本发明属于医疗技术领域，具体涉及一种尿液有形成分质控品的制备方法。
背景技术：
尿液分析是一项方便、常用和重要的实验室检查，对于泌尿系统感染性和非感染性疾病的筛查、辅助诊断、病程和疗效监测，以及对其他系统疾病(如糖尿病、高血压、遗传性疾病、药物不良反应等)的筛查、疗效或并发症监测都有重要意义。尿液有形成分检验是尿液分析的重要组成部分，对于临床医生了解泌尿系统各个部位的变化，对泌尿系统疾病进行定位诊断、鉴别诊断和愈后判断更具有应用价值。尿沉渣中有形成分检查中经典的方法是在显微镜下进行人工判别，但标准化人工显微镜尿有形成分检查操作繁琐、速度慢，在当前临床检查的标本不断增加的背景下，越来越多的医院采用自动化有形成分分析仪进行尿液有形成分的筛查，采用合适的质控品对检测仪器进行质量控制是检测仪器运行状态、获得准确结果的重要条件。
目前临床上所用尿液有形成分质控品主要有日本sysmex公司ufⅱcontrol尿有形成分检测质控品和美国bio-rad公司尿质控品，但是价格昂贵。其中sysmex公司ufⅱcontrol尿有形成分检测质控品采用不同大小的微粒可代表红细胞、白细胞、上皮细胞、管型和细菌，仅适用于sysmex公司的流式细胞术原理的尿有形成分分析仪，不适用于显微镜检查和采用机器视觉原理的尿液有形成分分析系统；美国bio-rad公司的尿质控品所提供的可供检测的有形成分少，仅有红细胞、白细胞和结晶成分，缺少对临床上有重要意义的管型成分。因此，需要对尿有形成分质控品进行研究开发。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术的缺点，提供了一种尿液有形成分质控品的制备方法，该方法制备过程简单，成品含量较为全面、准确、稳定，并且该质控品能够适用于各种分析仪的应用中，应用范围较广。
本发明的具体技术方案是：
一种尿液有形成分质控品的制备方法，关键点是，所述的制备方法包括以下步骤：
a、分别取edta抗凝的血液、白细胞大于50个/高倍视野的尿液、管型大于30个/低倍视野的尿液、鳞状上皮细胞大于30个/低倍视野的尿液，上述各成分的体积比为(0.02-0.03)：(20-40)：(20-40)：(20-40)，随后在各成分中加入稀释液，血液与其稀释液添加量的体积比为(0.02-0.03)：(42-52)，其他尿液与各自稀释液添加量的体积比为(2-4)：(1-3)，添加稀释液后混匀并离心去除上清液，然后将剩余物洗涤3-5次，随后加入2％-3％的戊二醇，血液与其戊二醇添加量的体积比为(0.02-0.03)：(3-7)，其他尿液与各自戊二醇添加量的体积比为(20-40)：(3-7)，随后向各成分中添加稀释液至离心前的体积，混匀后振荡1-1.5h，2-6℃下保存8-24h后备用，分别形成a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液；
选择尿液真菌培养时在科马嘉念珠菌显色鉴别培养基上生长的白色念珠菌菌落4-6个，在所选菌落中加入生理盐水，生理盐水和所选菌落的总体积在a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液中最小值和最大值之间，加入生理盐水后混匀并进行离心去除上清液，然后将剩余物洗涤3-5次，随后向剩余物中加入8％-12％的甲醛生理盐水至离心前的体积，2-6℃下保存8-24h后备用，形成e溶液；
b、选取尿蛋白、潜血和尿有形成分正常的尿液，进行高压灭菌，随后自然冷却至常温备用，形成f溶液；
c、将a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理盐水洗涤2-4次，随后各取适量与f溶液混合至浓度分别为20-25个/μl、15-25个/μl、5-10个/μl、3-6个/μl、5-10个/μl的a1溶液、b1溶液、c1溶液、d1溶液以及e1溶液，最后将各溶液进行均匀混合后形成低值质控品原液；
将a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理盐水洗涤2-4次，随后各取适量与f溶液混合至浓度分别为200-250个/μl、30-40个/μl、15-30个/μl、10-15个/μl、20-30个/μl的a2溶液、b2溶液、c2溶液、d2溶液以及e2溶液，最后将各溶液进行均匀混合后形成高值质控品原液；
d、向低值质控品原液和高值质控品原液中分别加入庆大霉素，加入量为2-4mg/100ml,混匀后分别加入两性霉素b，加入量为0.2-0.3mg/100ml，混匀后分别形成低值质控品成品和高值质控品成品。
所述的步骤a中，所述稀释液为sysmex血液分析仪用的稀释液。
所述的步骤a中，edta抗凝的血液为edta抗凝的健康成人全血，选取20-30μl，白细胞大于50个/高倍视野的尿液、管型大于30个/低倍视野的尿液、鳞状上皮细胞大于30个/低倍视野的尿液各选取20-40ml，各成分中添加稀释液后的体积均为50ml，所选戊二醇为2.5％且添加量为5ml；所述白色念珠菌菌落中加入生理盐水后的体积为50ml，所选甲醛生理盐水为10％。
所述的步骤b中，所述尿液分别取自尿蛋白、潜血和尿有形成分正常且尿液ph值为6-7的至少5名健康者，均匀混合后进行高压灭菌。
本发明的有益效果是：本发明通过血液、不同成分尿液以及尿液真菌培养时在科马嘉念珠菌显色鉴别培养基上生长的白色念珠菌菌落的制备和混合来形成质控品原液，所得原液中的成分较为精准，工艺过程简单，成品的成分精准性和稳定性较高，合格率较高，采用本发明中的制备方法制备的质控品包括红细胞、白细胞、上皮细胞、管型和真菌五种常见成分，4-8℃条件下保存的稳定期至少可达60天以上，同时，该质控品可以适用于显微镜检查、机器视觉原理的尿液有形成分分析仪检查以及流式细胞术原理的尿液有形成分分析仪检查，适用范围广，避免了各个设备的不通用性。
具体实施方式
本发明涉及一种尿液有形成分质控品的制备方法，该制备方法选取不同条件的血液、尿液以及菌落，并分别进行稀释、离心以及振荡等操作，形成质控品的制备原料，随后用健康者尿液进行混合形成质控品原液，随后进行庆大霉素和两性霉素b的配比处理，最后形成质控品成品，具体的操作步骤通过具体实施例进行展示。
具体实施例，所述的制备方法包括以下步骤：
a、分别取edta抗凝的健康成人全血20-30μl以及白细胞大于50个/高倍视野的尿液、管型大于30个/低倍视野的尿液、鳞状上皮细胞大于30个/低倍视野的尿液各20-40ml，分别加入不同的带帽离心管中，各个离心管中加入稀释液至总体积为50ml并进行混合，所述稀释液为sysmex血液分析仪用的稀释液，混匀后离心去除上清液并洗涤3-5次，然后加入2.5％的戊二醇5ml，随后加入稀释液稀释至总体积为50ml，所述稀释液为sysmex血液分析仪用的稀释液，充分混匀后振荡1-1.5h，4℃下保存8-24h后备用，分别形成a溶液、b溶液、c溶液以及d溶液；
选择尿液真菌培养时在科马嘉念珠菌显色鉴别培养基上生长的绿色菌落4-6个，该绿色菌落为白色念珠菌菌落，将所选菌落加入带帽离心管中，离心管中加入生理盐水至总体积为50ml并进行混合，混匀后离心去除上清液并洗涤3-5次，随后加入10％的甲醛生理盐水至总体积为50ml并混合均匀，4℃下保存8-24h后备用，形成e溶液；
b、选取尿蛋白、潜血和尿有形成分正常且尿液ph值为6-7的5名健康者尿液各200ml，共计1000ml，均匀混合后进行高压灭菌，随后自然冷却至常温备用，形成f溶液；
c、将a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理盐水洗涤3次，随后各取适量与100ml的f溶液混合至浓度分别为20-25个/μl、15-25个/μl、5-10个/μl、3-6个/μl、5-10个/μl，形成a1溶液、b1溶液、c1溶液、d1溶液以及e1溶液，最后将各溶液进行均匀混合后形成低值质控品原液；
将a溶液、b溶液、c溶液、d溶液以及e溶液用生理盐水洗涤3次，随后各取适量与100ml的f溶液混合至浓度分别为200-250个/μl、30-40个/μl、15-30个/μl、10-15个/μl、20-30个/μl，形成a2溶液、b2溶液、c2溶液、d2溶液以及e2溶液，最后将各溶液进行均匀混合后形成高值质控品原液；
d、向500ml低值质控品原液和500ml高值质控品原液中分别加入庆大霉素10-20mg，均匀混合后，再分别加入两性霉素b1-1.5mg，混匀后分别形成低值质控品成品和高值质控品成品，最后将质控品成品以2-3ml/份装入高压灭菌后的塑料瓶中，4-8℃条件下保存。
本发明中制备方法制备的质控品成品适用于显微镜检查、采用机器视觉原理的尿液有形成分分仪、流式细胞术原理的尿有形成分分析仪，质控品成分包括红细胞、白细胞、上皮细胞、管型和真菌五种常见成分，4-8℃冰箱保存的稳定期至少可达60天以上。
该发明制备得到的质控品成品，在第60天时，经sysmexuf1000尿有形成分检测仪检测，重复20次，低值质控品和高值质控品中各成分的不精密度分别如下：
红细胞22个/μl，cv为8.05％；白细胞18个/μl，cv为15.11％；管型6个/μl，cv为27.86％；上皮细胞8个/μl，cv为15.17％；真菌8个/μl，cv为11.31％；
红细胞232个/μl，cv为4.88％；白细胞34个/μl，cv为8.12％；管型15个/μl，cv为17.63％；上皮细胞19个/μl，cv为9.82％；真菌8个/μl，cv为8.89％；
两种浓度的质控品重复性较好，符合检测需求。