一种酶标板的制作方法与工艺

本发明涉及生物科学研究领域或医疗诊断中免疫检测用的反应酶领域，特别是涉及一种酶标板。

背景技术：
免疫检测是生命科学领域最常见的检测目标分子的方法，酶联免疫吸附试验(ELISA)是免疫检测的重要组成部分。ELISA主要分为两种反应：一种是抗原与抗体之间的免疫反应，另一种是生物分子与所吸附的固相表面。在酶联免疫吸附试验(ELISA)中，参与免疫学反应的抗原、抗体、标记抗体或抗原的纯度、浓度和比例；缓冲液种类、浓度和离子强度、pH值和反应温度、时间等条件起着关键作用。此外，作为载体的酶标板表面对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附也起着非常重要的作用。现有技术中，ELISA酶标板最常用的材质是聚苯乙烯。近年来，为了增加生物分子与固相表面的亲和力、提高反应的灵敏度，增强检测的稳定性等，酶标板固相材料的选择和处理引起了本领域研究人员的极大关注。目前，本领域研究人员多致力于研究通过共价交联化学基团活化官能基、化学反应修饰聚苯乙烯表面以及紫外辐照等方法改变聚苯乙烯表面的化学性质，进而提高酶标板孔表面对生物分子的亲和力，且已经取得了长足的进步。然而，聚苯乙烯酶标板仍存在另一问题即酶标板孔与生物分子反应的表面积问题。现有技术中的酶标板多数为平底(结构如说明书附图1)、U型底或V型底，平底的折射率低，适于酶标仪检测，U型底的酶标板折射率较高，方便加样、吸样、混匀等操作，V底的酶标板可以精确的吸取样品。但是上述的几种酶标板的酶标板孔与生物分子反应的表面积较小，不利于反应的充分快速进行。

技术实现要素：
本发明的目的是提供一种酶标板，以解决上述生物分子所吸附的固相表面积的问题，使反应面积增大。为实现上述目的，本发明提供了如下方案：本申请提供一种酶标板，可以包括：反应槽和至少一个微孔；所述微孔包括微孔外壁和凸起物，所述微孔外壁置于所述反应槽的底板上，所述凸起物置于所述微孔内，与所述底板相连，所述凸起物为与所述微孔同心锥形筒状凸起，或所述凸起物由多个呈锥形筒状分布的凸起块构成，所述多个凸起块形成的锥形筒与所述微孔同心。可选的，所述凸起物由每圈三个呈锥形筒状分布的凸起块构成，高度为0.2～5.0mm，壁厚为0.1～1.0mm，所述三个凸起块间具有三个孔隙，每个宽度为0.1～2.0mm。可选的，所述微孔内布置有3～5圈由三个所述凸起物形成的锥形筒同心圆结构，所述三个凸起物形成的同心锥形筒的直径不同，分别为0.2～2.0mm、0.6～4.0mm、1～6.0mm、1.5～8.0mm、2.0～10mm。所述三个凸起物中任意两个凸起物间均有孔隙，每个宽度为0.1～2.0mm。可选的，所述微孔外壁高于所述凸起物。可选的，所述微孔外壁分为上下两部分，上部分为圆筒部，半径为0.1～5.0mm，壁厚为0.1～1.0mm，高度为0.1～20mm；下部分为上宽下窄的漏斗部，所述漏斗部的上开口的半径与所述圆筒部的半径相同，为0.1～5.0mm，下口半径为0.1～4.0mm，壁厚为0.1～1.0mm。漏斗部的高度为0.2～6.0mm。所述漏斗部的下开口与所述反应槽底板相连接。可选的，所述微孔呈矩阵阵列均匀排布于所述反应槽底板上，为1～500个。可选的，所述微孔的各外侧壁和所述反应槽底板的垂直投影与相邻微孔均不相交。可选的，所述反应槽包括底板和侧壁，所述反应槽底板四边相对所述侧壁向外延伸一部分。可选的，所述凸起物由透明或半透明材料制成。可选的，所述的酶标板，其特征在于，酶标板的面积为10～200×5～200mm2酶标板，每个酶标板上包括1～500个酶标板微孔。本发明设置凸起物的目的在于增大微孔的表面积，增加目标物质与固相表面的靶分子接触的机会，同时可以用较少的样本，检测高浓度目标物质的含量。本发明所述的孔隙设置于锥形凸起物的壁上，所述的孔隙贯穿整个凸起物的纵切面。因此，本发明设置的孔隙可以使液体在微孔内部自由流动，使目标物质与靶分子充分反应。本发明所述的微孔下部的漏斗部，漏斗部为微孔底部和上部的缓冲装置。本发明所述的凸出壁为有一定高度和厚度的空心筒状结构，凸出壁可以防止微孔之间的相互干扰。根据本发明提供的具体实施例，本发明公开了以下技术效果：本发明保护的一种底部为带孔隙同心圆台结构的酶标板，增加了反应的表面积，同时减少微孔之间的相互干扰。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；图1是传统酶标板的立体图；图2是本发明的微孔结构的俯视图(图2A)和主视图(图2B)；图3是本发明的微孔结构的立体图；图4A-1是本发明的4×5矩形阵列排列的20孔酶标板的俯视图；图4A-2是本发明的4×5矩形阵列排列的20孔酶标板的侧视图；图4B-1是本发明的4×7矩形阵列排列的28孔酶标板的俯视图；图4B-2是本发明的4×7矩形阵列排列的28孔酶标板的侧视图；图5是本发明的4×5矩形阵列排列的20孔酶标板或4×7矩形阵列排列的28孔酶标板的a-a剖视图；图6A和图6B分别是本发明的4×5矩形阵列排列的20孔酶标板和4×7矩形阵列排列的28孔酶标板的立体图；1-微孔；2-微孔外壁；3-凸起物；4-圆筒部；5-漏斗部；6-凸起块；7-孔隙；8-反应槽底板；9-反应槽侧壁。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明的目的是提供一种酶标板，以解决上述现有技术存在的问题，使反应面积增大。为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。本申请提供一种酶标板，可以包括如图3所示的结构：反应槽和至少一个微孔1；所述微孔1包括微孔外壁2和凸起物3，所述微孔外壁2置于所述反应槽的底板上，所述凸起物3置于所述微孔内，与所述底板相连，所述凸起物3为与所述微孔同心锥形筒状凸起，或所述凸起物由多个呈锥形筒状分布的凸起块6构成，所述多个凸起块6形成的锥形筒与所述微孔同心。可选的，所述凸起物3由三个呈锥形筒状分布的凸起块6构成，所述三个凸起块6间具有三个孔隙7。可选的，所述微孔1内布置有3～5圈由三个所述凸起物形成的锥形筒同心圆结构组成，所述三个凸起物形成的锥形筒同心且形成的锥形筒的直径不同，分别为0.2～2.0mm、0.6～4.0mm、1～6.0mm、1.5～8.0mm、2.0～10mm，高度为0.2～5.0mm，壁厚为0.1～1.0mm。所述三个凸起物中任一凸起物3的孔隙7均与相邻凸起物3的凸起块6的中部相对。可选的，所述微孔外壁高于所述凸起物。可选的，所述微孔外壁分为上下两部分，上部分为圆筒部4，半径为0.1～5.0mm，壁厚为0.1～1.0mm，高度为0.1～20mm；下部分为上宽下窄的漏斗部5，所述漏斗部的上开口的半径与所述圆筒部的半径相同，为0.1～5.0mm，下口半径为0.1～4.0mm，壁厚为0.1～1.0mm。漏斗部的高度为0.2～6.0mm。所述漏斗部的下开口与所述反应槽底板8相连接。可选的，所述微孔1呈矩阵阵列均匀排布于所述反应槽底板8上。可选的，所述微孔1的各外侧壁和所述反应槽底板8的垂直投影与相邻微孔均不相交。可选的，所述凸起物由透明或半透明材料制成。可选的，所述的酶标板，其特征在于，酶标板的面积为10～200×5～200mm2酶标板，每个酶标板上包括1～500个酶标板微孔。下面结合实施例对本发明提供的酶标板进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1如图2和图3所示，本实施例提供了一种由微孔内部的带孔隙的凸起物、微孔下部的漏斗部和微孔上部的凸出壁三个部分组成的微孔结构，这种微孔结构是一种可以增加反应表面积的微孔结构。实施例2如图2所示，每个锥形筒状凸起物的外壁上设置有均匀分布的三个内壁弧长L1＝0.5mm的孔隙，孔隙贯穿锥形筒状凸起物的整个纵切面。孔隙可以允许液体在微孔内部自由流动。实施例3如图5、图6所示，本实例提供了4×5矩形阵列排列的20孔酶标板和4×7矩形阵列排列的28孔酶标板，除微孔的矩阵排列不同外，20孔酶标板和28孔酶标板的微孔结构完全相同。实施例4如图5所示，提供了4×5矩形阵列排列的20孔酶标板和4×7矩形阵列排列的28孔酶标板微孔底部的锥形筒状凸起物的直径分别设置为φ1＝4.0mm、φ2＝3.0mm、φ3＝2.0mm和φ4＝1.0mm，最外侧锥形筒状凸起物厚度设置为δ1＝0.2mm、其他锥形筒状凸起物的厚度均设置为δ2＝0.15mm，锥形筒状凸起物的高度均设置为h1＝0.8mm，锥形筒状凸起物与酶标板板底的角度设置为α＝67.38°。微孔下部的漏斗部为空心的圆台状结构，漏斗部的高度为锥形筒状凸起物高度的二分之一，即h2＝0.4mm。微孔上部的凸出壁为筒状结构，凸出壁的高度设置为微孔底部高度的四分之五，即h3＝1.0mm。实施例4的微孔结构表面积计算公式：传统平底微孔的表面积实施例4微孔内侧壁的表面积和实施例4锥形筒状凸起物侧壁的孔隙的所减少的表面积实施例4微孔外侧壁垂直于酶标板板底投影的表面积和实施例4微孔总的表面积实施例4微孔总的表面积S总与传统微孔表面积S平底微孔的比值为实施例4所述微孔的容积计算公式：最外侧微孔的容积其他锥形筒状凸起物的体积孔隙的容积微孔的容积实施例5如图4A-1和图4B-1所示，本发明保护的酶标版，对所述阵列分布于反应槽底板上的微孔依次进行数字编号，其中中间一列微孔标号分别为“-”、“+”,“++”和“+++”。对微孔进行编号，方便酶反应的观察、记录，能够清楚的比较分析不同编号微孔中酶反应的差异。本发明设置锥形凸起物的目的在于增大微孔的表面积，增加目标物质与固相表面的靶分子接触的机会，同时可以用较少的样本，检测高浓度目标物质的含量。本发明所述的孔隙设置于锥形凸起物的壁上，所述的孔隙贯穿整个同心圆台的纵切面。因此，本发明设置的孔隙可以使液体在微孔内部自由流动，使目标物质与靶分子充分反应。本发明所述的微孔下部的漏斗部，漏斗部为微孔底部和上部的缓冲装置。本发明所述的凸出壁为有一定高度和厚度的空心筒状结构，凸出壁可以防止微孔之间的相互干扰。根据本发明提供的具体实施例，本发明公开了以下技术效果：本发明保护的一种底部为带孔隙同心圆台结构的酶标板，增加了反应的表面积,同时减少微孔之间的相互干扰。本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的系统而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。