] 本发明所述的监测方法，以Π-ΙΙΙ期卤虫为测试生物，可监测毒物或测试溶液对 卤虫的中毒阀值和LC50-24浓度，从而定义该毒物或测试溶液的生物毒性。该方法具有操 作简便、快速、覆盖面宽、技术易掌握、所需设备不复杂就能监测方的毒物毒性等特点。
【具体实施方式】
[0012] 实施例一： (1)齒虫的制备：将齒虫卵放入100ml大试管中，每个大试管放入50mg齒虫与90ml 人造海水，置于27°C的水浴内，光照孵化。同时用一小充气泵缓缓充气，以满足氧的需 要和使其卵在孵化过程中一直悬浮，孵化时间为48h，分两阶段：第一阶段经36h后将试 管取出，吸弃掉上浮而未孵化的虫卵，倾入另一放有80mL人造海水的大试管中，第二阶段 继续在相同条件下孵化12小时，48h后该虫体即为本实验所用II-III期卤虫。
[0013] (2)中毒界限值测定：取点滴反应板，向点滴反应板每孔内加入仅含1支卤虫的一 滴人工海水溶液，每十个孔为一组，在实验显微镜下观察10秒钟内泳动次数，求出其均值 及标准差，确定X-3SD为中毒界限值。如果试验组卤虫在10秒钟内泳动的次数小于中毒 界限值即认为该卤虫发生了中毒，如果卤虫死亡、运动明显迟缓，也认为发生了中毒。测试 时，向点滴反应板每孔内加入仅含1支卤虫的一滴人工海水溶液，每十个孔为一组，再将同 测试液分别滴入4滴，此为实验组，同时以人工海水为对照组，2h后，在实验显微镜下观察 卤虫泳动频率，即10秒钟内泳动次数，求出其均值X及标准差SD以及X-3SD值，实验组凡 是低于这个中毒限值的即为中毒,记录实验组中毒数及中毒率,50%卤虫发生中毒则认为此 组卤虫发生了中毒，此剂量为中毒阀值。
[0014] (3) LC50-24 测定： 取点滴反应板，每孔内加入仅含1支卤虫的一滴人造海水溶液，每6个孔为一种浓度 实验组，将某一浓度的毒物或测试溶液分别向孔中滴入5滴，24h后，在实验显微镜下观 察，即卤虫24h死亡一半的毒物或测试浓度为该化学毒物的LC50-24h浓度。
[0015] 实施例二：中毒阀值和的LC50-24浓度测定 按本发明所述的监测方法，对以下七种毒物进行中毒界限值和LC50-24浓度测定，测 定结果如表_1所不： 表-1化学物质对卤虫的中毒阀值和LC50-24浓度
【权利要求】
1. 利用卤虫对毒物毒性的监测方法，包括以下步骤： (1) 卤虫的制备：将卤虫卵在适合的条件下孵化，制备出II-III期无节幼虫，为测试生 物； (2) 中毒界限值测定：通过观察计数卤虫在10秒钟内泳动次数少于正常中毒界限值时 的浓度即为中毒界限值； (3) LC50-24测定：通过观察计算卤虫在24小时内死亡率超过50%以上的浓度即为 LC50-24 浓度。
2. 如权利要求1所述的利用卤虫对毒物毒性的监测方法，其特征在于所述的卤虫制备 方法为将齒虫卵放入l〇〇ml大试管中，每个大试管放入50mg|ii虫与90ml人造海水，置 于27 °C的水浴内，光照孵化； 同时用一小充气泵缓缓充气，以满足氧的需要和使其卵在孵化过程中一直悬浮，孵化 时间为48h，分两阶段：第一阶段经36h后将试管取出，吸弃掉上浮而未孵化的虫卵，倾 入另一放有80mL人造海水的大试管中，第二阶段继续在相同条件下孵化12小时，48h后该 虫体即为本实验所用Π -ΙΙΙ期卤虫。
【文档编号】G01N33/00GK104297427SQ201410524185
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月8日 优先权日:2014年10月8日
【发明者】陆强 申请人:陕西华陆化工环保有限公司