一种高效快速的红细胞沉降剂及其制备方法，该发明涉及临床检验和医学研究等大量使用人全血标本的领域。
背景技术：
：现如今随着手术输血、特殊疾病治疗、临床检测及科研工作等的不断开展，血液标本是迫切需要的，但一般使用仅限于去出红细胞的血清或血浆，原因之一是红细胞在诸多临床诊断检测的过程中会产生一定的干扰，其次是在某些层析检测装置中，尤其是免疫检测，红细胞极有可能是造成液体流动障碍的主要因素，因为液体流动对于检测中发生的反应很关键，故在多数情况下使用血液标本均需要将红细胞红细胞从全血标本中分离出来以备进行下一步的检测、化验、输血或者科研工作等。因此，研发一种可高效快速分离血液标本中红细胞的沉降剂或分离液或其他分离装置对临床和科研具有重要意义。目前，用于分离血液样本中红细胞的方法也很多，但其中一部分往往都是采用离心手段，如美国专利6673629、4678757、6818180及公开专利申请2004/0202783、2006/0029923等多采用物理或化学方法分离全血中的红细胞，容易产生凝血样本，且分离不完全，特别是在层析免疫检测中常常会导致一些非特异性结合或强背景干扰现象，且技术手段复杂，较为昂贵，不适于临床诊断检测或大量的科研活动。此外还有一些分离材料不能有效获得高质量、存活率高且不含红细胞的血液样本，往往对检测或临床诊断造成了很大影响。而本发明研发出一种既能快速分离红细胞，又能保证分离彻底，使得白细胞和血小板活性较高，且方便经济实用的沉降剂，加快了临床诊断检测、手术输血及科研工作等应用的步伐。技术实现要素：本发明提供了一种高效快速的红细胞沉降剂及其制备方法，该沉降剂为从全血标本中分离红细胞的优选产品，其主要成分为羧甲基淀粉钠和氯化钠。淀粉原料本身含有大量的直链和支链结构，具有较好的吸附性能，改性后的羧甲基淀粉可起到凝集红细胞的作用。氯化钠在其中以生理盐水的形式存在，能够稳定血浆中的内环境，保证血浆中其他成分的生理活性。将改性淀粉与氯化钠结合制备成红细胞沉降剂，充分达到了更加快速安全分离红细胞的效果。一种高效快速的红细胞沉降剂及其制备方法：1.制备改性淀粉：首先加入干燥过的适量马铃薯淀粉，利用Feton试剂（Fecl2·4H2O和30％H2O2浓度比为1：400～500）创设氧化还原反应条件，再加入与以上淀粉质量比为1:0.5～1.5的顺丁烯二酸，在30～45℃下搅拌反应，反应时间为5～10h，加入无水乙醇至沉淀全部析出，再洗涤至PH试纸不变色，过滤，烘干制备得到高取代度的改性淀粉；2.制备红细胞沉降剂：取一定量的改性淀粉加入0.5～1.0mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成5～9％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在25～40℃下搅拌30～60min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。本发明主要是将淀粉改性后形成羧甲基淀粉钠盐，并与氯化钠共混形成羧甲基淀粉纳/氯化钠复合溶液，由于淀粉的结构使得其具有一定的吸附性能，提高了血浆中红细胞的浓度，加之制备成羧甲基淀粉后会促进红细胞相互电吸引，利于红细胞聚集并形成层叠的辊筒形状凝块，由此加速了红细胞的沉降，效果极其显著，安全性高，能够更加方便快捷地应用于全血分离红细胞。此外，该沉降剂制备的原料成本低廉，工艺路线简单，经济环保，易于规模化生产。具体体实施方式现结合实施例，对本发明作详细阐述，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述说明限定本发明的保护范围。实施例1：改性淀粉的制备：1.称取3g经干燥过的马铃薯淀粉溶于20mL蒸馏水中，搅拌均匀后倒入100mL三颈瓶中，水浴恒温30℃，搅拌器搅拌，再分别加入2.5g顺丁烯二酸和58.7mg四水氯化亚铁，然后滴加14mL30％双氧水；2.充分搅拌反应5h后，将三颈瓶放冷至室温，其中混合物倒入250mL烧杯中用无水乙醇使白色沉淀完全析出且洗涤至上层清液pH试纸不变色；3.静置过滤沉淀，干燥得到粉末；红细胞沉降剂的制备：取5g改性淀粉加入0.5mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成5％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在25℃下搅拌30min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。实施例2：改性淀粉的制备：1.称取6g经干燥过的马铃薯淀粉溶于40mL蒸馏水中，搅拌均匀后倒入100mL三颈瓶中，水浴恒温30℃，搅拌器搅拌，再分别加入5g顺丁烯二酸和28mg四水氯化亚铁，然后滴加8mL30％双氧水；2.充分搅拌反应6.5h后，将三颈瓶放冷至室温，其中混合物倒入250mL烧杯中用无水乙醇洗涤至白色沉淀完全析出且上层清液pH试纸不变色；3.静置过滤沉淀，干燥得到粉末；红细胞沉降剂的制备：取6g改性淀粉加入0.6mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成6％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在25℃下搅拌40min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。实施例3：改性淀粉的制备：1.称取7g经干燥过的马铃薯淀粉溶于50mL蒸馏水中，搅拌均匀后倒入100mL三颈瓶中，水浴恒温35℃，搅拌器搅拌，再分别加入5g顺丁烯二酸和30mg四水氯化亚铁，然后滴加5mL30％双氧水；2.充分搅拌反应8h后，将三颈瓶放冷至室温，其中混合物倒入250mL烧杯中用95％乙醇洗涤至白色沉淀完全析出且上层清液pH试纸不变色；3.静置过滤沉淀，干燥得到粉末；红细胞沉降剂的制备：取7g改性淀粉加入0.75mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成7％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在30℃下搅拌40min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。实施例4：改性淀粉的制备：1.称取5g经干燥过的马铃薯淀粉溶于35mL蒸馏水中，搅拌均匀后倒入100mL三颈瓶中，水浴恒温40℃，搅拌器搅拌，再分别加入5g顺丁烯二酸和24mg四水氯化亚铁，然后滴加7mL30％双氧水；2.充分搅拌反应8.5h后，将三颈瓶放冷至室温，其中混合物倒入250mL烧杯中用无水乙醇洗涤至白色沉淀完全析出且上层清液pH试纸不变色；3.静置过滤沉淀，干燥得到粉末；红细胞沉降剂的制备：取8g改性淀粉加入0.85mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成8％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在35℃下搅拌50min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。实施例5：改性淀粉的制备：1.称取5.5g经干燥过的马铃薯淀粉溶于40mL蒸馏水中，搅拌均匀后倒入100mL三颈瓶中，水浴恒温45℃，搅拌器搅拌，再分别加入5g顺丁烯二酸和35mg四水氯化亚铁，然后滴加10mL30％双氧水；2.充分搅拌反应10h后，将三颈瓶放冷至室温，其中混合物倒入250mL烧杯中用95％乙醇洗涤至白色沉淀完全析出且上层清液pH试纸不变色；3.静置过滤沉淀，干燥得到粉末；红细胞沉降剂的制备：取9g改性淀粉加入1.0mol/L的碱液中，充分溶解，再添加适量的氯化钠制成9％的改性淀粉+0.9％氯化钠的溶液，在40℃下搅拌60min，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉纳/氯化钠红细胞沉降剂。实施例6：红细胞沉降剂从全血中分离红细胞效果验证实验实验前先在红细胞沉降剂中加入灭菌后的0.5％乙二胺四乙酸二钠，并将全血与红细胞沉降剂分别按照1:1.0、1:1.5、1:2.0、1:2.5的体积比加入到试管中，充分混匀后垂直置于试管架上，自然沉降后分别吸取上层细胞悬液，进行白细胞及血小板计数，并按下式计算分离效果，结果见下表1；；表1不同配比下的红细胞沉降剂的分离效果红细胞沉降剂：血液次数（n）白细胞分离率（％）血小板分离率（％）1:1.08102.5104.31:1.5891.293.51:2.0873.470.11:2.5855.351.7由表1可见，红细胞沉降剂与血液配比为1:1.0时，白细胞的分离率达102.5％，血小板的分离率为104.3％，说明分离效果较好，该沉降剂对全血中红细胞的分离性能较佳。对比以上实施例，发现不同配比和不同的反应条件在制备改性淀粉和沉降剂的过程中产率、质量及产物特征等有所不同，因此在具体实施过程中应选择合适的配比和条件。上述实施例均为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，任何其他的未背离本发明的实质性操作或工艺方法与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化等，均应为本发明的等效置换，都包含在本发明的保护范围之内。本发明高效快速红细胞沉降剂，制备方法简便易行，分离效果佳，原料广泛易得，经济安全，具有极高的临床及科研应用价值。当前第1页1 2 3