一次性使用的ELISA试剂盒及其使用方法与流程

文档序号：14718583发布日期：2018-06-16 07:36阅读：658来源：国知局

本发明涉及生物学研究和医学体外诊断技术领域，具体说是生物医药中的体外诊断试剂盒及其使用方法，尤指一种一次性使用的ELISA试剂盒及其使用方法。

背景技术：

蛋白作为生命有机体的基本组成部分，其表达与否以及表达量的改变，均会影响到生命体的正常功能活动。因此，在生物学研究和医学领域内，通过对蛋白的检测分析，考察生命有机体的功能活动，是研究者们和医疗工作者们经常采用的方法。比如在炎症反应过程中对细胞因子的检测分析、乙肝五项的检测分析等。

经过多年的发展，目前已有的蛋白检测分析方法多种多样，比如western blot法(蛋白质印迹法)、毛细管电泳法、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)等。其中，酶联免疫吸附法由于费用较少、检测灵敏度高等特点，是蛋白检测分析中较为常用的方法。

酶联免疫吸附法经济实惠，常采用的是手动孔板操作的实验方法，需进行多次的试剂添加和反应腔清洗的操作，实验过程略显繁琐，为保证实验的准确性，试剂的添加量需要严格控制。为解决这些问题，人们发明了用于酶联免疫吸附实验的机器。虽然自动化的仪器解决了过程繁琐的问题，保证了实验的准确性，但同时也带来了一些其他问题：①需要配备专门的自动化仪器，特别是用于试剂的添加和反应腔的清洗；②自动化的仪器通量大，价格贵，远超过一般的科研实验室或者中小型医院的经济承受能力和市场需求；③多数自动化的仪器，其清洗采用可重复使用的针头，易造成交叉污染。

技术实现要素：

目前已有的ELISA实验产品存在一些不足，比如：基于孔板的手动操作繁琐有误差；自动化仪器操作对仪器本身的要求；仪器价格以及自动化清洗过程中可能出现的交叉污染，这些都会给实验人员带来不便。

考虑到上述问题而设计了本发明，具体的讲本发明的目的是提供一种一次性使用的ELISA试剂盒及其使用方法，该试剂盒操作简便，价格便宜，可避免交叉污染，具备简便、经济和卫生的特点。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

一次性使用的ELISA试剂盒包括：反应腔室1和存储腔室2；

所述反应腔室1包括封装上盖3和腔室5，封装上盖3的圆周边缘设有条形纹理4，封装上盖3的中心处为向下伸出的圆柱状腔室5，腔室5的侧壁设有进液孔7和废液出液孔8，腔室5的底部为包被有目标蛋白捕获抗体的平面6；

所述存储腔室2包括嵌套腔9、若干存储腔体10和若干废液腔11，存储腔体10位于废液腔11的上层，存储腔体10和废液腔11均沿圆周均匀排布，向下伸出的圆柱状腔室5紧密嵌套在嵌套腔9内；每个存储腔体10的内侧壁均设有一出液孔12，每个废液腔11的内侧壁均设有一废液进液孔13，所述出液孔12与进液孔7对应，废液出液孔8与废液进液孔13对应；

所述存储腔体10中预装有实验试剂和清洗液。

在上述方案的基础上，所述条形纹理4用于方便旋转腔室5。

在上述方案的基础上，所述实验试剂包括样品溶液、酶标抗体试剂和显色液。

在上述方案的基础上，所述样品溶液中含有待检测目标蛋白。

在上述方案的基础上，所述捕获抗体能特异性捕获待检测目标蛋白。

在上述方案的基础上，所述酶标抗体试剂与待检测目标蛋白特异性结合。

在上述方案的基础上，所述存储腔体10的数量为8个，依次为：样品加入腔室14、清洗液一存储腔室15、清洗液二存储腔室16、酶标抗体存储腔室17、清洗液三存储腔室18、清洗液四存储腔室19、清洗液五存储腔室20和显色液存储腔室21；所述废液腔11的数量为8个，依次为：样品废液存储腔室22、清洗液一废液存储腔室23、清洗液二废液存储腔室24、酶标抗体废液存储腔室25、清洗液三废液存储腔室26、清洗液四废液存储腔室27、清洗液五废液存储腔室28和显色终止液存储腔室29。

在上述方案的基础上，所述显色终止液存储腔室29中预装有显色终止液。

在上述方案的基础上，所述存储腔体10与废液腔11在水平投影面上错开22.5°的角度。

本发明专利的一次性使用的ELISA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

1.一次性使用的ELISA试剂盒的起始状态：样品加入腔室14的出液孔12与腔室5的进液孔7处于连通状态，其他腔室密封；

2.将含有待检测目标蛋白的样品溶液，经样品加入腔室14加入腔室5中；

3.将试剂盒放置于37℃的环境中，孵育30分钟，使样品溶液与包被有目标蛋白捕获抗体的平面6充分接触；

4.孵育完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与样品废液存储腔室22的废液进液孔13连通，样品废液流入样品废液存储腔室22；

5.样品废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与清洗液一存储腔室15的出液孔12连通，清洗液一流入腔室5，然后将试剂盒放入摇床中轻微摇晃5分钟；

6.清洗液一清洗完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与清洗液一废液存储腔室23的废液进液孔13连通，清洗液一的废液流入清洗液一废液存储腔室23；

7.清洗液一的废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与清洗液二的存储腔室16的出液孔12连通，清洗液二流入腔室5，然后将试剂盒放入摇床中轻微摇晃5分钟；

8.清洗液二清洗完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与清洗液二废液存储腔室24的废液进液孔13连通，清洗液二的废液流入清洗液二废液存储腔室24；

9.清洗液二的废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与酶标抗体存储腔室17的出液孔12连通，酶标抗体流入腔室5；

10.将试剂盒放置于37℃的环境中，孵育30分钟；

11.孵育完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与酶标抗体废液存储腔室25的废液进液孔13连通，酶标抗体废液流入酶标抗体废液存储腔室25；

12.酶标抗体废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与清洗液三的存储腔室18的出液孔12连通，清洗液三流入腔室5，然后将试剂盒放入摇床中轻微摇晃5分钟；

13.清洗液三清洗完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与清洗液三废液存储腔室26的废液进液孔13连通，清洗液三的废液流入清洗液三废液存储腔室26；

14.清洗液三废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与清洗液四的存储腔室19的出液孔12连通，清洗液四流入腔室5，然后将试剂盒放入摇床中轻微摇晃5分钟；

15.清洗液四清洗完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与清洗液四废液存储腔室27的废液进液孔13连通，清洗液四的废液流入清洗液四废液存储腔室27；

16.清洗液四废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与清洗液五的存储腔室20的出液孔12连通，清洗液五流入腔室5，然后将试剂盒放入摇床中轻微摇晃5分钟；

17.清洗液五清洗完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与清洗液五废液存储腔室28的废液进液孔13连通，清洗液五的废液流入清洗液五废液存储腔室28；

18.清洗液五的废液流出后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的进液孔7与显色液存储腔室21的出液孔12连通，显色液流入腔室5；

19.将试剂盒放置于37℃的环境中，孵育10分钟；

20.孵育完成后，将腔室5顺时针旋转22.5°，使腔室5的废液出液孔8与显色终止液存储腔室29的废液进液孔13连通，显色液流入显色终止液存储腔室29；

21.显色液流入显色终止液存储腔室29与显色终止液发生反应，终止显色反应，将腔室5顺时针旋转22.5°，封存显色结果，进行后续的光学检测。

有益效果：

一种一次性使用的ELISA试剂盒，在设有进液孔和废液出液孔的可旋转空心圆柱状反应腔室的外围，嵌套带有预装试剂存储腔和废液存储腔的存储腔室。在存储腔体中预装有实验试剂和清洗液，通过旋转反应腔室，依次进行试剂添加和清洗操作，按照酶联免疫吸附实验的标准流程完成整个实验。

所述ELISA试剂盒操作简便，价格便宜，可避免交叉污染，具备简便、经济和卫生的特点。

附图说明

本发明有如下附图：

图1本发明的整体结构图。

图2反应腔室的结构图。

图3反应腔室的局部剖视图。

图4存储腔室的结构图。

图5存储腔室的局部剖视图。

图6存储腔体的腔室布局示意图。

图7废液腔的腔室布局示意图。

附图标记：1、反应腔室2、存储腔室3、封装上盖4、条形纹理5、腔室6、包被有目标蛋白捕获抗体的平面7、进液孔8、废液出液孔9、嵌套腔10、存储腔体11、废液腔12、出液孔13、废液进液孔14、样品加入腔室15、清洗液一存储腔室16、清洗液二存储腔室17、酶标抗体存储腔室18、清洗液三存储腔室19、清洗液四存储腔室20、清洗液五存储腔室21、显色液存储腔室22、样品废液存储腔室23、清洗液一废液存储腔室24、清洗液二废液存储腔室25、酶标抗体废液存储腔室26、清洗液三废液存储腔室27、清洗液四废液存储腔室28、清洗液五废液存储腔室29、显色终止液存储腔室。

具体实施方式

以下结合附图1-7对本发明作进一步详细说明。

如图1所示，本发明专利提供了一种一次性使用的ELISA试剂盒，该试剂盒可方便用于蛋白的ELISA检测。为实现此目的，本发明所述的一次性使用的ELISA试剂盒包括：一个可旋转空心圆柱状反应腔室1和一个带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2。可旋转空心圆柱状反应腔室1可紧密嵌套在带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2内，并且可作为带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2的封装上盖。

根据本发明的另一方面，本发明专利的一次性使用的ELISA试剂盒的可旋转空心圆柱状反应腔室1结构如图2和3所示，包括：可作为带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2的封装上盖3，封装上盖3的圆周边缘带有便于旋转的条形纹理4，中心为圆柱状腔室5，腔室5的底部为包被有目标蛋白捕获抗体的平面6。实验试剂或清洗液通过进液孔7进入腔室5，反应或清洗完成后，经废液出液孔8流出。

根据本发明的另一方面，本发明专利的一次性使用的ELISA试剂盒的带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2如图4和5所示，包括：能紧密嵌套可旋转空心圆柱状反应腔室1的嵌套腔9，存储实验试剂和清洗液的存储腔体10，废液腔11，出液孔12以及废液进液孔13。

根据本发明的另一方面，本发明专利的一次性使用的ELISA试剂盒的带有预装试剂存储腔及废液存储腔的存储腔室2的腔室布局如图6和7所示。上层为存储实验试剂和清洗液的存储腔体10，共有7个，再加上一个样品加入腔室14，总共是8个腔室，每个腔室都配有一个出液孔12，8个腔室沿圆周均匀排布，依次为：样品加入腔室14，清洗液一存储腔室15，清洗液二存储腔室16，酶标抗体存储腔室17，清洗液三存储腔室18，清洗液四存储腔室19，清洗液五存储腔室20，显色液存储腔室21。下层为存储废液的废液腔11，共有7个，再加上一个显色终止液存储腔室29，总共是8个腔室，每个腔室都配有一个废液进液孔13，8个腔室沿圆周均匀排布，与上层的腔室在水平投影面上错开22.5°的角度，依次为：样品废液存储腔室22，清洗液一废液存储腔室23，清洗液二废液存储腔室24，酶标抗体废液存储腔室25，清洗液三废液存储腔室26，清洗液四废液存储腔室27，清洗液五废液存储腔室28，显色终止液存储腔室29。

根据本发明的另一方面，本发明专利的一次性使用的ELISA试剂盒的使用方法如下：