一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡，包括塑料卡壳和封装于塑料卡壳内的试纸条，所述的塑料卡壳的中部设有加样孔，该加样孔的两侧分别设有相对称的第一观察窗、第二观察窗和透气孔，并且在加样孔的位置设有手持端，所述的试纸条的底层为PVC板构成的支撑层，附着在支撑层中央的为样品垫，该样品垫与塑料卡壳上加样孔的位置相对应，样品垫左侧依次设有紧密相连的金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，样品垫右侧依次设有紧密相连的金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。本实用新型操作简单，可同时对甲羟孕酮及其抗体残留进行批量定性检测。
【专利说明】一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫化学检测【技术领域】，具体涉及一种定性检测甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡。
【背景技术】
[0002]醋酸甲轻孕酮(Medroxyprogesterone acetate，MPA)，又称甲轻孕酮、甲孕酮、安宫黄体酮，是一种孕激素类药物，临床上主要用于长效避孕、流产、功能性闭经、子宫出血等的治疗和一些肿瘤的姑息治疗。在畜牧养殖业中，MPA和其他蛋白同化激素药物一样，作为生长促进剂用于动物的增肥和非发情期诱导发情、诱发超数排卵、同步发情等，以提高繁殖率和经济效益。但MPA具有广泛的毒副作用，可引起不规则性出血、闭经、精神抑郁、失眠、恶心、乳胀等不良反应，甚至导致不孕不育症，因此MPA作为饲料添加剂在动物体内不断累积严重威胁着人类健康。欧盟成员国早已严禁在食源性动物饲养管理中使用MPA，并规定其在食源性动物产品中残留最高限量(MRL)为“不得检出”。我国农业部2002年4月发布的第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中明确将醋酸甲羟孕酮及其制剂列为禁用药物。
[0003]目前，甲羟孕酮及其衍生物的残留检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS )，液相色谱-质谱联用(LC-MS )或多级联用技术，如LC-MS-MS等。理化检测方法，虽然灵敏度高，但需要昂贵的仪器设备、经验丰富的操作人员，以及复杂的提取净化过程，不利于在生产实践中推广应用。胶体金标记免疫分析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，且所有试剂包含在一根试纸条上，非常适合于现场检测，具有广阔的市场前景和应用价值。本课题得到国家自然科学基金(U1204310)和河南省高校科技创新人才计划(14HASTIT026)资金支持。
【发明内容】
[0004]本实用新型解决的技术问题是提供了一种操作简便、快速准确、灵敏度高、成本低廉且稳定性好，可进行批量检测的甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡。
[0005]本实用新型的技术方案是:一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡，其特征在于包括塑料卡壳和封装于塑料卡壳内的试纸条，所述的塑料卡壳的中部设有加样孔，该加样孔的两侧分别设有相对称的第一观察窗、第二观察窗和透气孔，并且在加样孔的位置设有手持端，所述的试纸条的底层为PVC板构成的支撑层，附着在支撑层中央的为样品垫，该样品垫与塑料卡壳上加样孔的位置相对应，样品垫左侧依次设有紧密相连的金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，样品垫右侧依次设有紧密相连的金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。
[0006]本实用新型所述的塑料卡壳上加样孔的形状为漏斗状椭圆形开口，塑料卡壳的两端开有透气孔，且透气孔为多个，呈扇形排列，并且透气孔、第一观察窗、第二观察窗和加样孔处于塑料卡壳的同一水平面上。
[0007]本实用新型所述的样品垫左侧的硝酸纤维素膜上喷涂有醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线，两者间距5mm，其中醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线位于靠近样品垫的一侧，且醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线与塑料卡壳上第一观察窗的位置相对应。本实用新型所述的样品垫左侧的金标抗体结合垫上灌注有胶体金标记的抗甲羟孕酮单克隆抗体。
[0008]本实用新型所述的样品垫右侧的硝酸纤维素膜上喷涂有抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线，两者间距5mm，其中抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线位于靠近样品垫的一侧，且抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线与塑料卡壳上第二观察窗的位置相对应。本实用新型所述的样品垫右侧的金标抗原结合垫上灌注有胶体金标记的醋酸甲羟孕酮载体蛋白。
[0009]本实用新型具有如下有益效果:
[0010](I)操作简单、方便快捷。使用快速检测试纸卡时无需其它任何仪器或试剂，只需将处理后的样品溶液用滴管滴入试纸卡加样孔内4-6滴，3-5 min即可观察结果。
[0011](2)能同时检测甲羟孕酮及其抗体残留，结果形象、直观。当第一观察窗硝酸纤维素膜上C线显示一条红色“ I ”印迹时，表示甲羟孕酮含量呈阳性，当C线和T线同时出现两条红色“ II ”印迹时，表示甲羟孕酮含量呈阴性；当第二观察窗硝酸纤维素膜上C线显示一条红色“ I ”印迹时，表示抗体含量呈阳性，当C线和T线同时出现两条红色“ II”印迹时，表示抗体含量呈阴性。结果形象直观，简单准确，不容易出现误判。
[0012](3)塑料卡壳上的透气孔使溶液“爬坡”顺畅，显色时间短。透气孔使塑料卡壳内非常狭窄的空间与外界保持空气流通，保证反应膜正常发挥毛吸作用，使检测物能够快速地定向移动至透气孔，避免了阻滞或者不完全泳动等现象，提高了显色效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是本实用新型的结构示意图，图2是本实用新型中试纸条的侧视图。
[0014]图面说明:1、塑料卡壳，2、第一观察窗，3、第二观察窗，4、加样孔，5、透气孔，6、手持端，7、支撑层，8、样品垫，9、金标抗体结合垫，10、金标抗原结合垫，11、硝酸纤维素膜，12、质控线C线，13、醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线，14、抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线，15、吸收垫。
【具体实施方式】
[0015]结合附图详细描述实施例。一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡，包括塑料卡壳I和封装于塑料卡壳I内的试纸条，所述的塑料卡壳I的中部设有加样孔4，该加样孔4的两侧分别设有相对称的第一观察窗2、第二观察窗3和透气孔5，并且在加样孔4的位置设有手持端6，所述的试纸条的底层为PVC板构成的支撑层7，附着在支撑层7中央的为样品垫8，该样品垫8与塑料卡壳I上加样孔4的位置相对应；样品垫8左侧依次设有紧密相连的金标抗体结合垫9、硝酸纤维素膜11和吸收垫15，其中硝酸纤维素膜11上喷涂有醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线13和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线12，两者间距5mm，且醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线13和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线12与塑料卡壳I上第一观察窗2的位置相对应，金标抗体结合垫9上灌注有胶体金标记的抗甲羟孕酮单克隆抗体；样品垫8右侧依次设有紧密相连的金标抗原结合垫10、硝酸纤维素膜11和吸收垫15，其中硝酸纤维素膜11上喷涂有抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线14和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线12，两者间距5mm，且抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线14和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线12与塑料卡壳I上第二观察窗3的位置相对应，金标抗原结合垫10上灌注有胶体金标记的醋酸甲羟孕酮载体蛋白。
[0016]本实用新型所述的塑料卡壳I上加样孔4的形状为漏斗状椭圆形开口，所述的塑料卡壳I的两端开有呈扇形排列的透气孔5，并且透气5孔、第一观察窗2、第二观察窗3和加样孔4处于塑料卡壳I的同一水平面上。
[0017]本实用新型所述的支撑层7是由聚氯乙烯树脂与稳定剂及辅料配合制成的PVC板。本实用新型所述的吸收垫15是由吸水能力极强的植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。本实用新型所述的样品垫8、金标抗体结合垫9和金标抗原结合垫10是由玻璃纤维棉制作而成的。本实用新型所述的样品垫8与金标抗体结合垫9和金标抗原结合垫10的叠压宽度分别为l_2mm，吸收垫15与硝酸纤维素膜11的叠压宽度为l_2mm。
[0018]本实用新型所述的试纸卡的制备方法:
[0019]I)硝酸纤维素膜的制备:将硝酸纤维素膜置于X-only单向喷点仪平台上，醋酸甲羟孕酮-OVA包被原或抗甲羟孕酮单克隆抗体放于A池，RaMIgG放于B池，展平压紧，开机后将抗原和二抗分别点射于硝酸纤维素膜上，形成检测线T线和质控线C线。室温自然干燥后，将其浸入封闭液(质量浓度为1%的BSA的PBS缓冲液，pH 7.4)中30min，37°C烘干后，加入干燥剂，4 0C密封保存。
[0020]2)结合垫的制备:将玻璃纤维棉裁成4mm宽的细条，放入含质量浓度为5%的BSA，质量浓度为2%的蔗糖，质量浓度为0.8%的NaCl和质量浓度为0.05%的似乂的PBS处理液中20min，37°C恒温烘干，然后将金标抗体或金标抗原灌注已处理好的玻璃纤维棉上，真空冻干4h，即为结合垫。
[0021]3)样品垫的制备:玻璃纤维棉要用含质量浓度为2%的BSA，质量浓度为1%的蔗糖，质量浓度为0.5%的硼酸钠和质量浓度为0.1%的似乂的PBS处理后，干燥备用，即为样品垫。
[0022]4)吸收垫的制备:将吸水能力极强的植物长纤维为原材料制作的纯白滤纸用切割机切成4 mm宽的细条，并用胶膜进行一侧封闭，干燥备用。
[0023]5)试纸条的制备:在支撑板(PVC板)上，将硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸收垫等按一定工艺组装在一起，用CM4000切割机制成4_宽的试纸条，放入带干燥剂的密闭容器中储存。
[0024]6)试纸卡的组装:按一定工艺将试纸条封装于带有加样孔、第一观察窗、第二观察窗和透气孔的特制的塑料卡壳中，即为本实用新型的试纸卡。
[0025]本实用新型所述的试纸卡的使用方法:
[0026]I)样品前处理:
[0027]取均质器或捣碎机匀浆后的动物组织样品5g，加20ml乙腈水溶液(85份乙腈+15份水)混勾，然后沸水浴加热5min ;混合液定容为原体积，3000r/min离心lOmin，取上清液lml，加入4ml正已烧去脂，旋转混合5min，3000r/min离心lOmin，取下层溶液用于试纸卡检测。
[0028]2)样品滴加:
[0029]将试纸卡平放后，用滴管将样品溶液滴入试纸卡加样孔内4-6滴，3-5min后即可观察结果。
[0030]3)检测结果分析:
[0031]阴性:若第一观察窗或第二观察窗硝酸纤维素膜上质控线C线和检测线T线同时出现两条红色“ II ”印迹时，判为阴性。
[0032]阳性:若第一观察窗或第二观察窗硝酸纤维素膜上质控线C线显示一条红色“ I ”印迹，而检测线T线不显色，判为阳性。
[0033]无效:若第一观察窗或第二观察窗硝酸纤维素膜上质控线C线不显示红色条带，则无论检测线T线是否出现红色印迹，该试纸卡均判为无效。
[0034]以上实施例仅为说明本实用新型的技术思想，不能以此限定本实用新型的保护范围，凡是按照本实用新型提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本实用新型保护范围之内。
【权利要求】
1.一种甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡，其特征在于包括塑料卡壳和封装于塑料卡壳内的试纸条，所述的塑料卡壳的中部设有加样孔，该加样孔的两侧分别设有相对称的第一观察窗、第二观察窗和透气孔，并且在加样孔的位置设有手持端，所述的试纸条的底层为PVC板构成的支撑层，附着在支撑层中央的为样品垫，该样品垫与塑料卡壳上加样孔的位置相对应，样品垫左侧依次设有紧密相连的金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其中硝酸纤维素膜上喷涂有醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线，两者间距5mm，醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线位于靠近样品垫的一侧，且醋酸甲羟孕酮-OVA包被原印制的检测线T线和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线与塑料卡壳上第一观察窗的位置相对应，金标抗体结合垫上灌注有胶体金标记的抗甲羟孕酮单克隆抗体，样品垫右侧依次设有紧密相连的金标抗原结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其中硝酸纤维素膜上喷涂有抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线及羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线，两者间距5mm，抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线位于靠近样品垫的一侧，且抗甲羟孕酮单克隆抗体印制的检测线T线和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线C线与塑料卡壳上第二观察窗的位置相对应，金标抗原结合垫上灌注有胶体金标记的醋酸甲羟孕酮载体蛋白。
2.根据权利要求1所述的甲羟孕酮及其抗体残留的免疫学检测试纸卡，其特征在于:所述的塑料卡壳的两端开有呈扇形排列的透气孔，并且透气孔、第一观察窗、第二观察窗和加样孔处于塑料卡壳的同一水平面上。
【文档编号】G01N33/74GK204241491SQ201420708887
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月24日 优先权日:2014年11月24日
【发明者】姜金庆, 王秋霞, 杨理, 王自良, 范国英, 齐永华 申请人:河南科技学院