本发明涉及农药残留量的测定
技术领域：
，更具体地涉及一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物残留量的方法。
背景技术：
：草铵膦(glufosinate-ammonium，简称GLU)是德国赫斯特公司(HearstCorporation)于上世纪80年代开发的新型灭生性除草剂，其有效成分为phosphinothricin(简称PPT)，化学名称为(RS)-2-氨基-(羟基甲基氧膦基)丁酸铵，分子式为C5H12NO4P，分子量181.1。原药为白色至浅黄色结晶粉末，密度1.4g/mL(20℃)，熔点215℃，沸点99.5℃，蒸气压<0.1mPa(25℃)，高度稳定，25℃可贮存2年；25℃时其在水中的溶解度为1370g/L，20℃时在几种常规有机溶剂中的溶解度分别为：丙酮0.016g/100mL，乙醇0.065g/100mL，乙酸乙酯0.014g/100mL，正己烷0.02g/100mL，甲苯0.014g/100mL。对光稳定，在pH5～9水解，在土壤中DT50<10d。目前已知草铵膦在植物中的主要代谢物有N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)草铵膦是目前用量仅次于草甘膦的世界第二大转基因作物耐受除草剂，属于磷酸类除草剂，是谷氨合成抑制剂，施药后短时间内植物体内铵代谢陷于紊乱，细胞毒剂铵离子在植物体内累积，与此同时，光合作用被严重抑制，达到除草目的。它具有内吸传导型、广谱非选择性、触杀型、灭杀性等特点。草铵膦主要用于防除一年生和多年生双子叶禾本科杂草，采用杂草茎叶定向喷雾处理，应用于茶叶、果园、葡萄园、柑橘园、咖啡园、蔬菜、马铃薯田、非耕地等。草铵膦属于非持久性农药，但其大量和任意的使用，仍有可能在农作物上残留，从而对人、畜构成威胁。根据1999年联合国粮农组织及世界卫生组织农药残留联合专家会议(JMPR)报告，草铵膦的主要代谢物有N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)，均为有毒代谢物，存在一定的风险。目前，各国(地区)和相关机构对食品中草铵膦(GLU)的限量标准不同：国际食品法典委员会(CAC)制定了草铵膦40项残留限量标准，限量范围在0.05～8mg/kg之间；美国草铵膦共33项残留限量标准，限量范围在0.05～6mg/kg之间；欧盟草铵膦共378项残留限量标准，限量范围在0.1～5mg/kg之间；日本草铵膦共169项残留限量标准，限量范围在0.05～6mg/kg之间；韩国草铵膦共26项残留限量标准，限量范围在0.05～0.5mg/kg之间；澳大利亚草铵膦共37项残留限量标准，限量范围在0.05～20mg/kg之间；新加坡草铵膦共30项残留限量标准，限量范围在0.1～0.5mg/kg之间；中国制定了草铵膦5项残留限量标准，番茄、柑橘、茶叶中草铵膦的最大残留限量为0.5mg/kg，香蕉、木瓜中草铵膦的最大残留量为0.2mg/kg。中国台湾有14项残留限量标准，限量范围在0.05～2mg/kg之间；中国香港有18项残留限量标准，限量范围在0.05～5mg/kg之间。其中中国台湾、中国香港、CAC、美国、欧盟标准中明确规定残余物定义为草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸之和，以草铵膦(游离酸)表示；韩国规定残余物定义为草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸之和，以草铵膦(游离酸)表示；中国、日本、澳大利亚、新加坡则没有指明限量是否包含代谢物。但目前各国并无具体的检测标准，在贸易中为达到限量规定要求，对产品检测是必不可少的。因此建立草铵膦及其代谢物的残留检测方法，对我国进出口贸易，食品安全等方面都有重要的意义。在目前公开的现有技术中，存在多种检测草铵膦及其代谢物的分析方法。江燕，曹赵云，贾瑞琳，齐慧，陈铭学，亲水作用色谱一串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量，《色谱》，2012,30(1)39-44，公开了一种亲水作用色谱-串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量。采用亲水作用色谱5串联质谱建立了同时测定稻米中草甘膦及其主要代谢物氨甲基磷酸残留量的检测方法。样品经水提取，C18固相萃取柱和超滤膜净化，以1mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调pH＝11.0)-乙腈为流动相，亲水作用色谱柱分离，采用电喷雾离子源、负离子扫描模式和多反应监测模式质谱检测，基质匹配标准溶液外标法定量。草甘膦和氨甲基磷酸分别在0.001～0.250mg/L和0.0025～0.250mg/L质量浓度范围内线性关系良好，检出限(信噪比为3)分别为0.010mg/kg和0.020mg/kg。通过对空白大米样品进行0.100、0.500和2.500mg/kg3个加标水平的回收试验，草甘膦和氨甲基磷酸的平均回收率和相对标准偏差分别为96.3％～107.3％和1.3％～9.1％(n＝3)。该方法同时检测草铵膦及其代谢物时，草铵膦及其代谢物的分离度很差。刘铮铮，李立，王静，潘荷芳，高效液相色谱-柱前衍生法测定水中有机磷除草剂,《中国环境监测》，2009,25(5)35-38，其公开了一种采用氯甲酸-9-芴基甲酯(FMOC)柱前衍生化后，再通过高效液相色谱荧光检测分析法测定水样品中痕量草甘膦、草铵膦和氨基甲磷酸的方法。该方法先在水样品中加入0.5mL0.05M的硼酸钠溶液，然后加入0.5mL1.0mg/mL的FMOC溶液，衍生2h后，加入5mL乙酸乙酯萃取制备样品，然后以Waters高效液相色谱柱(AtlantisC18柱5μm，4.6㎜×250㎜)，流动相为0.02M磷酸溶液-乙腈的混合液80:20(按体积比)，在柱温40℃和流速1.0mL/min的条件下，以荧光检测器检测样品。该方法需要事先对样品进行衍生化，操作繁琐，灵敏度较低。NaokiYoshioka,MigiwaAsano,AzumiKuse,TakaoMitsuhashi,YasushiNagasaki,YasuhiroUeno,Rapiddeterminationofglyphosate,glufosinate,bialaphos,andtheirmajormetabolitesinserumbyliquidchromatography–tandemmassspectrometryusinghydrophilicinteractionchromatography,JournalofChromatographyA,2011(1218)3675–3680.公开了一种用亲水作用色谱(HILIC色谱柱)—液相串联质谱法直接法快速测定了血清中的草甘膦、草铵膦、双丙氨膦和代谢物氨甲基膦酸、3-(甲基膦基)丙酸的方法。所述方法样品没有经过衍生化和固相萃取，草铵膦检测限是0.03μg/mL。然而，HILIC亲水色谱柱是一种可以保留和分离极性-离子化合物的色谱柱，只能在有机相较低的前提条件下解决极性-离子型化合物的保留，草铵膦、草甘膦等极性物质保留很弱，出峰时间早(<1min)，峰型差，峰拖尾现象明显。因此采用HILIC同时测定草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)存在一定困难。技术实现要素：发明概述本发明提供一种相对于现有技术简便快捷，灵敏度高，能够同时准确测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)的方法。本发明所述的方法是先对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化，然后采用亲水作用NH2色谱柱，用液相色谱-质谱/质谱法，电喷雾离子源(ESI)负离子模式电离，多反应监测(MRM)模式检测，基质外标法定量测定草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦(简称NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(简称MPP)。该方法能够满足国内外限量的检测要求，实用性强，能够准确测量进出口食品中残留的草铵膦及其主要代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸，对食品安全的质量控制具有实质意义。术语定义本发明所述的“外标法”是指2010版中国药典第二部附录ⅤD高效液相色谱方法(附录第31页)中所指的外标法。本发明所述的“阴性样品”是指不含有待测成分样品(如不含有草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的茶业、稻谷等食品样品)。本发明所述的“％”除另有说明外均指质量百分比。发明详述本发明提供一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方法，所述方法以亲水作用NH2色谱柱为分析柱，乙酸铵水溶液-乙腈为流动相按梯度程序洗脱待测样品溶液或基质混合标准校准溶液，用质谱/质谱检测器以多反应监测(MRM)模式检测，然后按照外标法计算食品中残留草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的含量，其中所述的梯度洗脱程序是梯度时间，min流动相％，体积比乙腈％，体积比02575225752.018020680206.0125753-->102575其中所述的待测样品溶液制备方法：对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得；其中所述的基质混合标准校准溶液的制备方法：称取阴性样品，加入草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，然后用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得。本发明提供的一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方法，采用基质添加混合标准校准曲线来准确定量，即在标准溶液溶液中加入样品基质，所述方法能够有效的克服才用质谱/质谱同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸时基质干扰的问题，通过配制基质混合标准校准溶液进行定量，能够准确地测定草铵膦及其代谢物。用水提取样品的待测物后，加入二氯甲烷溶液，涡旋振荡，高速离心取上清液，能够改善样品堵塞柱子的问题，有利于仪器的保养和检测的顺利进行。在一些实施例中，本发明所述方法流动相流速可以是0.1～0.5mL/min，在一些实施例中可以是0.25mL/min。在一些实施例中，本发明所述方法的亲水作用NH2色谱柱是NH2P-502D柱，150mm×2.0mm，5μm。所述色谱柱运行过程中的柱温可以是20℃～40℃，在一些实施例中可以是35℃。在一些实施例中，本发明所述方法的乙酸铵水溶液是采用乙酸铵溶解于水，然后用氨水调节pH值获得。乙酸铵水溶液的浓度可以是0.5～2mmol/L，其pH值可以是9～11。在一些实施例中，本发明所述方法的乙酸铵水溶液的浓度是1mmol/L，并用氨水调节pH值至11。在一些实施例中，本发明所述方法的质谱检测器的离子源是电喷雾离子源(ESI)，并采用负离子模式电离样品。在一些实施例中，本发明所述方法的质谱检测器采用电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描，采用多反应监测(MRM)检测，检测参数是：干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L/min；雾化气压力：45psi；电喷雾电压：-4500V；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：7L/min；喷嘴电压：-1000V。在一些实施例中，本发明提供的一种同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方法，采用高效液相色谱-质谱/质谱法，按梯度程序洗脱待测样品溶液或基质混合标准校准溶液，用质谱/质谱检测器以多反应监测(MRM)模式检测，然后按照外标法计算食品中残留草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的含量，其色谱检测条件是：色谱柱：NH2P-502D柱，150mm×2.0mm，5μm；缓冲液：用氨水调节pH为11的1mmol/L乙酸铵水溶液；有机相：乙腈；柱温：35℃；流速：0.25mL/min；进样体积：5μL；梯度程序梯度时间，min流动相％，体积比乙腈％，体积比02575225752.018020680206.012575102575质谱检测条件是采用电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描，采用多反应监测(MRM)检测，检测参数是：干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L/min；雾化气压力：45psi；电喷雾电压：-4500V；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：7L/min；喷嘴电压：-1000V；其中所述的待测样品溶液制备方法：对样品中的草铵膦及其代谢物用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得；其中所述的基质混合标准校准溶液的制备方法：称取阴性样品，加入草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，然后用水提取，再经二氯甲烷和C18固相萃取小柱净化获得。在一些实施例中，待测样品溶液的制备方法：称取均质好的试样茶叶1g或植物油、谷物或水果蔬菜5g，精确至0.01g，置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入10mL水，10mL二氯甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min速率离心5min，收集上清液；取提取液5mL加入已经活化了的C18固相萃取柱中，滤弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜获得。在一些实施例中，基质混合标准校准溶液的制备方法：称取均质好的阴性样品茶叶1g或植物油、谷物或水果蔬菜5g，精确至0.01g，分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入适量铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，制成草铵膦、N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸的基质标准溶液，然后加入10mL水，10mL二氯甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min速率离心5min，收集上清液；取提取液5mL加入已经活化了的C18固相萃取柱中，滤弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜获得。本发明所述的同时测定食品中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的方法，其中在质谱/质谱检测图谱中，草铵膦的定性离子对是180/95和/或180/85，定量离子对是180/95；N-乙酰基草铵膦的定性离子对是222/136和/或222/59，定量离子对是222/136；3-(甲基膦基)丙酸的定性离子对是151/133和/或151/107，定量离子对是151/133。附图说明图1示实施例1中标准品溶液的NAG、GLU和MPP标准品的总离子流图；图2示实施例2中标准品溶液的NAG、GLU和MPP标准品的总离子流图；图3示实施例3中标准品溶液的NAG、GLU和MPP标准品的选择离子流图谱；图4示实施例3中标准品溶液的GLU的二级碎片离子图；图5示实施例3中标准品溶液的NAG的二级碎片离子图；图6示实施例3中标准品溶液的MPP的二级碎片离子图；图7示实施例4中茶叶空白基质NAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图8示实施例4中茶叶空白基质加标0.1mg/kgNAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图9示实施例4中稻谷空白基质NAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图10示实施例4中稻谷空白基质加标0.05mg/kgNAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图11示实施例4中苹果空白基质NAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图12示实施例4中苹果空白基质加标0.05mg/kgNAG、GLU和MPP定量离子对MRM图；图13示实施例5中标准工作溶液中GLU浓度与其对应峰面积的工作曲线；图14示实施例5中标准工作溶液中NAG浓度与其对应峰面积的工作曲线；图15示实施例5中标准工作溶液中MPP浓度与其对应峰面积的工作曲线。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。除另有说明外，本发明所述的试剂均是分析纯的试剂。乙腈：色谱纯；无水乙酸铵：色谱纯；氨水：25％，色谱纯；二氯甲烷，色谱纯。草铵膦标准物质(Glufosinateammonium，GLU，CAS号：77182-82-2，分子式：C5H15N2O4P)：纯度≥97.5％。N-乙酰基草铵膦标准物质(N-Acetyl-glufosinate，NAG，CAS号：73634-73-8，分子式：C7H14NO5P)：纯度≥98.5％。3-(甲基膦基)丙酸标准物质(3-methylphosphinicopropionicacid，MPP，CAS号：15090-23-0，分子式：C4H9O4P)：纯度≥98.0％。实施例1对比实施例标准品溶液：精确称取50mg的草铵膦、N-乙酰基草铵膦(NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(MPP)标准品，用水溶解并定容至50mL，得到1.0mg/mL的标准储备溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。取一定量的草铵膦标准储备溶液，用水稀释成1.0μg/mL的标准溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。按照现有技术江燕，曹赵云，贾瑞琳，齐慧，陈铭学，亲水作用色谱一串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量，《色谱》，2012,30(1)39-44，一种亲水作用色谱-串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基磷酸残留量中公开的色谱检测条件，对标准品溶液进行检测，记录总离子流图。草铵膦、N-乙酰基草铵膦(NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(MPP)的总离子流图如图1所示，所有物质1.5～2.3min出峰，在色谱柱上保留较弱，检测实际样品时候受到的离子抑制效应很大，样品的回收率很低。实施例2标准品溶液：如实施例1所述的方法配制标准品溶液。根据本发明所述的方法对标准品溶液进行检测，记录草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦及其代谢物的总离子流图，如图2。分析检测条件如下：液相色谱-质谱检测条件：色谱柱：NH2P-502D柱，150mm×2.0mm，5μm；缓冲液：1mmol/L乙酸铵水溶液(pH＝11)：称取0.07708g的无水乙酸铵溶解于适量水中，用氨水调节pH＝11，用水定容至1000mL；有机相：乙腈；柱温：35℃；流速：0.25mL/min；进样体积：5μL；梯度程序梯度时间，min流动相％，体积比乙腈％，体积比02575225752.018020680206.012575102575质谱检测条件是采用电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描，采用多反应监测(MRM)检测，检测参数是：干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L/min；雾化气压力：45psi；电喷雾电压：-4500V；鞘流气温度：350℃；鞘流气流速：7L/min；喷嘴电压：-1000V。按照本发明所述的方法对标准品溶液检测，草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸总离子流图的峰型尖锐，响应值高，使得待测组分获得最佳的灵敏度。草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸在约6分钟出峰，与实际样品中的干扰物质分离，受到的离子抑制效应较小。实施例3系统适应性实验标准品溶液：如实施例1所述的方法配制标准品溶液。按实施例2中所示的分析检测条件对标准品溶液进行检测，以流动注射的方式分别对三种物质的标准溶液进行全扫描和子离子扫描，得到碎片离子信息(如图4～图6)，确定母离子、子离子，每种物质确定两个特征子离子，其中丰度较高的为定量离子，丰度较低的为定性离子，具体参数见表1。同时记录标准品溶液的NAG、GLU和MPP选择离子流图，如图3所示。表1草铵膦及代谢物的定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞气能量实施例4灵敏度实验任意地，分别选取了茶叶、稻谷、苹果3个阴性样品，分别作基体空白，并对进行加标实验，最后观察草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的定性、定量离子的MRM图。茶叶基体空白溶液：称取均质好的阴性样品茶叶1g，精确至0.01g，分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，然后加入10mL水，10mL二氯甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min速率离心5min，收集上清液；取提取液5mL加入已经活化了的C18固相萃取柱中，滤弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜获得。茶叶基体空白加标溶液：称取均质好的阴性样品茶叶1g，精确至0.01g，分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入适量铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的混合标准溶液，制成草铵膦、N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸含量均为0.1mg/kg的基体空白加标溶液，然后加入10mL水，10mL二氯甲烷，充分涡旋振荡10min，超声提取10min，以12000r/min速率离心5min，收集上清液；取提取液5mL加入已经活化了的C18固相萃取柱中，滤弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，过0.22μm水相滤膜获得。参照以上茶叶空白基体及其加标溶液制备方法，分别制备稻谷和和苹果(分别称取5g)制备相应的基体空白溶液和相应的基体空白加标溶液(草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸含量均为0.05mg/kg)。将待测样品溶液和基质混合标准校准溶液按实施例2中所示的分析检测条件进行检测，进样高效液相色谱-质谱/质谱系统，记录色谱图，如图7-12所示。从图中可以看出，定性离子对、定量离子对的MRM图中色谱峰均无杂质干扰，说明该方法的特异性较好。方法的检出限(LOD)定义为产生3倍信噪比(S/N＝3)的化合物的质量浓度，测定低限即定量限(LOQ)定义为产生10倍信噪比(S/N＝10)的化合物的质量浓度。按照信噪比S/N≥10计算，经过代表性的检测，本方法的草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸的测定低限茶叶样品为0.1mg/kg，果蔬和谷物为0.05mg/kg，在其他食品灵敏度检测结果中同样显示具有很高的灵敏度。该检测方法检测限能够达到各国(地区)规定的草铵膦的最低残留限度，各国(地区)规定的限度范围如
背景技术：
中描述，约0.05mg/kg～20mg/kg。实施例5线性实验标准工作溶液：精确称取50mg的草铵膦和N-乙酰基草铵膦(NAG)、3-(甲基膦基)丙酸(MPP)标准品，用水溶解并定容至50mL，得到1.0mg/mL的标准储备溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。取一定量的草铵膦标准储备溶液，用水稀释成1.0μg/mL的标准中间溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。分别移取不同体积的1.0μg/mL的标准中间溶液到10mL容量瓶中，用二次水定容，配制浓度为10、20、50、100、200、500、1000ng/mL的标准工作溶液。取一系列标准工作溶液(10、20、50、100、200、500、1000ng/mL)，按照实施例2所示的检测方法对标准工作溶液进行检测，记录各待测组分定量离子对的峰面积。以峰面积(Y轴)对相应的待测物的浓度(X轴)作图，结果表明，待测化合物浓度与对应的峰面积呈现良好的线性关系，如图13～15所示。基质混合标准校准溶液：参照实施例4中基质混合标准校准溶液的配制方法，分别对空白阴性样品茶叶、稻谷、柑橘、木瓜、香蕉、西红柿进行前处理，得到空白的基质提取液，以此提取液分别配制草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的曲线(茶叶0、10、20、50、100、200ng/mL，其他样品0、20、50、100、200、500ng/mL6个标准系列)，按实施例2的检测方法进行质谱测定。以定量离子的响应峰面积(Y轴)对相应的质量浓度(X轴，ng/mL)作图，得出线性方程，见表2。表2不同样品基质中草铵膦、N-乙酰基草铵膦、3-(甲基膦基)丙酸的线性关系结果表明，草铵膦、N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸在所配范围内，定量离子的响应峰面积和样品浓度之间有良好的线性关系。实施例6回收率试验标准品溶液：精确称取50mg的草铵膦、N-乙酰基草铵膦(NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(MPP)标准品，用水溶解并定容至50mL，得到1.0mg/mL的标准储备溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。取一定量的草铵膦标准储备溶液，用水稀释成1.0μg/mL的标准溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。低于5℃保存。基质混合标准校准溶液：参照实施例4中基质混合标准校准溶液的配制方法，分别对空白阴性样品茶叶、稻谷、玉米、大豆、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、胡萝卜、洋葱、马铃薯、番茄、开心果、菜籽油等进行前处理，得到空白的基质提取液，然后分别向各基质提取液加入标准品溶液，分别稀释配制成含草铵膦、N-乙酰基草铵膦(NAG)和3-(甲基膦基)丙酸(MPP)均为200ng/mL的各类样品基质混合标准校准溶液。加标溶液：以不含NAG、GLU和MPP残留的茶叶、稻谷、玉米、大豆、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、胡萝卜、洋葱、马铃薯、番茄、开心果、菜籽油为空白样品基质，添加三个浓度(加标水平见表2)水平配置加标溶液。加标溶液的配置方法参照实施例4中基质混合标准校准溶液配制方法进行配置。每个浓度水平进行六次重复实验。参照实施例2中的检测方法对加标溶液进行检测和基质混合标准校准溶液，记录各待测组分定量离子对的峰面积，按外标法计算各加标溶液的NAG、GLU和MPP的回收率，同时计算每个样品的精密度。结果见表3。表3回收率试验及精密度试验数据实验结果表明，本发明所提供的方法的在测定食品中残留的草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的平均回收率在68.7％～109％之间，每个样品连续测定6次结果的相对标准偏差(RSD)在1.42％～12％之间。综上实施例所述，根据实施例2-6的检测结果表明，本发明所述的分析方法在检测不同食品中的残留草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸时，灵敏度高，系统适应性良好，精密度重现性好，回收率高，能够有效检测食品中含量在0.05mg/kg～1mg/kg之间的草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵膦和3-(甲基膦基)丙酸的残留量。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。当前第1页1 2 3