一种检测道地中药的方法与流程

本发明涉及一种检测道地中药的方法，属于中药技术领域。

背景技术：

道地药材指经过中医临床长期应用优选出来的，在特定地域，通过特定生产过程所产的，较在其他地区所产的同种药材品质佳、疗效好，具有较高知名度的药材。药材的道地性一直是评价药材品质的独特的综合性标准。由于用传统的形态学方法很难将不同产地的中药材严格地区分鉴别开，因此近些年来随着科学技术的发展，一系列新的方法应用于道地药材的鉴别，主要包括hplc指纹图谱技术和分子生物学技术等，但是中药质量评价受到是多种因素影响(如温度、气候、光照时间、土壤、水、栽培方法等等)，现在的研评价方法基本思路仍是在西医药理思想指导下，囿于“药性唯成分论”的思维进行的物质成分寻找，试图仅从某些物质成分评价中药整体质量，忽略了其本身的整体属性，缺乏按照中医药理论的自身特点的表征指标。而且历代本草及目前大量的研究都表明,不同地区的中药的化学成分及遗传物质等方面的差异不明显,这是其道地性特征不明显,道地产区无法确认的重要原因。

popp教授在量子理论及“耗散结构理论”本质的基础上发展起来的生物系统电磁辐射行为的理论体系，描述生物辐射行为的理论体系生物光子辐射是生命系统的本质现象，作为生命系统活动过程中的产物，辐射携带有生命系统内部的完整信息。当生物系统处于激发后时，会发生延迟发光的现象，通过探测这些具有量子效应的光子特性可以获得生物系统内部的整体信息，实验研究证实，生物光子辐射检测技术能给出被测样品由内部变化及环境影响所引起的生物学效应的整体信息，提供了一个关于生物系统基本特征的综合指标，符合中医药理论的整体观念。

丹参(salviamiltiorrhizabge.)，别名紫丹参、血参、红根等，为唇形科植物，以根入药。主产四川、山东、河南、山西、河北、安徽等省，现全国大部分地区有分布。具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功效，临床上用于心脑血管、癌症、中风、肝炎等疾病的治疗及抗衰老养生保健。然而由于丹参产地较多导致质量不一，直接影响临床疗效。

目前利用生物系统的延迟发光研究中药道地性尚未见相关报道，尤其是，尚未有利用生物系统的延迟发光研究丹参道地性的相关报道。

技术实现要素：

针对上述现有技术，本发明通过利用本草文献记载的道地产区和非道地产区丹参延迟发光动力学的差异，建立了一种新的丹参道地性的鉴定方法。

本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种检测丹参道地性的方法，包括以下步骤：

(1)药品筛选：筛选公认丹参道地产地，并收集道地产地丹参和非道地产地丹参，收集不同批次的丹参中药材若干批；

(2)确定丹参延迟发光检测条件：环境温度为22～24℃，湿度为50～55％；光电倍增管制冷时间2～2.5h，制冷最低恒定温度为-23～-25℃；激发光源为白光，激发光照时间为10～12s；计数间隔时间为1s，计数量为200个；

盛放中药样品的平皿直径4～5cm，4～5g丹参样品平铺在平皿底部；丹参样品颗粒大小为80～120目；中药样品含水量控制为6.5％-8％；

(3)丹参道地性的检测：

采用超微弱发光检测系统检测后，绘制不同产地丹参的延迟发光动力学曲线；

通过对延迟发光动力学曲线进行取对数处理后进行线性拟合分析，拟合公式为y＝ax+b，获得每个地区丹参延迟发光曲线的衰减斜率和截距；

进一步通过大样本分析建立其判别范围数值，建立以道地产地丹参生物光子衰减斜率和截距作为鉴别参数，待检测丹参样品收集处理后，通过直接检测该样品的延迟发光动力学曲线，分析其斜率和截距，对比道地产地丹参鉴别参数，判断该待检测丹参样品是否为道地中药。

本发明还提供上述方法在检测丹参道地性中的应用。

与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：

利用不同产地丹参延迟发光延迟动力学差异以及对丹参延迟发光曲线的衰减斜率和截距的分析来更方便和定量地鉴别道地中药丹参。该方法灵敏度高、快速、操作简单、判别准确性高，用于区分丹参是否道地药材，评价中药材的质量，具有极大的应用潜力。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1是检测中药道地性的装置示意图。

图2是滤波片轮载体部分的示意图。

图3是丹参延迟发光动力学衰减曲线。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的，现有技术中检测丹参道地性方法存在一定的不足，为了解决如上的技术问题，本发明人经过研究发现，同一种药材丹参不同产地的延迟发光行为存在一定差异，这种差异与其生长环境、化学成分等密切相关，基于对道地丹参延迟发光行为的研究，处理延迟发光动力学衰减曲线数据，得到丹参延迟发光曲线的衰减斜率和截距；通过对衰减斜率和截距的判断，用于区分丹参是否为道地药材。

故本发明提出了一种检测丹参道地性的方法，包括以下步骤：

(1)药品筛选：筛选公认丹参道地产地，并收集道地产地丹参和非道地产地丹参，收集不同批次的丹参中药材若干批；

(2)确定丹参延迟发光检测条件：环境温度为22～24℃，湿度为50～55％；光电倍增管制冷时间2～2.5h，制冷最低恒定温度为-23～-25℃；激发光源为白光，激发光照时间为10～12s；计数间隔时间为1s,计数量为200个；

盛放中药样品的平皿直径4～5cm，4～5g丹参样品平铺在平皿底部；丹参样品颗粒大小为80～120目；样品含水量控制方式为干燥器中连续干燥16h，中药样品含水量控制为6.5％-8％；

(3)丹参道地性的检测：

采用超微弱发光检测系统检测后，绘制不同产地丹参的延迟发光动力学衰减曲线；

通过对延迟发光动力学衰减曲线进行取对数处理后进行线性拟合分析，拟合公式为y＝ax+b，获得每个地区丹参延迟发光衰减曲线的衰减斜率和截距；

进一步通过大样本分析建立其判别范围数值，建立以道地产地丹参生物光子衰减斜率和截距作为鉴别参数，待检测丹参样品收集处理后，通过直接检测该样品的延迟发光动力学衰减曲线，分析其斜率和截距，对比道地产地丹参鉴别参数，判断该待检测丹参样品是否为道地中药。

步骤(1)中，药品依据中药典籍及学术文献进行筛选。

本发明中的若干是指数量大于2或2以上。

步骤(2)中，实验发现不同的激发光源、样品的含水量、样品的颗粒大小对延迟发光有着明显的影响。为了后续实验结果的可对比性和准确性，在本发明优选的技术方案中，检测条件为：环境温度为22℃，湿度为50％；光电倍增管制冷时间2h，制冷最低恒定温度为-23℃；激发光源为白光，激发光照时间为10s；计数间隔时间为1s,计数量为200个，连续测量三次；

盛放中药样品的平皿直径5cm，5g丹参样品平铺在平皿底部；样品含水量控制方式为干燥器中连续干燥16h。

步骤(3)中，所述超微弱发光检测系统为现有技术中常规的检测系统。

本发明中所述的大样本是指样本个数为30或30以上。

能够表征中药材生物光子发射特性的参数很多，包括衰减速率、强度、统计熵、辐射光谱等，经过试验验证和分析，本发明采用丹参延迟发光衰减曲线的衰减斜率和截距能够显著的判别丹参的道地性，与其他参数相比，具有显著差异，该参数使得检测结果十分容易区分。

采用该分析方法能够直观的判别丹参是否为道地药材，无需进行相关的验证和分析，检测结果准确可靠。

本发明还提供上述方法在检测丹参道地性中的应用。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例1

一种检测丹参道地性的方法，包括以下步骤：

1)药品筛选：依据中药典籍及学术文献，筛选道地药材产地的丹参：四川中江，山东长清；非道地药材产地的丹参：安徽亳州，河南平顶山，陕西商洛，河北行唐各3批。

取供试品5g，平铺于干燥至恒重的石英平皿中，厚度不超过5mm；精密称定，打开瓶盖放置在干燥锅中(huiyu)干燥16小时。干燥结束后将瓶盖盖好，移出干燥锅，精密称定并保存备用。

2)打开实验室的空调系统，设置温度恒定为22℃，湿度恒定为rh50％。实验环境条件达到稳定后打开超微弱发光检测系统。

3)测量前将样品平铺在平皿的底部。打开样品室(或称暗室)开关，将含有样品的平皿放置到样品台上；调整位置使平皿的中心正好对着光电倍增管的探头；调整样品台的高度使样品表面距离光电倍增管的探头5cm；关闭超微弱发光检测系统样品室门并拧紧旋钮，务必保证暗室中无外界光线的干扰。

4)实验时先设置电压1256v，并打开光电倍增管高压开关；设置测量相关参数，测量间隔时间为1秒，激发时间10s，测量时间为200秒，选择激发光源为白光，滤波片轮设置参数为“allfilter”。

5)设置检测模式为“background”，检测仪器的背景噪声水平。背景噪声达到要求后，设置检测模式为(delayedluminescence)，点击开始按钮，此时激发光源处的快门(s2)开启，光电倍增管处的快门(s1)处于关闭状态，激发光照射到样品处，10s后，快门s2关闭，同时快门s1开启，光电倍增管开始检测样品的延迟发光。随着滤波片轮的转动，中药材样品延迟发光在不同波长条件下的光子强度被技术，并将数据存储于独立的excel文档中备用。每个样品测量3次。得到丹参延迟发光衰减曲线，如图3所示。

6)利用origin9.1软件，将丹参延迟发光参数进行处理，将横坐标和纵坐标取对数后画出折线图。

利用线性方程进行拟合，获取斜率和截距。通过分析道地产地丹参与非道地产地丹参生物光子衰减斜率和截距的差异，证实该方法可以作为鉴别道地产地的技术方法。

表1不同产地延迟发光衰减曲线截距和斜率

最终我们对比不同产地有效成分含量与延迟发光参数的差异。

表2不同产地丹参参数对比

从表2我们可以看出不同产地的不同丹参的有效成分含量与丹参种植区域存在着相关性，高纬度地区河南、陕西、河北、山东丹参酮iia、隐丹参酮和丹参酮i含量(以干燥品计)(％)为平均值0.55，低纬度区四川、安徽为0.19，高纬度地区河南、陕西、河北、山东丹酚酸b含量(以干燥品计)(％)含量为8.05，低纬度地区四川、安徽为6.6。两种有效成分含量高纬度产区的丹参均高于低纬度地区。同样通过分析延迟发光衰减曲线参数衰减斜率和截距我们发现高纬度地区河南、陕西、河北、山东分别为-2.13,5.09，而低纬度地区四川、安徽分别为-2.37,5.57。同时数据显示，四川、山东种植斜率及截距与其他产地存在差异，通过利用丹参延迟发光检测分析不同批次的丹参延迟发光参数、斜率和截距可以为鉴别道地中药材提供一种新的方法。

进一步通过大样本分析建立其判别范围数值，建立以道地产地丹参生物光子衰减斜率和截距作为鉴别参数，新的待测丹参样品收集处理后，通过直接检测该样品的生物光子衰减曲线，分析其斜率和截距，对比道地产地丹参鉴别范围，判断该待检测丹参样品是否为道地中药。

经过检测新的丹参样品的道地性，该方法的检测准确率高达100％。

实施例2

一种实施例1中的方法使用的检测丹参道地性的超微弱发光检测系统，如图1所示，包括激发光源1、样品室2，光电倍增管3、滤光轮4、数据处理系统5和显示器6。

其中激发光源1用于产生激发光，发射出的光线可以射入样品室2，光电倍增管3用于测量样品室2中样品受激发后发射的生物光子强度，数据处理系统5用于分析和处理光电倍增管3所测得的数据，光电倍增管3和数据处理系统电路连接，显示器6显示得到处理后的数据分析曲线。

所述激发光源上设有用于控制入射光的辐照时间的快门s1，所述光电倍增管前设有用于控制入射到光阴极的光照射时刻的快门s2，所述光电倍增管3与快门s2之间设有滤光轮4。如图2所示，滤光轮4的载体部分是一个镂空8个圆孔的金属圆盘，其中七个圆孔中分别放置gg395、gg455、gg495、gg550、rg610、rg665、rg715不同波长的长通干涉滤波片，一个圆孔为空。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。