本发明属于药物分析
技术领域：
，涉及检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的方法，更具体地涉及采用高效液相色谱检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的手性纯度、异构体含量、ee值的方法。
背景技术：
：3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体--(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，是生产阿瑞匹坦、福沙匹坦的重要中间体，其手性纯度、异构体含量、ee值直接影响阿瑞匹坦、福沙匹坦的手性纯度、异构体含量、ee值，而阿瑞匹坦、福沙匹坦的手性纯度直接影响药物疗效，因此(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的检测是异常重要的。(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的化学式为式ⅰ：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱检测法具有分离能力好、灵敏度高、分析速度快和操作方便等优点，广泛用于化工和医药等领域的分离。目前，还未发现(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的异构体及手性纯度检测方法的相关报导，为了加强(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇质量控制，有必要研发一种简便、准确、快速、可靠的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的高效液相检测方法。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种简便、准确、快速、可靠的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的高效液相检测方法，使(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇及(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇实现有效分离，从而准确地检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的手性异构体含量。本发明采用的技术方法是：一种检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，置于同一容量瓶中，用流动相溶液配置成每毫升各含1mg的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取供试品适量，用流动相溶液配制成浓度为1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，计算供试品溶液中手性异构体的含量。供试品溶液制备具体为：取代检测的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，采用积比为950-1100:12-25的正己烷和异丙醇混合液作为溶剂，配制成浓度大约为1mg/ml的溶液。色谱图中，出峰顺序依次为(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，其分离度应大于2.0，优选的分离度为3-5。测定过程，梯度为等度梯度，运行时间一般为20min左右，供试品溶液中如有与(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇峰保留时间一致的峰，按峰面积归一化法计算。优选的，所述流动相溶液为体积比为950-1100:12-25的正己烷和异丙醇混合液。优选的，步骤3)中，所述高效液相色谱条件为：色谱柱采用chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为25-35℃，以正己烷和异丙醇的混合溶剂为流动相，流动相流速为0.7-1.3ml/min，进样量为5-20ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为210-230nm。优选的，步骤4)中，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量。优选的，chiralcelod-h色谱柱的尺寸为4.6mm(长度)*250mm(内径)*5μm(填料粒径)。优选的，流动相中，正己烷和异丙醇的体积比为950-1100:12-25。优选的，流动相中，正己烷和异丙醇的体积比为1000:20。优选的，(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的结构为：本发明的有益效果是：本发明采用高效液相色谱检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的手性纯度、异构体含量、ee值，该高效液相检测方法简便、准确、快速、可靠，稳定，能使(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇及(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇实现有效分离，更好地控制(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的质量。附图说明图1为实施例1中系统适应性溶液的高效液相色图谱，其中，出峰顺序为(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇、(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇；图2为实施例1中供试品溶液的色谱图。具体实施方式取3批同一生产规格指令生产的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇产品，按照实施例1-3中的检测方法进行检测，采用面积归一化法进行手性纯度及对应异构体计算。实施例1一种检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，置于同一容量瓶中，用体积比为950:12的正己烷和异丙醇混合液配置成每毫升各含1mg的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取代检测的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇适量，用体积比为1950:12的正己烷和异丙醇混合液配制成浓度为1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中高效液相色谱条件设定为为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为25℃，以体积比为950:12的正己烷和异丙醇的混合溶剂为流动相，流动相流速为0.7ml/min，进样量为5ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为220nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量。其中，图1为实施例1中系统适应性溶液的高效液相色图谱，其中，出峰顺序为(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇、(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇；图2为实施例1中供试品溶液的色谱图，表1为实施例1中供试品溶液的色谱图中的具体峰表，表2为供试品(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇溶液中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。表1实施例1中供试品溶液的色谱图中的峰表峰#保留时间理论塔板#拖尾因子分离度面积高度面积％111.76017539.4931.0910.0009489670280.865213.60812646.2041.2444.4031087261758999199.135总计10967512597091100.000实施例2一种检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，置于同一容量瓶中，用体积比为1000:20的正己烷和异丙醇混合液配置成每毫升各含1mg的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取代检测的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇适量，用体积比为1000:20的正己烷和异丙醇混合液配制成浓度为1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中高效液相色谱条件设定为为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为30℃，以体积比为1000:20的正己烷和异丙醇的混合溶剂为流动相，流动相流速为1ml/min，进样量为10ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为210nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量。其中所得结果如表2所示，表2为(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇溶液中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。实施例3一种检测(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，置于同一容量瓶中，用体积比为1100:25的正己烷和异丙醇混合液配置成每毫升各含1mg的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇和(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取代检测的(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇适量，用体积比为1100:25的正己烷和异丙醇混合液配制成浓度为1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中高效液相色谱条件设定为为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为35℃，以体积比为1100:25的正己烷和异丙醇的混合溶剂为流动相，流动相流速为1.3ml/min，进样量为20ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为230nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量。其中所得结果如表2所示，表2为(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇溶液中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。表2实施例1-3中所测定得到的手性纯度、异构体含量和ee值批号分离度理论板数手性纯度异构体含量ee值实施例14.4031264699.13％0.87％98.26％实施例24.4631285399.45％0.55％98.90％实施例34.3671236599.29％0.71％98.58％该高效液相检测方法简便、准确、快速、可靠，稳定，重复性高，能有效分离(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇及(s)-3,5-双三氟甲基苯乙醇，更好地控制(r)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的质量。当前第1页12