苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法和应用与流程
本发明涉及苄基烟酸嗡盐的分析方法技术领域，具体而言，涉及一种苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法和应用。
背景技术：
苄基烟酸嗡盐(benzylpyridinium3-carboxylate，bpc-48)主要应用于电镀镀锌，作为镀锌中间体，属于镀锌添加剂中的主要添加成份，能起到使镀层结晶细化，有效提高电流密度的作用。在整个酸锌光亮剂市场上，此产品需求量很大，应用效果优良。
bpc-48的生产是由氯化苄、烟酸和氢氧化钠反应得到的，在反应过程中会有未反应完的烟酸、原料氯化苄水解物苄醇以及氯化苄副产物存在。尽管未反应完的烟酸在电镀过程中不影响使用，但烟酸易在体系内析出，影响客户观感，所以有必要对其进行限量。苄醇及二苄醚在电镀中所起作用不明，但从产品纯度考虑，也应在生产能力许可范围内尽量控制。因此高效快速地检测出杂质和主产物是相当有必要的。
而现有技术中对bpc-48的含量检测方法鲜有文章报道，也没有相关标准发布。若只是采用简单的滴定方法，检测结果的偏差会很大，而采用简单的紫外分光光度计法虽然能检测其含量，但无法分离出杂质，对杂质无法进行分析，无法对中控产品的杂质情况进行检测。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的目的之一在于提供一种用高效液相色谱法分析苄基烟酸嗡盐的方法，是一种简单、精准、易于推广的方法，精密度好、准确度高。
本发明的目的之二在于提供一种所述的苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法在苄基烟酸嗡盐生产过程中控监测和产品质量检测中的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：
(a)提供苄基烟酸嗡盐对照品溶液和供试样品溶液；
(b)用hplc-uv按外标法对步骤(a)供试样品溶液中的苄基烟酸嗡盐含量进行分析，高效液相色谱的检测条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以有机相和醋酸-氨水缓冲液组成，有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为0：100～80：20；有机相为甲醇或乙腈；
紫外检测器的检测波长：190～330nm。
优选地，在本发明技术方案的基础上，所述流动相中有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为10：90～40：60。
优选地，在本发明技术方案的基础上，所述紫外检测器的检测波长为220～300nm。
进一步，在本发明技术方案的基础上，步骤(b)中高效液相色谱的检测条件还包括：
流速：0.3～1.2ml/min；
柱温：10～60℃；
进样量20μl。
优选地，在本发明技术方案的基础上，所述流速为0.8～1.1ml/min；所述柱温为20～45℃。
优选地，在本发明技术方案的基础上，所述醋酸-氨水缓冲液为醋酸铵溶液，醋酸铵溶液的浓度为0.013mol/l。
进一步，在本发明技术方案的基础上，所述苄基烟酸嗡盐对照品溶液采用含量≥48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品进行配制，具体包括将苄基烟酸嗡盐标准品用流动相溶解，配制成浓度为10.0mg/ml的对照品溶液。
进一步，在本发明技术方案的基础上，所述供试样品溶液的配制具体包括将苄基烟酸嗡盐供试样品用流动相溶解，配制成浓度为1.0mg/ml的供试样品溶液。
优选地，在本发明技术方案的基础上，苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：
(a)提供缓冲液及流动相：将醋酸铵溶于水中，制成浓度为0.013mol/l的溶液，过滤，制成缓冲液待用；取过滤后的有机相与缓冲液按10：90～40：60的体积比混合，脱气后制成流动相待用；
(b)提供苄基烟酸嗡盐对照品溶液和供试样品溶液：将含量为48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品用流动相溶解，制成浓度为10.0mg/ml的溶液，过滤，制成对照品溶液待用；将苄基烟酸嗡盐供试样品用流动相溶解，制成浓度为1.0mg/ml的溶液，过滤，制成供试样品溶液待用；
(c)按照下列高效液相色谱条件进行测定：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：步骤(a)中的流动相；
紫外检测器的检测波长：220～300nm；
流速：0.8～1.1ml/min；
柱温：20～45℃；
进样量20μl；
(d)按外标法，计算供试样品溶液中苄基烟酸嗡盐的含量。
一种上述任一项所述的苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法在苄基烟酸嗡盐生产过程中控监测和产品质量检测中的应用。
和现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明利用高效液相色谱，配合紫外检测器，以标准曲线法对苄基烟酸嗡盐含量进行分析，缓解了现有技术对苄基烟酸嗡盐含量的测定方法不完善的技术问题，较酸碱滴定法测定结果准确，缓解了紫外分光光度计法虽然能检测其含量，但无法分离出杂质的问题。采用本发明方法不仅能够准确检测苄基烟酸嗡盐的含量，结果精密度好，精密度小于2.7％，准确度高，灵敏度高，并且能够有效分离出杂质峰，实现对苄基烟酸嗡盐生产过程的产品质量控制。此外，本发明方法中样品及流动相配制、整个操作过程简单易行，方法科学、可靠、可控，适于实际应用和推广。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例一苄基烟酸嗡盐对照品的高效液相色谱图；
图2为实施例一苄基烟酸嗡盐对照线性图；
图3为实施例二苄基烟酸嗡盐对照品的高效液相色谱图；
图4为实施例二苄基烟酸嗡盐对照线性图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
根据本发明的一个方面，提供了一种苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：
(a)提供苄基烟酸嗡盐对照品溶液和供试样品溶液；
(b)用hplc-uv按外标法对步骤(a)供试样品溶液中的苄基烟酸嗡盐含量进行分析，高效液相色谱的检测条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以有机相和醋酸-氨水缓冲液组成，有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为0：100～80：20；有机相为甲醇或乙腈；
紫外检测器的检测波长：190～330nm。
苄基烟酸嗡盐(bpc-48)也称1-苄基吡啶-3-羧酸盐，是一种镀锌中间体。
本发明中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，如c18色谱柱、ods色谱柱，优选地，色谱柱采用kromasilc18,5μ,250mm×4.6mm或
本发明中，流动相由有机相和醋酸-氨水缓冲液组成，其中，有机相为甲醇或乙腈；醋酸-氨水缓冲液为醋酸-氨水缓冲体系，ph范围为3～10，例如为3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10等；有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比典型但非限制性的例如为0：100、10：90、20：80、30：70、40：60、50：50、60：40、70：30或80：20。
优选地，流动相中有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为0：100～50：50。
进一步优选地，流动相中有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为10：90～50：50。
本发明中，紫外检测器的检测波长典型但非限制性的例如为190nm、200nm、210nm、220nm、230nm、240nm、250nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、310nm、320nm、或330nm。
现有技术对苄基烟酸嗡盐的检测有滴定法和紫外分光光度法，采用滴定法检测结果准确度低，偏差较大，而紫外分光光度法虽然能检测其含量，但无法对杂质进行分离和分析，不方便对苄基烟酸嗡盐生产过程的产品质量进行控制。
本发明采用的hplc-uv分析法，可分析苄基烟酸嗡盐含量，测定结果较简单的酸碱滴定和紫外检测方法更准确。本方法具有精密度好、准确度高等优点，只要操作人员学会溶(注)样品即可以准确分析，可用于苄基烟酸嗡盐的生产过程检测和产品质量控制。
在一种优选的实施方式中，流动相中有机相和醋酸-氨水缓冲液的体积比为10：90～40：60，例如10：90、20：80、30：70或40：60。
在一种优选的实施方式中，紫外检测器的检测波长为220～300nm。
通过进一步优化流动相配比和检测波长，对色谱条件进行优化，实现更好的分离效果，实现分离度的优化和峰型的最佳化。
作为一种优选的实施方式，步骤(b)中高效液相色谱的检测条件还包括：流速：0.3～1.2ml/min；柱温：10～60℃；进样量20μl。
流速典型但非限制性的例如为0.4ml/min、0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min或1.2ml/min。
柱温典型但非限制性的例如为10℃、20℃、30℃、40℃、50℃或60℃。
高效液相色谱操作的进样体积采用20μl定量进样环，满环进样，进样体积80μl。
流速决定了样品的出峰时间，柱温对柱效和产品分离也有一定影响，通过对流速和柱温的设定，以获得良好的分离效果。
在一种优选的实施方式中，流速为0.8～1.1ml/min；柱温为20～45℃。
通过进一步优化流速和柱温，以获得较佳的出峰时间和分离效果。
作为一种优选的实施方式，醋酸-氨水缓冲液为醋酸铵溶液，醋酸铵溶液的浓度为0.013mol/l。
醋酸-氨水缓冲体系直接用醋酸铵配制而成，操作更加简单，醋酸铵的ph值接近7。
作为一种优选的实施方式，苄基烟酸嗡盐对照品溶液采用含量≥48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品进行配制，具体包括将苄基烟酸嗡盐标准品用流动相溶解，配制成浓度为10.0mg/ml的对照品溶液。
其中，含量为质量百分含量。
采用含量≥48.4％的已知含量的苄基烟酸嗡盐标准品作为对照品，将对照品制成10.0mg/ml的对照品溶液，进一步用流动相稀释为浓度在0.01mg/ml～5.0mg/ml之间不同浓度梯度的标准溶液，通过上述色谱条件测定后得到标准曲线，在此浓度范围内直线的相关系数可达到0.9999。
作为一种优选的实施方式，供试样品溶液的配制具体包括将苄基烟酸嗡盐供试样品用流动相溶解，配制成浓度为1.0mg/ml的供试样品溶液。
校准曲线的线性范围为0.01mg/ml～5.0mg/ml，将苄基烟酸嗡盐供试样品用流动相稀释后通过外标法可计算出供试样品溶液中苄基烟酸嗡盐的含量，进而得到苄基烟酸嗡盐供试样品的质量分数。
在一种优选的实施方式中，作为一种典型的苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：
(a)提供缓冲液及流动相：将醋酸铵溶于水中，制成浓度为0.013mol/l的溶液，过滤，制成缓冲液待用；取过滤后的有机相与缓冲液按10：90～40：60的体积比混合，脱气后制成流动相待用；
(b)提供苄基烟酸嗡盐对照品溶液和供试样品溶液：将含量为48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品用流动相溶解，制成浓度为10.0mg/ml的溶液，过滤，制成对照品溶液待用；将苄基烟酸嗡盐供试样品用流动相溶解，制成浓度为1.0mg/ml的溶液，过滤，制成供试样品溶液待用；
(c)按照下列高效液相色谱条件进行测定：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：步骤(a)中的流动相；
紫外检测器的检测波长：220～300nm；
流速：0.8～1.1ml/min；
柱温：20～45℃；
进样量20μl；
(d)按外标法，计算供试样品溶液中苄基烟酸嗡盐的含量。
优选地，在步骤(a)中，缓冲液的配制方法为：将1g醋酸铵溶于1000ml水中，过滤，制成缓冲液。
优选地，在步骤(b)中，苄基烟酸嗡盐对照品溶液的配制方法为：将500mg含量为48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品溶于50ml流动相中，过滤，制成对照品溶液。
优选地，在步骤(b)中，苄基烟酸嗡盐供试样品溶液的配制方法为：将50mg的苄基烟酸嗡盐供试样品溶于50ml流动相中，过滤，制成供试样品溶液。
流动相在使用前超声脱气。
流动相采用超纯水进行配制，可以选用双重纯水蒸馏器或带有离子交换膜的纯水机所出超纯水。
优选地，在对所述供试品溶液进行苄基烟酸嗡盐含量测定之前进行系统适用性测试。
作为本发明的另一个方面，提供了一种上述苄基烟酸嗡盐的高效液相色谱分析方法在苄基烟酸嗡盐生产过程中控监测和产品质量检测中的应用。
为了进一步了解本发明的具体操作过程和分离效果，下面结合具体实施例及对比例对本发明做进一步详细的说明。
实施例所用的仪器与试剂如下：
实验仪器：
model500高效液相色谱仪(美国ssi)
laballiancehplcworkstation色谱工作站
超声清洗器ds-3120，天津东康科技有限公司
ar2140电子天平(1/10000天平)，美国奥豪斯
药品：
bpc-48供试样品：工业级，湖北吉和昌化工科技有限公司；
bpc-48对照品：bpc-48标准品，质量分数48.4％印度亚特表面助剂公司artek品牌；
甲醇/乙腈：色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；
醋酸铵：分析纯，天津市北联精细化学品开发有限公司；
其他试剂均为分析纯。
对比例所用的仪器与试剂如下：
实验仪器：
uv-2120紫外分光光度计
ar2140电子天平(1/10000天平)，美国奥豪斯
100ml容量瓶
250ml容量瓶
10ml移液管
比色皿一对
药品：
bpc-48供试样品：工业级，湖北吉和昌化工科技有限公司；
bpc-48对照品：bpc-48标准品，质量百分含量48.4％印度亚特表面助剂公司artek品牌；
其他试剂均为分析纯。
实施例一
1、苄基烟酸嗡盐的测定
1.1高效液相色谱法的色谱条件：
色谱柱：
流动相组成体积比：乙腈︰缓冲液＝10︰90；缓冲溶液为0.013mol/l的醋酸铵溶液；
流速：0.85ml/min；；
柱温：30℃；
检测器：紫外检测器；检测波长：265nm；
进样量20μl。
1.2高效液相色谱测定苄基烟酸嗡盐的方法，包括以下步骤：
缓冲液及流动相配制：精确称取1g醋酸铵溶于50ml烧杯中，转移至1000ml容量瓶中用水定容后，用0.45μm水系膜过滤，制成缓冲液待用；取0.45μm有机系膜过滤后的乙腈与缓冲液按10：90的体积比配成流动相，混合均匀，用超声清洗器脱气半小时得到流动相；
对照品溶液的制备：精确称取500mg含量为48.4％的苄基烟酸嗡盐标准品于50ml容量瓶中，用上述流动相溶解定容，使用前用0.2μm有机系膜过滤，待用，该溶液的浓度为10.0mg/ml；
系统适用性测试：精确称取苄基烟酸嗡盐标准品用上述流动相溶解，配成浓度约为1.0mg/ml的溶液，摇匀，得到系统适用性溶液；将系统适用性溶液以20μl的进样量进样进行测定，使苄基烟酸嗡盐峰与杂质峰之间的分离度大于1.5，理论板数以苄基烟酸嗡盐峰计算应不低于5000，拖尾因子不得过2.0；
供试样品溶液的制备：精确称取50mg的苄基烟酸嗡盐供试样品(工业级)于50ml容量瓶中，用上述流动相溶解定容，使用前用0.2μm有机系膜过滤，待用，该溶液的浓度为1.0mg/ml；
测定：按上述高效液相色谱法的色谱条件按外标法测定供试品溶液中苄基烟酸嗡盐的含量。
图1为实施例一苄基烟酸嗡盐对照品的高效液相色谱图，苄基烟酸嗡盐保留时间在6.7min。
2、苄基烟酸嗡盐的测定方法验证
2.1线性关系
精密量取上述对照品溶液，置于容量瓶中，流动相定容，摇匀，分别得质量浓度为0.01mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.25mg/ml、1.5mg/ml、1.75mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、5mg/ml的线性溶液。照上述色谱条件测定，每份线性溶液测定5次，取峰面积平均值，以浓度(c)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，结果见表1，苄基烟酸嗡盐对照线性图如图2所示(线性回归方程为：a＝705016c-0.6431，r2＝0.9999)。
表1苄基烟酸嗡盐对照线性关系结果
由表1可见，苄基烟酸嗡盐浓度在0.01～5mg/ml范围内，有较好的线性，相关系数r2＝0.9999。
2.2测定结果
将配制的苄基烟酸嗡盐供试样品溶液，照上述色谱条件测定，通过标准曲线计算得出：苄基烟酸嗡盐的质量浓度为0.9734mg/ml，即bpc-48质量分数＝0.9734×48.4％＝47.12％。
2.3精密度试验
精密称取苄基烟酸嗡盐标准品10mg，加溶剂(流动相)适量使溶解，定容至10ml容量瓶中，制成质量浓度为1mg/ml的含苄基烟酸嗡盐的标准溶液，摇匀，取该溶液重复进样7次，记录峰面积，计算进样精密度，结果见表2。
表2进样精密度试验结果
由表2可见，进样精密度的峰面积的rsd％为2.65，符合要求。
2.4重复性试验
精密称取苄基烟酸嗡盐供试样品10mg，加溶剂(流动相)适量使溶解，定容至10ml的容量瓶中，制成质量浓度为1mg/ml的含苄基烟酸嗡盐样品溶液，摇匀，同法共配制6份样品溶液，按上述方法测定每份样品溶液中的苄基烟酸嗡盐的含量，计算精密度，结果见表3。
表3重复性试验结果
由表3可见，重复性的rsd％为0.12，符合要求。
2.5供试样品溶液的放置稳定性
精密称取苄基烟酸嗡盐供试样品10mg，用溶剂(流动相)溶解并定容至10ml的容量瓶中，制成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，置室温下放置，分别于0h、1h、2h、6h、12h、24h进样，计算主峰含量的变化程度，结果见表4。
表4供试样品溶液的放置稳定性试验结果
由表4可见，在水溶液状态下苄基烟酸嗡盐的峰面积随时间的推移变化较小，rsd％小于8％，溶液在24h内稳定性较好。
2.6准确度——回收率试验
精密称取供试样品适量，置容量瓶中，分别以限度0.8倍(80％)、限度1.0倍(100％)、限度1.2倍(120％)的量加入苄基烟酸嗡盐对照品，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。各配制3份，照苄基烟酸嗡盐含量测定项下的色谱条件测定苄基烟酸嗡盐的含量，计算回收率及rsd，结果见表5。
表5回收率试验结果
由表5可见，苄基烟酸嗡盐的平均回收率为，rsd％为5.42，符合要求。
2.7杂质分析
通过验证，3.7分钟处出现的峰为原料烟酸，22.8分钟处出现的峰为原料氯化苄水解物苄醇，见图1所示。
2.8耐用性试验
取供试样品，分别微调流动相缓冲液ph值、波长、流速及柱温，照苄基烟酸嗡盐含量测定项下的方法测定，考察苄基烟酸嗡盐含量的变化程度，测定结果见表6。
表6耐用性试验结果
由表6可见，此色谱系统的耐用性良好，流速、流动相缓冲液ph、柱温、波长的变化对苄基烟酸嗡盐的分离及含量的测定没有明显影响。
实施例二
1、苄基烟酸嗡盐的测定
1.1高效液相色谱法的色谱条件：
色谱柱：kromasilc18，5μ，250mm×4.6mm(配有kromasil保护柱)；
流动相组成体积比：甲醇︰缓冲液＝20︰80；缓冲溶液为0.013mol/l的醋酸铵溶液；
流速：0.85ml/min；；
柱温：30℃；
检测器：紫外检测器；检测波长：265nm；
进样量20μl。
1.2高效液相色谱测定苄基烟酸嗡盐的方法，包括以下步骤：
缓冲液及流动相配制：精确称取1g醋酸铵溶于50ml烧杯中，转移至1000ml容量瓶中用水定容后，用0.45μm水系膜过滤，制成缓冲液待用；取0.45μm有机系膜过滤后的甲醇与缓冲液按20：80的体积比配成流动相，混合均匀，用超声清洗器脱气半小时得到流动相；
对照品溶液的制备：同实施例一；
系统适用性测试：精确称取苄基烟酸嗡盐标准品用上述流动相溶解，配成浓度约为1.0mg/ml的溶液，摇匀，得到系统适用性溶液；将系统适用性溶液以20μl的进样量进样进行测定，使苄基烟酸嗡盐峰与杂质峰之间的分离度大于1.5，理论板数以苄基烟酸嗡盐峰计算应不低于5000，拖尾因子不得过2.0；
供试样品溶液的制备：同实施例一；
测定：按上述高效液相色谱法的色谱条件按外标法测定供试品溶液中苄基烟酸嗡盐的含量。
图3为实施二例苄基烟酸嗡盐对照品的高效液相色谱图，苄基烟酸嗡盐保留时间在5.5min。
2、苄基烟酸嗡盐的测定方法验证
2.1线性关系
精密量取上述对照品溶液，置于容量瓶中，流动相定容，摇匀，分别得质量浓度为0.01mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.25mg/ml、1.5mg/ml、1.75mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、5mg/ml的线性溶液。照上述色谱条件测定，每份线性溶液测定5次，取峰面积平均值，以浓度(c)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，结果见表7，苄基烟酸嗡盐对照线性关系图如图4所示(线性回归方程为：a＝580397c+15785，r2＝0.9973)。
表7苄基烟酸嗡盐对照线性关系结果
由表7可见，苄基烟酸嗡盐浓度在0.01～5mg/ml范围内，有较好的线性，相关系数r2＝0.9973。
2.2测定结果
将配制的苄基烟酸嗡盐供试样品溶液，照上述色谱条件测定，通过标准曲线计算得出：苄基烟酸嗡盐的质量浓度为0.9624mg/ml，即bpc-48质量分数＝0.9624×48.4％＝46.58％。
2.3精密度试验
精密称取苄基烟酸嗡盐标准品10mg，加溶剂(流动相)适量使溶解，定容至10ml容量瓶中，制成质量浓度为1mg/ml的含苄基烟酸嗡盐的标准溶液，摇匀，取该溶液重复进样7次，记录峰面积，计算进样精密度，结果见表8。
表8进样精密度试验结果
由表8可见，进样精密度的峰面积的rsd％为1.80，符合要求。
2.4重复性试验
精密称取苄基烟酸嗡盐供试样品10mg，加溶剂(流动相)适量使溶解，定容至10ml的容量瓶中，制成质量浓度为1mg/ml的含苄基烟酸嗡盐样品溶液，摇匀，同法共配制6份样品溶液，按上述方法测定每份样品溶液中的苄基烟酸嗡盐的含量，计算精密度，结果见表9。
表9重复性试验结果
由表9可见，重复性的rsd％为1.4％，符合要求。
2.5供试样品溶液的放置稳定性
精密称取苄基烟酸嗡盐供试样品10mg，用溶剂(流动相)溶解并定容至10ml的容量瓶中，制成浓度为1mg/ml的溶液，摇匀，置室温下放置，分别于0h、1h、2h、6h、12h、24h进样，计算主峰含量的变化程度，结果见表10。
表10供试样品溶液的放置稳定性试验结果
由表10可见，在水溶液状态下苄基烟酸嗡盐的峰面积随时间的推移变化很小，溶液在24h内稳定性较好。
2.6准确度——回收率试验
精密称取供试样品适量，置容量瓶中，分别以限度0.8倍(80％)、限度1.0倍(100％)、限度1.2倍(120％)的量加入苄基烟酸嗡盐对照品，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。各配制3份，照苄基烟酸嗡盐含量测定项下的色谱条件测定苄基烟酸嗡盐的含量，计算回收率及rsd，结果见表11。
表11回收率试验结果
由表11可见，苄基烟酸嗡盐的平均回收率为，rsd％为6.46，符合要求。
2.7杂质分析
通过验证，3分钟处出现的峰为原料烟酸，19.5分钟处出现的峰为原料氯化苄水解物苄醇。
2.8耐用性试验
取供试样品，分别微调流动相缓冲液ph值、波长、流速及柱温，照苄基烟酸嗡盐含量测定项下的方法测定，考察苄基烟酸嗡盐含量的变化程度，测定结果见表12。
表12耐用性试验结果
由表12可见，此色谱系统的耐用性良好，流速、流动相缓冲液ph、柱温、波长的变化对苄基烟酸嗡盐的分离及含量的测定没有明显影响。
对比例
紫外分光光度计测定苄基烟酸嗡盐，包括以下步骤：
1、准确称取0.3000g试样，溶于蒸馏水中，转移至250ml容量瓶中室温定容，用移液管量取10ml至100ml容量瓶中，室温定容。同时制备对照品溶液。
2、设置紫外分光光度计测量范围200～300nm，以蒸馏水为空白，在259nm处测定试样及对照品的吸光度。
3、紫外分光光度计法测定结果：样品吸光度为0.586，计算得bpc-48质量百分含量为48.32％。
4、计算公式
bpc-48％＝(a样品/a对照)×(w对照×x/w样品)×100％
式中：
a样品-样品吸光度
a对照-对照品吸光度
w对照-对照品称样量，g
w样品-样品称样量，g
x-对照品质量百分含量
结论：此方法虽然能检测出bpc-48含量，但是不能分离出杂质含量，无法对苄基烟酸嗡盐的生产进行质量控制。
综上，通过实施例和对比例的分析可以看出，一方面，采用紫外分光光度计可以实现对bpc-48的检测，但是无法对生产过程的残存原料烟酸、氯化苄水解物苄醇情况进行分析，无法分离出杂质，并对其含量进行分析，无法对中控产品的杂质情况进行检测；而采用高效液相色谱可以实现这一点，通过采用本发明的色谱条件可以对样品中的苄基烟酸嗡盐和杂质进行分离，并通过对照标准品的杂质峰大小可以快速准确地看出杂质含量是否符合标准，在对苄基烟酸嗡盐分析的同时可以实现对杂质的分析，有助于做好对苄基烟酸嗡盐生产的中控。
另一方面，不同色谱柱kromasilc18和
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
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