一种抗干扰单组份酶底物显色试剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH值为4.0-6.0。本发明通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4.0-6.0，使抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景；且单组份的显色液避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的步骤，减少了操作时间，提高了效率，避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底物显色试剂的灵敏度。
【专利说明】一种抗干扰单组份酶底物显色试剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及酶底物显色试剂领域，具体地，涉及一种抗干扰单组份酶底物显色试 剂。
【背景技术】
[0002] 酶底物即TMB，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端产物，可在370 或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量和定性分析。 其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的酶底物、双氧水等反应，加入终 止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少，从而判断 某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。
[0003] 现有市售的酶联免疫试剂盒所采用酶底物显色剂液大多为双组份，分A液和B液， 使用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高 和资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保 存时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点。
[0004] 现有技术的酶底物显色试剂及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所 述A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0? 01-0. 5mol/L，磷酸氢二钠0? 01-0. 5mol/L，过氧化氢 0. 01-0. 5mol/L，EDTA0. 1-lmmol/L;所述B液包括酶底物、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底 物的摩尔浓度为〇.l-lmm〇l/L，所述HC1的摩尔浓度为0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷 酮的质量分数为〇. 1-10%。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，以克服现 有显色液显色背景高、稳定性差、灵敏度低的问题。
[0006] 此外，本发明还包括上述抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用。
[0007] 本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种抗干扰单组份酶底物显色试剂， 每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0. 1-0. 5g， 甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为 4. 0_6. 0〇
[0008] 现有的酶底物显色试剂为双组份显色液，在使用前需要将两种组分混匀后才能进 行显色测试，该过程不仅浪费时间，操作麻烦，且会导致在混合两种组分时显色液的有效成 分挥发，从而导致酶底物显色试剂的灵敏度降低；且现有的显色液没有对其pH进行限定， 使得现有显色液在显色过程中显色背景较高，且稳定性差；本发明将酶底物显色试剂设置 为单组份，且将其显色液的pH值设置为4. 0-6. 0,此外，本发明的抗干扰单组份酶底物显色 试剂中将传统的过氧化氢过氧化脲替换成过硼酸钠，其具有更好的氧化性。
[0009] 实验证明，抗干扰单组份酶底物显色试剂在pH置为4. 0-6. 0之间具有较好的稳定 性，且在显色过程中具有显小的显色背景。
[0010]进一步地，PH值为 4. 5-5. 0。
[0011] 实验证明，酶底物显色试剂在pH置为4. 5-5. 0为抗干扰单组份酶底物显色试剂稳 定性最好的pH值，且具有最小的显色背景。
[0012] 进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
[0013] 实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18_20g的抗干扰单组份酶底物显色试剂 具有更好的稳定性。
[0014] 进一步地，酶底物的质量设置为10_30mg。
[0015] 将酶底物的质量设置为10_30mg能有效的提高显色效果，提高显色的灵敏度。
[0016] 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用，将所述的单组份酶底物显色试剂应用 到酶联免疫试剂盒。
[0017] 综上，本发明的有益效果是： 1、 通过将本发明所述范围内的抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的 显色阶段，避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，简化操作流 程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色 剂的显色效果；避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底 物显色试剂的灵敏度 2、 通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4. 0-6. 0,使抗干扰单组份酶底物 显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例，对发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0019] 实施例1 : 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷 酸氢二钠16g，过硼酸钠0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试 剂的PH值为4.0。
[0020] 实施例2 : 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷 酸氢二钠16g，过硼酸钠0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试 剂的PH值为4. 5。
[0021] 实施例3: 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷 酸氢二钠16g，过硼酸钠0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试 剂的PH值为5.0。
[0022] 实施例4 : 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷 酸氢二钠16g，过硼酸钠0.lg，甘油20ml,酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试 剂的PH值为6.0。
[0023] 实施例5: 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每lOOOmL的显色液包括以下组分：柠檬酸10g，磷 酸氢二钠20g，过硼酸钠0. 5g，甘油30ml,酶底物40mg，30mL乙醇，所述单组份酶底物显色 试剂的PH值为5.0。
[0024] 实施例6 : 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷 酸氢二钠18g，过硼酸钠0. 2g，甘油25ml,酶底物10mg，20mL乙醇，所述单组份酶底物显色 试剂的PH值为5.0。
[0025] 实施例7 : 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每l〇〇〇mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷 酸氢二钠18g，过硼酸钠0. 2g，甘油25ml,酶底物30mg，20mL乙醇，所述单组份酶底物显色 试剂的PH值为5.0。
【权利要求】
1. 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，每lOOOmL的显色液包括以下组 分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0? 1-0. 5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg， 10-30mL乙醇，所述抗干扰单组份酶底物显色试剂的PH值为4. 0-6. 0。
2. 根据权利要求1所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述PH值 为 4. 5-5. 0。
3. 根据权利要求1或2所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述柠 檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
4. 根据权利要求1或2所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述酶 底物的质量设置为10_30mg。
5. -种如权利要求1或2所述的抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用，其特征在于，将 所述的单组份酶底物显色试剂应用到酶联免疫试剂盒。
【文档编号】G01N33/558GK104459114SQ201410685367
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】叶正义, 张志新, 何远立, 陶家春 申请人:成都威尔诺生物科技有限公司